1. Rreth prodhimit të tubave për marrjen e mostrave të virusit
Tubat e kampionimit të virusit i përkasin produkteve të pajisjeve mjekësore.Shumica e prodhuesve vendas janë të regjistruar sipas produkteve të klasit të parë, dhe pak kompani janë regjistruar sipas produkteve të klasit të dytë.Kohët e fundit, për të përmbushur nevojat emergjente të Wuhan-it dhe vendeve të tjera, shumë kompani kanë marrë "kanalin e urgjencës" "Aplikoni për lejen e regjistrimit të klasit të parë".Tubi i marrjes së mostrave të virusit përbëhet nga një shtupë kampionimi, tretësirë për ruajtjen e virusit dhe paketim i jashtëm.Meqenëse nuk ka standard të unifikuar kombëtar ose standard të industrisë, produktet e prodhuesve të ndryshëm ndryshojnë shumë.
1. Tampona e marrjes së mostrave: Tampoja e marrjes së mostrave kontakton drejtpërdrejt me vendin e marrjes së mostrave dhe materiali i kokës së kampionimit është i lidhur ngushtë me zbulimin e mëvonshëm.Koka e shtupës së marrjes së mostrave duhet të jetë prej fije sintetike poliestër (PE) ose fije prej fije artificiale prej fije artificiale.Sfungjeri me alginat kalciumi ose shkopinjtë prej druri (përfshirë shkopinj bambuje) nuk mund të përdoren dhe materiali i kokës së shtupës nuk mund të jetë produkte pambuku.Për shkak se fibra e pambukut ka një përthithje të fortë të proteinave, nuk është e lehtë të shpërndahet në tretësirën e mëvonshme të ruajtjes;dhe kur thyhet një shkop druri ose një shkop bambuje që përmban alginat kalciumi dhe përbërës druri, zhytja në solucionin e ruajtjes do të përthithë gjithashtu proteinën dhe madje mund të pengojë reaksionin pasues të PCR.Rekomandohet përdorimi i fibrave sintetike si fibra PE, fibra poliester dhe fibra polipropileni për materialin e kokës së shtupës.Fibrat natyrale si pambuku nuk rekomandohen.Fijet e najlonit gjithashtu nuk rekomandohen sepse fijet e najlonit (të ngjashme me kokat e furçës së dhëmbëve) thithin ujin.I dobët, duke rezultuar në volum të pamjaftueshëm të marrjes së mostrave, duke ndikuar në shkallën e zbulimit.Sfungjeri alginat i kalciumit është i ndaluar për marrjen e mostrave të materialit të shtupës!Doreza e shtupës ka dy lloje: e thyer dhe e integruar.Tamponi i thyer vendoset në tubin e ruajtjes pas marrjes së kampionit, dhe kapaku i tubit thyhet pasi të jetë thyer nga pozicioni afër kokës së kampionimit;shtupa e integruar e vendos drejtpërsëdrejti tamponin e marrjes së mostrave në tubin e ruajtjes pas marrjes së kampionit, dhe mbulesa e tubit të ruajtjes është ndërtuar në Rreshtoni vrimën e vogël me pjesën e sipërme të dorezës dhe shtrëngoni kapakun e tubit.Duke krahasuar dy metodat, kjo e fundit është relativisht e sigurt.Kur shtupa e thyer përdoret së bashku me një tub ruajtjeje me madhësi më të vogël, mund të shkaktojë spërkatje të lëngshme në tub kur thyhet dhe duhet t'i kushtohet vëmendje e plotë rrezikut të kontaminimit të shkaktuar nga përdorimi jo i duhur i produktit.Për materialin e dorezës së shtupës, rekomandohet përdorimi i tubit të ekstruduar të polistirenit të zbrazët (PS) ose tubit për injektim të polipropilenit (PP).Pavarësisht se çfarë materiali përdoret, aditivët e alginatit të kalciumit nuk mund të shtohen;shkopinj druri ose shkopinj bambuje.Shkurtimisht, shtupa e kampionimit duhet të sigurojë sasinë e marrjes së mostrave dhe sasinë e lëshimit, dhe materialet e përzgjedhura nuk duhet të kenë substanca që ndikojnë në testimin e mëvonshëm.
2. Zgjidhja e ruajtjes së virusit: Ekzistojnë dy lloje të zgjidhjeve të ruajtjes së virusit të përdorura gjerësisht në treg, njëra është një zgjidhje për mirëmbajtjen e virusit e modifikuar në bazë të mjetit të transportit dhe tjetra është një zgjidhje e modifikuar për lizatin e nxjerrjes së acidit nukleik.
Komponenti kryesor i të parës është mjedisi bazë i kulturës Eagle (MEM) ose kripa e balancuar e Hank, e cila shtohet me kripërat, aminoacidet, vitaminat, glukozën dhe proteinat e nevojshme për mbijetesën e virusit.Kjo tretësirë ruajtëse përdor kripë natriumi të kuqe fenol si tregues dhe tretësirë.Kur vlera e pH është 6.6-8.0, tretësira është rozë.Glukoza e nevojshme, L-glutamina dhe proteina i shtohen tretësirës së konservimit.Proteina sigurohet në formën e serumit të fetusit të gjedhit ose të albuminës së serumit të gjedhit, e cila mund të stabilizojë shtresën proteinike të virusit.Për shkak se solucioni i konservimit është i pasur me lëndë ushqyese, ai është i favorshëm për mbijetesën e virusit, por gjithashtu i dobishëm për rritjen e baktereve.Nëse solucioni konservues është i kontaminuar me baktere, ajo do të shumohet në sasi të mëdha.Dioksidi i karbonit në metabolitët e tij do të bëjë që pH e tretësirës ruajtëse të bjerë nga rozë Bëhet e verdhë.Prandaj, shumica e prodhuesve kanë shtuar përbërës antibakterial në formulimet e tyre.Agjentët antibakterialë të rekomanduar janë penicilina, streptomicina, gentamicina dhe polimiksina B. Azidi i natriumit dhe 2-metili nuk rekomandohen Frenuesit si 4-metil-4-izotiazolin-3-one (MCI) dhe 5-kloro-2-metil-4 -izothiazolin-3-one (CMCI) sepse këta përbërës kanë një efekt në reaksionin PCR.Meqenëse kampioni i siguruar nga kjo zgjidhje konservuese është në thelb një virus i gjallë, origjinaliteti i kampionit mund të ruhet në masën më të madhe dhe mund të përdoret jo vetëm për nxjerrjen dhe zbulimin e acideve nukleike të virusit, por edhe për kultivimin dhe kultivimin dhe izolimi i viruseve.Megjithatë, duhet të theksohet se kur përdoret për zbulim, nxjerrja dhe pastrimi i acidit nukleik duhet të kryhet pas inaktivizimit.
Një lloj tjetër solucioni konservues i përgatitur në bazë të lizatit të ekstraktimit të acidit nukleik, përbërësit kryesorë janë kripërat e balancuara, agjenti kelatues EDTA, kripa e guanidinës (siç është izotiocianati i guanidinës, hidroklorur guanidine, etj.), surfaktant anionik (si p.sh. sulfati i natriumit dodekan), kation surfaktantë (të tillë si oksalati tetradeciltrimetilamonium), fenoli, 8-hidroksikuinolina, dithiothreitol (DTT), proteinaza K dhe përbërës të tjerë. Kjo zgjidhje ruajtëse është për të ndarë drejtpërdrejt virusin për të lëshuar acidin nukleik dhe për të eliminuar RNazën.Nëse përdoret vetëm për RT-PCR, është më i përshtatshëm, por lizati mund të çaktivizojë virusin.Ky lloj kampioni nuk mund të përdoret për ndarjen e kulturës së virusit.
Agjenti kelues i joneve metalike i përdorur në tretësirën e ruajtjes së virusit rekomandohet të përdorni kripëra EDTA (të tilla si acidi etilendiaminetraacetik dikaliumi, acidi etilendiaminetraacetik dinatriumi, etj.), dhe nuk rekomandohet përdorimi i heparinës (si heparina e natriumit, heparina litium). në mënyrë që të mos ndikojë në zbulimin e PCR.
3. Tubi konservues: Materiali i tubit të ruajtjes duhet të zgjidhet me kujdes.Ka të dhëna që sugjerojnë se polipropileni (Polipropileni) lidhet me përthithjen e acidit nukleik, veçanërisht në përqendrimin e joneve me tension të lartë, polietileni (Polietileni) është më i preferuar se polipropileni (Polipropileni) i lehtë për t'u kuptuar ADN/ARN.Plastika e polietilenit-propilenit (Polyallomer) dhe disa enë plastike të përpunuara posaçërisht nga polipropileni (Polipropileni) janë më të përshtatshme për ruajtjen e ADN/ARN-së.Përveç kësaj, kur përdorni një shtupë të thyeshme, tubi i ruajtjes duhet të përpiqet të zgjedhë një enë me lartësi më të madhe se 8 cm për të parandaluar spërkatjen dhe ndotjen e përmbajtjes kur thyhet shtupa.
4. Zgjidhja e ruajtjes së ujit për prodhim: Uji ultra i pastër i përdorur për solucionin e ruajtjes së prodhimit duhet të filtrohet përmes një membrane ultrafiltrimi me një peshë molekulare prej 13,000 për të siguruar heqjen e papastërtive të polimerit nga burimet biologjike, si RNase, DNase dhe endotoksina, dhe pastrimi i zakonshëm nuk rekomandohet.Ujë ose ujë i distiluar.
2. Përdorimi i tubave për marrjen e mostrave të virusit
Marrja e mostrave duke përdorur tubin e kampionimit të virusit ndahet kryesisht në kampionim orofaringeal dhe kampion nazofaringeal:
1. Marrja e mostrave orofaringeale: Së pari shtypni gjuhën me shtypësin e gjuhës, pastaj shtrijeni kokën e shtupës së marrjes së mostrave në fyt për të fshirë bajamet dypalëshe të faringut dhe murin e pasmë të faringut, dhe fshijeni murin e pasmë të faringut me forcë të lehtë, shmangni prekjen e gjuhës. njësi.
2. Marrja e mostrave nazofaringeale: matni distancën nga maja e hundës deri te lobi i veshit me një shtupë dhe shënoni me gisht, futeni shtupën e kampionimit në zgavrën e hundës në drejtim të hundës vertikale (fytyrës), shtupa duhet të zgjatet. të paktën gjysmën e gjatësisë së lobit të veshit deri në majë të hundës, Lëreni tamponin në hundë për 15-30 sekonda, rrotullojeni butësisht 3-5 herë dhe tërhiqeni tamponin.
Nuk është e vështirë të shihet nga mënyra e përdorimit, nëse bëhet fjalë për një tampon orofaringeale apo një tampon nazofaringeal, marrja e mostrave është një detyrë teknike, e cila është e vështirë dhe e kontaminuar.Cilësia e mostrës së mbledhur lidhet drejtpërdrejt me zbulimin e mëvonshëm.Nëse kampioni i mbledhur ka një ngarkesë virale të ulët, të lehtë për të shkaktuar negativë të rremë, e vështirë për të konfirmuar diagnozën.
Koha e postimit: Qershor-21-2020
