1. Rreth prodhimit të tubave të marrjes së mostrave të virusit
Tubat e marrjes së mostrave të virusit i përkasin produkteve të pajisjeve mjekësore. Shumica e prodhuesve vendas janë të regjistruar sipas produkteve të klasit të parë, dhe pak kompani janë të regjistruara sipas produkteve të klasit të dytë. Kohët e fundit, për të përmbushur nevojat emergjente të Wuhan-it dhe vendeve të tjera, shumë kompani kanë ndjekur "kanalin e emergjencës" "Aplikoni për lejen e regjistrimit të klasit të parë". Tuba e marrjes së mostrave të virusit përbëhet nga një tampon për marrjen e mostrave, tretësirë për ruajtjen e virusit dhe paketim i jashtëm. Meqenëse nuk ka një standard të unifikuar kombëtar ose standard industrie, produktet e prodhuesve të ndryshëm ndryshojnë shumë.
1. Shtupa për marrjen e mostrave: Shtupa për marrjen e mostrave bie në kontakt direkt me vendin e marrjes së mostrave, dhe materiali i kokës së marrjes së mostrave është i lidhur ngushtë me zbulimin pasues. Koka e shtupës për marrjen e mostrave duhet të jetë prej fibre sintetike poliesteri (PE) ose prej viskoze artificiale (fibër artificiale). Nuk mund të përdoren sfungjerë prej alginati kalciumi ose shkopinj druri (përfshirë shkopinjtë e bambusë), dhe materiali i kokës së shtupës nuk mund të jetë prej pambuku. Meqenëse fibra e pambukut ka një adsorbim të fortë të proteinave, nuk është e lehtë të eluohet në tretësirën e ruajtjes pasuese; dhe kur një shkop druri ose shkop bambuje që përmban alginat kalciumi dhe përbërës druri është i thyer, zhytja në tretësirën e ruajtjes do të adsorbojë gjithashtu proteinat, dhe madje mund të pengojë reaksionin pasues të PCR. Rekomandohet të përdoren fibra sintetike si fibra PE, fibra poliesteri dhe fibra polipropileni për materialin e kokës së shtupës. Fibrat natyrale si pambuku nuk rekomandohen. Fibrat e najlonit gjithashtu nuk rekomandohen sepse fibrat e najlonit (të ngjashme me kokat e furçave të dhëmbëve) thithin ujë. I dobët, duke rezultuar në vëllim të pamjaftueshëm të mostrave, duke ndikuar në shkallën e zbulimit. Sfungjeri i alginatit të kalciumit është i ndaluar për marrjen e mostrave të materialit të shtupës! Doreza e shtupës ka dy lloje: të thyera dhe të integruara. Shtupa e thyer vendoset në tubin e ruajtjes pas marrjes së mostrave, dhe kapaku i tubit thyhet pasi është thyer nga pozicioni pranë kokës së marrjes së mostrave; shtupa e integruar e vendos direkt shtupën e marrjes së mostrave në tubin e ruajtjes pas marrjes së mostrave, dhe mbulesa e tubit të ruajtjes është e integruar. Vendosni vrimën e vogël në majë të dorezës dhe shtrëngoni mbulesën e tubit. Duke krahasuar dy metodat, e dyta është relativisht e sigurt. Kur shtupa e thyer përdoret së bashku me një tub ruajtjeje me madhësi më të vogël, mund të shkaktojë spërkatje të lëngjeve në tub kur thyhet, dhe duhet t'i kushtohet vëmendje e plotë rrezikut të kontaminimit të shkaktuar nga përdorimi jo i duhur i produktit. Rekomandohet të përdorni tub të zbrazët të ekstruduar prej polistireni (PS) ose tub të rrudhosur me injeksion prej polipropileni (PP) për materialin e dorezës së shtupës. Pavarësisht se çfarë materiali përdoret, nuk mund të shtohen aditivë të alginatit të kalciumit; shkopinj druri ose shkopinj bambuje. Shkurt, shtupa e marrjes së mostrave duhet të sigurojë sasinë e marrjes së mostrave dhe sasinë e çlirimit, dhe materialet e zgjedhura nuk duhet të kenë substanca që ndikojnë në testimin pasues.
2. Tretësira për ruajtjen e virusit: Ekzistojnë dy lloje tretësirash për ruajtjen e virusit që përdoren gjerësisht në treg, njëra është një tretësirë për mirëmbajtjen e virusit e modifikuar bazuar në mediumin e transportit dhe tjetra është një tretësirë e modifikuar për nxjerrjen e lizatit të acidit nukleik.
Komponenti kryesor i të parit është mjedisi bazë i kulturës Eagle (MEM) ose kripa e balancuar e Hank, e cila shtohet me kripërat, aminoacidet, vitaminat, glukozën dhe proteinat e nevojshme për mbijetesën e virusit. Kjo tretësirë ruajtjeje përdor kripën e natriumit të kuq të fenolit si tregues dhe tretësirë. Kur vlera e pH është 6.6-8.0, tretësira është rozë. Glukoza e nevojshme, L-glutamina dhe proteina shtohen në tretësirën e ruajtjes. Proteina ofrohet në formën e serumit fetal të gjedhit ose albuminës së serumit të gjedhit, e cila mund të stabilizojë mbështjellësin proteinik të virusit. Meqenëse tretësira e ruajtjes është e pasur me lëndë ushqyese, ajo është e favorshme për mbijetesën e virusit, por edhe e dobishme për rritjen e baktereve. Nëse tretësira e ruajtjes është e kontaminuar me baktere, ajo do të shumëfishohet në sasi të mëdha. Dioksidi i karbonit në metabolitët e tij do të shkaktojë që pH i tretësirës së ruajtjes të bjerë nga rozë në të verdhë. Prandaj, shumica e prodhuesve kanë shtuar përbërës antibakterialë në formulimet e tyre. Agjentët antibakterialë të rekomanduar janë penicilina, streptomicina, gentamicina dhe polimiksina B. Azidi i natriumit dhe 2-metili nuk rekomandohen. Frenuesit si 4-metil-4-izotiazolin-3-oni (MCI) dhe 5-kloro-2-metil-4-izotiazolin-3-oni (CMCI) nuk rekomandohen, sepse këta përbërës kanë një efekt në reaksionin PCR. Meqenëse mostra e ofruar nga kjo tretësirë konservimi është në thelb një virus i gjallë, origjinaliteti i mostrës mund të ruhet në masën më të madhe dhe mund të përdoret jo vetëm për nxjerrjen dhe zbulimin e acideve nukleike të virusit, por edhe për kultivimin dhe izolimin e viruseve. Megjithatë, duhet theksuar se kur përdoret për zbulim, nxjerrja dhe pastrimi i acidit nukleik duhet të kryhet pas inaktivizimit.
Një lloj tjetër tretësire ruajtëse e përgatitur bazuar në lizatin e nxjerrjes së acidit nukleik, përbërësit kryesorë janë kripëra të balancuara, agjent kelues EDTA, kripë guanidine (siç është izotiocianati i guanidinës, hidrokloruri i guanidinës, etj.), surfaktant anionik (siç është dodekani sulfat natriumi), surfaktantë kationikë (siç është oksalati i tetradeciltrimetilamoniumit), fenol, 8-hidroksikinolinë, ditiotreitol (DTT), proteinazë K dhe përbërës të tjerë. Kjo tretësirë ruajtëse është për të copëtuar drejtpërdrejt virusin për të çliruar acidin nukleik dhe për të eliminuar RNazën. Nëse përdoret vetëm për RT-PCR, është më e përshtatshme, por lizat mund ta çaktivizojë virusin. Ky lloj mostre nuk mund të përdoret për ndarjen e kulturës së virusit.
Agjenti kelatues i jonit metalik i përdorur në tretësirën e ruajtjes së virusit rekomandohet të përdorë kripëra EDTA (siç janë acidi etilendiaminetetraacetik dipotasium, acidi etilendiaminetetraacetik dinatriumi, etj.), dhe nuk rekomandohet përdorimi i heparinës (siç është heparina e natriumit, heparina e litiumit), në mënyrë që të mos ndikojë në zbulimin e PCR.
3. Tubi i ruajtjes: Materiali i tubit të ruajtjes duhet të zgjidhet me kujdes. Ka të dhëna që sugjerojnë se polipropileni (polipropileni) lidhet me adsorbimin e acidit nukleik, veçanërisht në përqendrime të larta të joneve në tension, polietileni (polietileni) është më i preferuar se polipropileni (polipropileni). ADN/ARN është e lehtë për t’u kapur. Plastika prej polimeri polietilen-propilen (poliallomer) dhe disa enë plastike prej polipropileni (polipropileni) të përpunuara posaçërisht janë më të përshtatshme për ruajtjen e ADN/ARN-së. Përveç kësaj, kur përdoret një tampon i thyeshëm, tubi i ruajtjes duhet të përpiqet të zgjedhë një enë me një lartësi më të madhe se 8 cm për të parandaluar spërkatjen dhe kontaminimin e përmbajtjes kur tamponi është i thyer.
4. Uji për tretësirën e ruajtjes së prodhimit: Uji ultra i pastër i përdorur për tretësirën e ruajtjes së prodhimit duhet të filtrohet përmes një membrane ultrafiltrimi me një peshë molekulare prej 13,000 për të siguruar heqjen e papastërtive të polimerit nga burimet biologjike, siç janë RNase, DNase dhe endotoksina, dhe pastrimi i zakonshëm nuk rekomandohet. Ujë ose ujë i distiluar.
2. Përdorimi i tubave të marrjes së mostrave të virusit
Marrja e mostrave duke përdorur tubin e marrjes së mostrave të virusit ndahet kryesisht në marrjen e mostrave orofaringeale dhe marrjen e mostrave nazofaringeale:
1. Marrja e mostrave orofaringeale: Së pari shtypni gjuhën me depresorin e gjuhës, pastaj shtrini kokën e tamponit të marrjes së mostrave në fyt për të fshirë bajamet dypalëshe të faringut dhe murin e pasmë të faringut, dhe fshijeni murin e pasmë të faringut me forcë të lehtë, duke shmangur prekjen e njësisë së gjuhës.
2. Marrja e mostrave nga nazofaringeali: matni distancën nga maja e hundës deri te lobi i veshit me një tampon dhe shënojeni me gisht, futeni tamponin e marrjes së mostrave në zgavrën e hundës në drejtim të hundës vertikale (fytyrës), tamponi duhet të shtrihet të paktën gjysmën e gjatësisë së lobit të veshit deri te maja e hundës. Lëreni tamponin në hundë për 15-30 sekonda, rrotullojeni butësisht 3-5 herë dhe tërhiqeni tamponin.
Nuk është e vështirë të shihet nga metoda e përdorimit, qoftë një tampon orofaringeal apo një tampon nazofaringeal, se marrja e mostrave është një detyrë teknike, e cila është e vështirë dhe e kontaminuar. Cilësia e mostrës së mbledhur lidhet drejtpërdrejt me zbulimin pasues. Nëse mostra e mbledhur ka një ngarkesë virale të ulët, është e lehtë të shkaktohen rezultate të rreme negative, e vështirë të konfirmohet diagnoza.
Koha e postimit: 21 qershor 2020
