1. Щодо виробництва пробірок для відбору вірусів
Пробірки для відбору вірусів належать до медичних виробів. Більшість вітчизняних виробників зареєстровані як продукти першого класу, і лише деякі компанії зареєстровані як продукти другого класу. Нещодавно, щоб задовольнити надзвичайні потреби Уханя та інших місць, багато компаній скористалися «надзвичайним каналом» «Подайте заявку на отримання дозволу на реєстрацію першого класу». Пробірка для відбору вірусів складається з тампона для відбору проб, розчину для консервації вірусів та зовнішньої упаковки. Оскільки немає єдиного національного чи галузевого стандарту, продукція різних виробників дуже різна.
1. Тампон для відбору проб: Тампон для відбору проб безпосередньо контактує з місцем відбору проб, а матеріал головки для відбору проб тісно пов'язаний з подальшим виявленням. Головка тампона для відбору проб повинна бути виготовлена з поліестерового (ПЕ) синтетичного волокна або району (штучного волокна). Не можна використовувати губку з альгінатом кальцію або дерев'яні палички (включаючи бамбукові палички), а матеріал головки тампона не може бути з бавовняних виробів. Оскільки бавовняне волокно має сильну адсорбцію білка, його нелегко елюювати в наступний розчин для зберігання; а коли дерев'яна або бамбукова паличка, що містить альгінат кальцію та дерев'яні компоненти, зламана, замочування в розчині для зберігання також адсорбує білок і навіть може пригнічувати подальшу реакцію ПЛР. Рекомендується використовувати синтетичні волокна, такі як ПЕ волокно, поліефірне волокно та поліпропіленове волокно, для матеріалу головки тампона. Натуральні волокна, такі як бавовна, не рекомендуються. Нейлонові волокна також не рекомендуються, оскільки нейлонові волокна (подібно до головок зубних щіток) погано поглинають воду. Це призводить до недостатнього об'єму проби, що впливає на швидкість виявлення. Губка з альгінатом кальцію заборонена для використання з матеріалу для тампона! Ручка тампона буває двох типів: зламана та вбудована. Зламаний тампон після відбору проб поміщають у пробірку для зберігання, а кришку пробірки ламають після того, як її зламали біля головки для відбору проб; вбудований тампон безпосередньо поміщає тампон для відбору проб у пробірку для зберігання після відбору проб, а кришку пробірки для зберігання вбудовують. Вирівняйте маленький отвір з верхньою частиною ручки та затягніть кришку пробірки. Порівнюючи два методи, останній є відносно безпечним. Коли зламаний тампон використовується разом із пробіркою для зберігання меншого розміру, це може призвести до розбризкування рідини в пробірці, якщо він розіб'ється, і слід звернути повну увагу на ризик забруднення, спричиненого неправильним використанням продукту. Рекомендується використовувати порожнисту екструдовану трубку з полістиролу (PS) або інжекційну трубку з поліпропілену (PP) для гофрування як матеріал ручки тампона. Незалежно від того, який матеріал використовується, не можна додавати добавки альгінату кальцію; дерев'яні або бамбукові палички. Коротше кажучи, тампон для відбору проб повинен забезпечувати кількість відібраної проби та кількість вивільненої проби, а вибрані матеріали не повинні містити речовин, які впливають на подальше тестування.
2. Розчин для консервації вірусів: На ринку широко використовуються два види розчинів для консервації вірусів: один – це розчин для підтримки вірусів, модифікований на основі транспортного середовища, а інший – це модифікований розчин для екстракції лізату нуклеїнових кислот.
Основним компонентом першого є основне середовище для культивування Ігла (MEM) або збалансоване сіль Хенка, до якого додаються солі, амінокислоти, вітаміни, глюкоза та білок, необхідні для виживання вірусу. У цьому розчині для зберігання як індикатор та розчин використовується феноловий червоний натрієва сіль. Коли значення pH становить 6,6-8,0, розчин має рожевий колір. До розчину для консервації додаються необхідні глюкоза, L-глутамін та білок. Білок подається у формі фетальної бичачої сироватки або бичачого сироваткового альбуміну, що може стабілізувати білкову оболонку вірусу. Оскільки розчин для консервації багатий на поживні речовини, він сприяє виживанню вірусу, а також сприяє росту бактерій. Якщо розчин для консервації забруднений бактеріями, вони розмножуються у великих кількостях. Вуглекислий газ у його метаболітах призведе до зниження pH розчину для консервації з рожевого на жовтий. Тому більшість виробників додають антибактеріальні інгредієнти до своїх рецептур. Рекомендованими антибактеріальними засобами є пеніцилін, стрептоміцин, гентаміцин та поліміксин B. Азид натрію та 2-метил не рекомендуються. Інгібітори, такі як 4-метил-4-ізотіазолін-3-он (MCI) та 5-хлор-2-метил-4-ізотіазолін-3-он (CMCI), оскільки ці компоненти впливають на реакцію ПЛР. Оскільки зразок, отриманий за допомогою цього розчину для консервації, є по суті живим вірусом, оригінальність зразка може бути максимально збережена, і його можна використовувати не лише для екстракції та виявлення нуклеїнових кислот вірусу, але й для культивування та виділення вірусів. Однак слід зазначити, що при використанні для виявлення екстракцію та очищення нуклеїнових кислот необхідно проводити після інактивації.
Інший вид розчину для зберігання, приготованого на основі лізату екстракції нуклеїнових кислот, основними компонентами якого є збалансовані солі, хелатний агент ЕДТА, сіль гуанідину (така як ізотіоціанат гуанідину, гідрохлорид гуанідину тощо), аніонна поверхнево-активна речовина (така як додекансульфат натрію), катіонні поверхнево-активні речовини (такі як оксалат тетрадецилтриметиламонію), фенол, 8-гідроксихінолін, дитіотреїтол (DTT), протеїназа К та інші компоненти. Цей розчин для зберігання призначений для безпосереднього розщеплення вірусу, щоб вивільнити нуклеїнову кислоту та видалити РНКазу. Якщо він використовується лише для RT-PCR, він більш підійде, але лізат може інактивувати вірус. Такий зразок не можна використовувати для розділення вірусних культур.
Як хелатний агент для іонів металів, що використовується в розчині для консервації вірусу, рекомендується використовувати солі ЕДТА (такі як дикалій етилендіамінтетраоцтова кислота, динатрій етилендіамінтетраоцтова кислота тощо), і не рекомендується використовувати гепарин (такий як натрій гепарин, літій гепарин), щоб не вплинути на виявлення ПЛР.
3. Пробірка для зберігання: Матеріал пробірки для зберігання слід вибирати ретельно. Існують дані, що поліпропілен (поліпропілен) пов'язаний з адсорбцією нуклеїнових кислот, особливо при високій концентрації іонів, тому поліетилен (поліетилен) є більш кращим, ніж поліпропілен (поліпропілен). ДНК/РНК легко захоплювати. Для зберігання ДНК/РНК більше підходять контейнери з поліетилен-пропіленового полімеру (поліаломер) та деякі спеціально оброблені поліпропіленові (поліпропіленові) пластикові контейнери. Крім того, при використанні крихкого тампона слід вибирати контейнер висотою більше 8 см, щоб запобігти розбризкуванню та забрудненню вмісту при розбитті тампона.
4. Вода для розчину для виробничого консервування: Ультрачисту воду, що використовується для розчину для виробничого консервування, слід фільтрувати через ультрафільтраційну мембрану з молекулярною масою 13 000, щоб забезпечити видалення полімерних домішок з біологічних джерел, таких як РНКаза, ДНКаза та ендотоксин, і звичайне очищення не рекомендується. Вода або дистильована вода.
2. Використання пробірок для відбору вірусів
Відбір проб за допомогою пробірки для вірусу в основному поділяється на відбір проб з ротоглотки та відбір проб з носоглотки:
1. Взяття зразків з ротоглотки: Спочатку натисніть на язик за допомогою депресора для язика, потім просуніть головку тампона для взяття зразків у горло, щоб протерти двосторонні глоткові мигдалики та задню стінку глотки, і протріть задню стінку глотки з легким зусиллям, уникаючи дотику до язика.
2. Взяття проби з носоглотки: виміряйте відстань від кінчика носа до мочки вуха за допомогою тампона та позначте пальцем, введіть тампон для взяття проби в носову порожнину у напрямку вертикального положення носа (обличчя), тампон повинен простягатися щонайменше на половину довжини мочки вуха до кінчика носа, залиште тампон у носі на 15-30 секунд, обережно поверніть 3-5 разів та витягніть тампон.
З методу використання неважко зрозуміти, чи це мазок з ротоглотки, чи з носоглотки, адже відбір проб є технічним завданням, яке є складним та забрудненим. Якість зібраного зразка безпосередньо пов'язана з подальшим виявленням. Якщо зібраний зразок має низьке вірусне навантаження, легко отримати хибнонегативні результати, що ускладнює підтвердження діагнозу.
Час публікації: 21 червня 2020 р.
