1. Virüs örnekleme tüplerinin üretimi hakkında
Virüs örnekleme tüpleri tıbbi cihaz ürünlerine aittir. Yerli üreticilerin çoğu birinci sınıf ürünlere göre kayıtlıdır ve çok az şirket ikinci sınıf ürünlere göre kayıtlıdır. Son zamanlarda, Wuhan ve diğer bölgelerin acil durum ihtiyaçlarını karşılamak için birçok şirket "acil durum kanalı"nı benimsemiştir: "Birinci sınıf kayıt izni başvurusunda bulunun." Virüs örnekleme tüpü, bir örnekleme çubuğu, virüs koruma solüsyonu ve dış ambalajdan oluşur. Ortak bir ulusal standart veya endüstri standardı olmadığından, farklı üreticilerin ürünleri büyük ölçüde farklılık göstermektedir.
1. Örnekleme çubuğu: Örnekleme çubuğu, örnekleme bölgesine doğrudan temas eder ve örnekleme başlığının malzemesi, sonraki tespitle yakından ilişkilidir. Örnekleme çubuğu başlığı, Polyester (PE) sentetik elyaf veya Rayon'dan (yapay elyaf) yapılmalıdır. Kalsiyum aljinat sünger veya tahta çubuklu çubuklar (bambu çubuklar dahil) kullanılamaz ve çubuk başlığının malzemesi pamuklu ürünler olamaz. Pamuk elyafı güçlü bir protein adsorpsiyonuna sahip olduğundan, sonraki saklama solüsyonuna elüe edilmesi kolay değildir; kalsiyum aljinat ve ahşap bileşenler içeren tahta veya bambu çubuk kırıldığında, saklama solüsyonuna batırılması da proteini emer ve hatta sonraki PCR reaksiyonunu engelleyebilir. Çubuk başlığı malzemesi olarak PE elyaf, polyester elyaf ve polipropilen elyaf gibi sentetik elyafların kullanılması önerilir. Pamuk gibi doğal elyaflar önerilmez. Naylon elyaflar da önerilmez çünkü naylon elyaflar (diş fırçası başlıklarına benzer şekilde) suyu emer. Zayıftır, bu da yetersiz örnekleme hacmine neden olarak tespit oranını etkiler. Kalsiyum aljinat sünger, sürüntü materyalini örneklemek için yasaktır! Sürüntü sapının iki türü vardır: kırık ve yerleşik. Kırık sürüntü, örneklemeden sonra saklama tüpüne yerleştirilir ve tüp kapağı örnekleme başlığına yakın konumdan kırıldıktan sonra kırılır; yerleşik sürüntü, örneklemeden sonra örnekleme sürüntüsünü doğrudan saklama tüpüne koyar ve saklama tüpü tüp kapağı yerleşiktir. Küçük deliği sapın üst kısmıyla hizalayın ve tüp kapağını sıkın. İki yöntemi karşılaştırdığımızda, ikincisi nispeten daha güvenlidir. Kırık sürüntü, daha küçük boyutlu bir saklama tüpüyle birlikte kullanıldığında, kırıldığında tüpte sıvı sıçramasına neden olabilir ve ürünün yanlış kullanımından kaynaklanan kontaminasyon riskine tüm dikkat edilmelidir. Sürüntü sapının malzemesi için içi boş polistiren (PS) ekstrüde tüp veya polipropilen (PP) enjeksiyonlu katlama tüpü kullanılması önerilir. Hangi malzeme kullanılırsa kullanılsın, kalsiyum aljinat katkı maddeleri eklenemez; tahta çubuklar veya bambu çubuklar. Özetle, örnekleme çubuğu, örnekleme miktarını ve salınım miktarını garanti altına almalı ve seçilen malzemeler sonraki testleri etkileyecek maddeler içermemelidir.
2. Virüs koruma solüsyonu: Piyasada yaygın olarak kullanılan iki tür virüs koruma solüsyonu vardır, biri taşıma ortamına göre modifiye edilmiş bir virüs koruma solüsyonu, diğeri ise nükleik asit ekstraksiyon lizatı için modifiye edilmiş bir solüsyondur.
Eski olanın ana bileşeni, virüsün hayatta kalması için gerekli tuzlar, amino asitler, vitaminler, glikoz ve protein ile eklenen Eagle'ın temel kültür ortamı (MEM) veya Hank'ın dengeli tuzudur. Bu saklama çözeltisi, bir gösterge ve çözelti olarak fenol kırmızısı sodyum tuzu kullanır. pH değeri 6,6-8,0 olduğunda, çözelti pembe olur. Gerekli glikoz, L-glutamin ve protein koruma çözeltisine eklenir. Protein, virüsün protein kabuğunu stabilize edebilen fetal sığır serumu veya sığır serum albümini formunda sağlanır. Koruma çözeltisi besin açısından zengin olduğu için virüsün hayatta kalmasına yardımcı olur, aynı zamanda bakterilerin büyümesi için de faydalıdır. Koruma çözeltisi bakterilerle kirlenmişse, büyük miktarlarda çoğalırlar. Metabolitlerindeki karbondioksit, koruma çözeltisinin pH'ının pembeden sarıya dönmesine neden olur. Bu nedenle, çoğu üretici formüllerine antibakteriyel bileşenler eklemiştir. Önerilen antibakteriyel ajanlar penisilin, streptomisin, gentamisin ve polimiksin B'dir. Sodyum azit ve 2-metil, 4-metil-4-izotiyazolin-3-on (MCI) ve 5-kloro-2-metil-4-izotiyazolin-3-on (CMCI) gibi inhibitörlerin PCR reaksiyonu üzerinde etkisi olduğundan önerilmez. Bu koruma solüsyonuyla sağlanan örnek temelde canlı bir virüs olduğundan, örneğin orijinalliği en üst düzeyde korunabilir ve yalnızca virüs nükleik asitlerinin ekstraksiyonu ve tespiti için değil, aynı zamanda virüslerin kültivasyonu ve izolasyonu için de kullanılabilir. Ancak, tespit amacıyla kullanıldığında, nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırmasının inaktivasyondan sonra yapılması gerektiği unutulmamalıdır.
Nükleik asit ekstraksiyon lizatına dayalı olarak hazırlanan bir diğer koruma solüsyonu türü olan bu solüsyonun ana bileşenleri dengeli tuzlar, EDTA şelatlayıcı ajan, guanidin tuzu (guanidin izotiyosiyanat, guanidin hidroklorür vb.), anyonik yüzey aktif madde (dodekan sodyum sülfat gibi), katyonik yüzey aktif maddeler (tetradesiltrimetilamonyum oksalat gibi), fenol, 8-hidroksikinolin, ditiyotreitol (DTT), proteinaz K ve diğer bileşenlerdir. Bu saklama solüsyonu, virüsü doğrudan parçalayarak nükleik asidi serbest bırakmak ve RNaz'ı yok etmek için kullanılır. Sadece RT-PCR için kullanılırsa daha uygundur, ancak lizat virüsü inaktive edebilir. Bu tür örnekler virüs kültürü ayrımı için kullanılamaz.
Virüs koruma solüsyonunda kullanılan metal iyon şelatlayıcı ajan olarak EDTA tuzlarının (dipotasyum etilendiamintetraasetik asit, disodyum etilendiamintetraasetik asit vb.) kullanılması önerilirken, heparin (sodyum heparin, lityum heparin gibi) kullanılması PCR tespitini etkilememesi açısından önerilmemektedir.
3. Saklama tüpü: Saklama tüpünün malzemesi dikkatlice seçilmelidir. Polipropilenin (Polipropilen) nükleik asit adsorpsiyonu ile ilişkili olduğunu gösteren veriler mevcuttur, özellikle yüksek gerilimli iyon konsantrasyonlarında, polietilen (Polietilen), polipropilenden (Polipropilen) daha çok tercih edilir. DNA/RNA'yı kavramak kolaydır. Polietilen-propilen polimer (Poliallomer) plastik ve bazı özel olarak işlenmiş polipropilen (Polipropilen) plastik kaplar, DNA/RNA saklamak için daha uygundur. Ayrıca, kırılabilir bir çubuk kullanıldığında, çubuk kırıldığında içeriğin sıçramasını ve kirlenmesini önlemek için saklama tüpü 8 cm'den yüksek bir kap seçilmelidir.
4. Üretim koruma çözeltisi için su: Üretim koruma çözeltisi için kullanılan ultra saf su, RNase, DNase ve endotoksin gibi biyolojik kaynaklardan gelen polimer safsızlıklarının giderilmesini sağlamak için molekül ağırlığı 13.000 olan bir ultrafiltrasyon membranından filtrelenmelidir; sıradan bir saflaştırma önerilmez. Su veya damıtılmış su.
2. Virüs örnekleme tüplerinin kullanımı
Virüs örnekleme tüpü kullanılarak yapılan örnekleme esas olarak orofaringeal örnekleme ve nazofaringeal örnekleme olarak ikiye ayrılır:
1. Orofaringeal örnekleme: Önce dil basacağı ile dile bastırılır, sonra örnekleme çubuğunun ucu boğaza doğru uzatılarak bilateral faringeal tonsil ve posterior faringeal duvar silinir ve posterior faringeal duvar hafif bir kuvvetle silinir, dil ünitesine dokunmaktan kaçınılır.
2. Nazofarenks örneklemesi: Burun ucundan kulak memesine kadar olan mesafeyi sürüntü çubuğu ile ölçün ve parmağınızla işaretleyin, örnekleme çubuğunu burun boşluğuna dikey burun (yüz) yönünde yerleştirin, sürüntü çubuğu kulak memesinin uzunluğunun en az yarısı kadar burun ucuna kadar uzanmalıdır, çubuğu burunda 15-30 saniye bekletin, yavaşça 3-5 kez çevirin ve çubuğu geri çekin.
Kullanım yönteminden, ister orofaringeal sürüntü ister nazofaringeal sürüntü olsun, örneklemenin teknik bir işlem olduğu ve zor ve kontamine olduğu anlaşılmaktadır. Toplanan örneğin kalitesi, daha sonraki tespitle doğrudan ilişkilidir. Toplanan örneğin viral yükü düşükse, yanlış negatif sonuçlara yol açması kolaylaşır ve tanıyı doğrulamak zorlaşır.
Gönderi zamanı: 21 Haz 2020
