1. Virüs örnekleme tüplerinin üretimi hakkında
Virüs örnekleme tüpleri tıbbi cihaz ürünleri kategorisine girer. Yerli üreticilerin çoğu birinci sınıf ürünler olarak tescillidir, az sayıda şirket ise ikinci sınıf ürünler olarak tescillidir. Son zamanlarda, Wuhan ve diğer yerlerin acil ihtiyaçlarını karşılamak amacıyla birçok şirket "acil durum kanalı"ndan "birinci sınıf tescil izni başvurusu" yapmıştır. Virüs örnekleme tüpü, örnekleme çubuğu, virüs koruma solüsyonu ve dış ambalajdan oluşur. Ulusal veya sektörel bir standart bulunmadığından, çeşitli üreticilerin ürünleri büyük ölçüde farklılık gösterir.
1. Örnekleme Çubuğu: Örnekleme çubuğu doğrudan örnekleme bölgesine temas eder ve örnekleme başlığının malzemesi, sonraki tespit ile yakından ilişkilidir. Örnekleme çubuğunun başlığı Polyester (PE) sentetik elyaf veya Rayon (suni elyaf) malzemeden yapılmalıdır. Kalsiyum aljinat sünger veya tahta çubuklu (bambu çubuklar dahil) çubuklar kullanılamaz ve çubuk başlığının malzemesi pamuk ürünleri olamaz. Çünkü pamuk lifi proteini güçlü bir şekilde emdiği için, sonraki saklama çözeltisine kolayca geçmez; ve kalsiyum aljinat ve tahta bileşenleri içeren tahta çubuk veya bambu çubuk kırıldığında, saklama çözeltisine batırıldığında proteini de emer ve hatta sonraki PCR reaksiyonunu engelleyebilir. Çubuk başlığının malzemesi olarak PE elyafı, polyester elyaf ve polipropilen elyaf gibi sentetik elyafların kullanılması önerilir. Pamuk gibi doğal elyaflar önerilmez. Naylon elyaflar da önerilmez çünkü naylon elyaflar (diş fırçası başlıklarına benzer) suyu zayıf emer, bu da yetersiz örnekleme hacmine ve tespit oranının etkilenmesine neden olur. Kalsiyum aljinat sünger, örnekleme çubuğu malzemesi olarak kesinlikle yasaktır! Örnekleme çubuğunun sapı iki tiptir: kırık ve yekpare. Kırık çubuk, örnekleme yapıldıktan sonra saklama tüpüne yerleştirilir ve örnekleme başlığına yakın yerden kırıldıktan sonra tüp kapağı kapatılır; yekpare çubuk ise örnekleme yapıldıktan sonra doğrudan saklama tüpüne yerleştirilir ve saklama tüpünün kapağındaki küçük delik sapın üst kısmıyla hizalanarak tüp kapağı sıkıca kapatılır. İki yöntem karşılaştırıldığında, ikincisi nispeten daha güvenlidir. Kırık çubuk daha küçük boyutlu bir saklama tüpüyle birlikte kullanıldığında, kırıldığında tüpte sıvı sıçramasına neden olabilir ve ürünün yanlış kullanımından kaynaklanan kontaminasyon riskine tam olarak dikkat edilmelidir. Örnekleme çubuğunun sapı malzemesi olarak içi boş polistiren (PS) ekstrüde tüp veya polipropilen (PP) enjeksiyon katlama tüpü kullanılması önerilir. Hangi malzeme kullanılırsa kullanılsın, kalsiyum aljinat katkı maddeleri eklenemez; tahta çubuklar veya bambu çubuklar da kullanılamaz. Özetle, örnekleme çubuğu örnekleme miktarını ve salınım miktarını sağlamalı ve seçilen malzemeler sonraki testleri etkileyebilecek maddeler içermemelidir.
2. Virüs koruma çözümü: Piyasada yaygın olarak kullanılan iki tür virüs koruma çözümü vardır; biri taşıma ortamına göre modifiye edilmiş virüs koruma çözümü, diğeri ise nükleik asit ekstraksiyon lizatı için modifiye edilmiş çözümdür.
Birincisinin ana bileşeni, virüsün hayatta kalması için gerekli tuzlar, amino asitler, vitaminler, glikoz ve proteinin eklendiği Eagle'ın temel kültür ortamı (MEM) veya Hank'in dengeli tuzudur. Bu saklama çözeltisi, indikatör ve çözelti olarak fenol kırmızısı sodyum tuzu kullanır. pH değeri 6,6-8,0 olduğunda çözelti pembe renktedir. Koruma çözeltisine gerekli glikoz, L-glutamin ve protein eklenir. Protein, virüsün protein kabuğunu stabilize edebilen fetal sığır serumu veya sığır serum albümini formunda sağlanır. Koruma çözeltisi besin açısından zengin olduğundan, virüsün hayatta kalmasına elverişlidir, ancak aynı zamanda bakterilerin büyümesine de elverişlidir. Koruma çözeltisi bakteri ile kirlenirse, büyük miktarlarda çoğalırlar. Metabolitlerindeki karbondioksit, koruma çözeltisinin pH'sının pembeden sarıya dönmesine neden olur. Bu nedenle, çoğu üretici formülasyonlarına antibakteriyel bileşenler eklemiştir. Önerilen antibakteriyel ajanlar penisilin, streptomisin, gentamisin ve polimiksin B'dir. Sodyum azid ve 2-metil gibi inhibitörler önerilmemektedir; 4-metil-4-izotiyazolin-3-on (MCI) ve 5-kloro-2-metil-4-izotiyazolin-3-on (CMCI) gibi inhibitörler PCR reaksiyonunu etkilediği için kullanılmamalıdır. Bu koruma çözeltisiyle sağlanan örnek esasen canlı bir virüs olduğundan, örneğin orijinalliği en üst düzeyde korunabilir ve sadece virüs nükleik asitlerinin ekstraksiyonu ve tespiti için değil, aynı zamanda virüslerin kültivasyonu ve izolasyonu için de kullanılabilir. Bununla birlikte, tespit için kullanıldığında, inaktivasyondan sonra nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırmasının yapılması gerektiği unutulmamalıdır.
Nükleik asit ekstraksiyon lizatına dayalı olarak hazırlanan bir diğer koruma çözeltisi türü, ana bileşenleri dengeli tuzlar, EDTA şelatlama ajanı, guanidin tuzu (guanidin izotiyosiyanat, guanidin hidroklorür vb.), anyonik yüzey aktif madde (dodekan sodyum sülfat gibi), katyonik yüzey aktif maddeler (tetradeciltrimetilamonyum oksalat gibi), fenol, 8-hidroksikinolin, ditiyotreitol (DTT), proteinaz K ve diğer bileşenlerdir. Bu saklama çözeltisi, virüsü doğrudan parçalayarak nükleik asidi serbest bırakmayı ve RNaz'ı ortadan kaldırmayı amaçlar. Sadece RT-PCR için kullanılıyorsa daha uygundur, ancak lizat virüsü etkisiz hale getirebilir. Bu tür bir örnek virüs kültürü ayrımı için kullanılamaz.
Virüs koruma solüsyonunda kullanılan metal iyonu şelatlayıcı madde olarak EDTA tuzlarının (dipotasyum etilendiamintetraasetik asit, disodyum etilendiamintetraasetik asit vb.) kullanılması önerilir; PCR tespitini etkilememesi için heparin (sodyum heparin, lityum heparin gibi) kullanılması önerilmez.
3. Saklama tüpü: Saklama tüpünün malzemesi dikkatlice seçilmelidir. Polipropilenin (Polypropylene) özellikle yüksek gerilim iyon konsantrasyonunda nükleik asit adsorpsiyonuyla ilgili olduğuna dair veriler mevcuttur; bu nedenle polietilen (Polyethylene), DNA/RNA'yı daha kolay tutmak için polipropilene (Polypropylene) göre daha tercih edilir. Polietilen-propilen polimer (Polyallomer) plastik ve bazı özel olarak işlenmiş polipropilen (Polypropylene) plastik kaplar, DNA/RNA saklama için daha uygundur. Ayrıca, kırılabilir bir pamuklu çubuk kullanıldığında, içeriğin sıçramasını ve pamuklu çubuk kırıldığında kirlenmesini önlemek için saklama tüpünün yüksekliğinin 8 cm'den fazla olması tercih edilmelidir.
4. Üretim koruma çözeltisi için su: Üretim koruma çözeltisi için kullanılan ultra saf su, RNaz, DNaz ve endotoksin gibi biyolojik kaynaklardan kaynaklanan polimer safsızlıklarının giderilmesini sağlamak için moleküler ağırlığı 13.000 olan bir ultrafiltrasyon membranından filtrelenmelidir; sıradan arıtma önerilmez. Su veya damıtılmış su kullanılabilir.
2. Virüs örnekleme tüplerinin kullanımı
Virüs örnekleme tüpü kullanılarak yapılan örnekleme esas olarak orofaringeal örnekleme ve nazofaringeal örnekleme olmak üzere ikiye ayrılır:
1. Orofaringeal örnekleme: Öncelikle dil bastırıcı ile dile baskı uygulayın, ardından örnekleme çubuğunun ucunu boğaza doğru uzatarak her iki farenks bademciği ve arka farenks duvarını silin; arka farenks duvarını hafifçe silin, dil kısmına dokunmaktan kaçının.
2. Nazofaringeal örnekleme: Burun ucundan kulak memesine kadar olan mesafeyi pamuklu çubukla ölçün ve parmağınızla işaretleyin, örnekleme çubuğunu burun boşluğuna dikey burun (yüz) yönünde yerleştirin, çubuk kulak memesinin en az yarısı uzunluğunda burun ucuna kadar uzanmalıdır, çubuğu burunda 15-30 saniye bekletin, 3-5 kez hafifçe döndürün ve çubuğu çıkarın.
Kullanım yönteminden de anlaşılacağı üzere, ister orofaringeal sürüntü ister nazofaringeal sürüntü olsun, örnekleme teknik bir işlemdir ve zor ve kirlenme riski taşır. Toplanan örneğin kalitesi, sonraki tespitlerle doğrudan ilişkilidir. Toplanan örnekte viral yük düşükse, yanlış negatif sonuçlara yol açması ve tanıyı doğrulaması zorlaşır.
Yayın tarihi: 21 Haz-2020
