1. Tungkol sa paggawa ng mga tubo para sa pagkuha ng sample ng virus
Ang mga tubo para sa pagkuha ng sample ng virus ay kabilang sa mga produktong medikal na aparato. Karamihan sa mga lokal na tagagawa ay nakarehistro ayon sa mga produktong primera klase, at kakaunti ang mga kumpanyang nakarehistro ayon sa mga produktong pangalawang klase. Kamakailan lamang, upang matugunan ang mga pangangailangang pang-emerhensya sa Wuhan at iba pang mga lugar, maraming kumpanya ang gumamit ng "emergency channel" na "Mag-apply para sa permiso sa pagkuha ng first-class record". Ang tubo para sa pagkuha ng sample ng virus ay binubuo ng isang sample swab, solusyon para sa pagpapanatili ng virus, at panlabas na pakete. Dahil walang pinag-isang pambansang pamantayan o pamantayan sa industriya, ang mga produkto ng iba't ibang tagagawa ay lubhang nag-iiba.
1. Sampling swab: Ang sampling swab ay direktang dumidikit sa lugar ng sampling, at ang materyal ng ulo ng sampling ay malapit na nauugnay sa kasunod na pagtuklas. Ang ulo ng sampling swab ay dapat na gawa sa Polyester (PE) synthetic fiber o Rayon (gawa-ng-taong hibla). Hindi maaaring gamitin ang calcium alginate sponge o wooden stick swabs (kabilang ang mga stick ng kawayan), at ang materyal ng ulo ng swab ay hindi maaaring mga produktong bulak. Dahil ang cotton fiber ay may malakas na adsorption ng protina, hindi ito madaling ma-elute sa kasunod na imbakan ng solusyon; at kapag ang isang kahoy na stick o bamboo stick na naglalaman ng calcium alginate at mga bahaging kahoy ay nabali, ang pagbabad sa imbakan ng solusyon ay mag-a-adsorb din ng protina, at maaari pa nitong mapigilan ang kasunod na reaksyon ng PCR. Inirerekomenda na gumamit ng synthetic fibers tulad ng PE fiber, polyester fiber at polypropylene fiber para sa materyal ng ulo ng swab. Hindi inirerekomenda ang mga natural fibers tulad ng bulak. Hindi rin inirerekomenda ang mga nylon fibers dahil ang mga nylon fibers (katulad ng mga ulo ng sipilyo) ay sumisipsip ng tubig. Hindi maganda, na nagreresulta sa hindi sapat na dami ng sampling, na nakakaapekto sa detection rate. Bawal ang calcium alginate sponge para sa pagkuha ng sample ng materyal ng swab! Ang hawakan ng swab ay may dalawang uri: sira at built-in. Ang sirang swab ay inilalagay sa storage tube pagkatapos kumuha ng sample, at ang takip ng tubo ay binabasag pagkatapos mabali mula sa posisyon malapit sa ulo ng sampling; ang built-in na swab ay direktang naglalagay ng sampling swab sa storage tube pagkatapos kumuha ng sample, at ang takip ng storage tube ay naka-built in. Ihanay ang maliit na butas sa itaas ng hawakan at higpitan ang takip ng tubo. Kung ikukumpara ang dalawang pamamaraan, ang huli ay medyo ligtas. Kapag ang sirang swab ay ginamit kasama ng mas maliit na storage tube, maaari itong magdulot ng pagtalsik ng likido sa tubo kapag nabali, at dapat bigyang-pansin ang panganib ng kontaminasyon na dulot ng hindi wastong paggamit ng produkto. Inirerekomenda na gumamit ng hollow polystyrene (PS) extruded tube o polypropylene (PP) injection creasing tube para sa materyal ng hawakan ng swab. Anuman ang materyal na gamitin, hindi maaaring magdagdag ng calcium alginate additives; mga kahoy na patpat o kawayan na patpat. Sa madaling salita, dapat tiyakin ng sampling swab ang dami ng sampling at ang dami ng paglabas, at ang mga napiling materyales ay hindi dapat maglaman ng mga sangkap na nakakaapekto sa kasunod na pagsusuri.
2. Solusyon sa preserbasyon ng virus: Mayroong dalawang uri ng solusyon sa preserbasyon ng virus na malawakang ginagamit sa merkado, ang isa ay isang solusyon sa pagpapanatili ng virus na binago batay sa medium ng transportasyon, at ang isa pa ay isang binagong solusyon para sa nucleic acid extraction lysate.
Ang pangunahing sangkap ng una ay ang Eagle's basic culture medium (MEM) o Hank's balanced salt, na dinadagdagan ng mga asin, amino acid, bitamina, glucose, at protina na kinakailangan para sa kaligtasan ng virus. Ang storage solution na ito ay gumagamit ng phenol red sodium salt bilang indicator at solusyon. Kapag ang pH value ay 6.6-8.0, ang solusyon ay kulay rosas. Ang kinakailangang glucose, L-glutamine, at protina ay idinaragdag sa preservation solution. Ang protina ay ibinibigay sa anyo ng fetal bovine serum o bovine serum albumin, na maaaring magpatatag sa protein shell ng virus. Dahil ang preservation solution ay mayaman sa sustansya, ito ay nakakatulong sa kaligtasan ng virus ngunit kapaki-pakinabang din sa paglaki ng bacteria. Kung ang preservation solution ay kontaminado ng bacteria, ito ay dadami nang marami. Ang carbon dioxide sa mga metabolite nito ay magiging sanhi ng pagbaba ng pH ng preservation solution mula sa pink at nagiging dilaw. Samakatuwid, karamihan sa mga tagagawa ay nagdagdag ng mga antibacterial na sangkap sa kanilang mga pormulasyon. Ang mga inirerekomendang antibacterial agent ay penicillin, streptomycin, gentamicin at polymyxin B. Ang sodium azide at 2-methyl ay hindi inirerekomendang gamitin bilang mga inhibitor tulad ng 4-methyl-4-isothiazolin-3-one (MCI) at 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one (CMCI) dahil ang mga sangkap na ito ay may epekto sa reaksyon ng PCR. Dahil ang sample na ibinibigay ng preservation solution na ito ay karaniwang isang buhay na virus, ang orihinalidad ng sample ay maaaring mapanatili sa pinakamataas na antas, at maaari itong gamitin hindi lamang para sa pagkuha at pagtuklas ng mga nucleic acid ng virus, kundi pati na rin para sa paglilinang at paghihiwalay ng mga virus. Gayunpaman, dapat tandaan na kapag ginamit para sa pagtuklas, ang pagkuha at paglilinis ng nucleic acid ay dapat isagawa pagkatapos ng pag-inactivate.
Isa pang uri ng solusyon sa pangangalaga na inihanda batay sa lysate ng pagkuha ng nucleic acid, ang mga pangunahing sangkap ay balanced salts, EDTA chelating agent, guanidine salt (tulad ng guanidine isothiocyanate, guanidine hydrochloride, atbp.), anionic surfactant (tulad ng dodecane Sodium sulfate), cationic surfactants (tulad ng tetradecyltrimethylammonium oxalate), phenol, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K at iba pang mga sangkap. Ang solusyon sa pag-iimbak na ito ay direktang naghihiwalay sa virus upang ilabas ang nucleic acid at maalis ang RNase. Kung gagamitin lamang para sa RT-PCR, mas angkop ito, ngunit maaaring i-inactivate ng lysate ang virus. Ang ganitong uri ng sample ay hindi maaaring gamitin para sa paghihiwalay ng virus culture.
Ang metal ion chelating agent na ginagamit sa solusyon ng pangangalaga ng virus ay inirerekomendang gumamit ng mga EDTA salt (tulad ng dipotassium ethylenediaminetetraacetic acid, disodium ethylenediaminetetraacetic acid, atbp.), at hindi inirerekomendang gumamit ng heparin (tulad ng sodium heparin, lithium heparin), upang hindi makaapekto sa pagtuklas ng PCR.
3. Tubong pangpreserba: Ang materyal ng tubo pangpreserba ay dapat na maingat na piliin. May mga datos na nagmumungkahi na ang polypropylene (Polypropylene) ay may kaugnayan sa adsorption ng nucleic acid, lalo na sa mataas na tension ion concentration, mas pinipili ang polyethylene (Polyethylene) kaysa sa polypropylene (Polypropylene). Madaling hawakan ang DNA/RNA. Ang polyethylene-propylene polymer (Polyallomer) na plastik at ilang espesyal na pinrosesong polypropylene (Polypropylene) na plastik na lalagyan ay mas angkop para sa pag-iimbak ng DNA/RNA. Bukod pa rito, kapag gumagamit ng madaling mabasag na pamunas, dapat subukang pumili ang tubo ng imbakan ng lalagyan na may taas na higit sa 8 cm upang maiwasan ang pagkatalsik at pagkahawa ng laman kapag nabasag ang pamunas.
4. Tubig para sa solusyon sa preserbasyon ng produksyon: Ang ultrapure na tubig na ginagamit para sa solusyon sa preserbasyon ng produksyon ay dapat salain sa pamamagitan ng isang ultrafiltration membrane na may molecular weight na 13,000 upang matiyak ang pag-aalis ng mga impurities ng polymer mula sa mga biological source, tulad ng RNase, DNase, at endotoxin, at hindi inirerekomenda ang ordinaryong purification. Tubig o distilled water.
2. Paggamit ng mga tubo para sa pagkuha ng sample ng virus
Ang pagkuha ng sample gamit ang virus sampling tube ay pangunahing nahahati sa oropharyngeal sampling at nasopharyngeal sampling:
1. Pagkuha ng sample sa oropharyngeal: Pindutin muna ang dila gamit ang tongue depressor, pagkatapos ay iunat ang ulo ng sample swab papunta sa lalamunan upang punasan ang bilateral pharyngeal tonsils at posterior pharyngeal wall, at punasan ang posterior pharyngeal wall nang mahina, iwasang hawakan ang tongue unit.
2. Pagkuha ng sample sa nasopharyngeal: sukatin ang distansya mula sa dulo ng ilong hanggang sa earlobe gamit ang isang swab at markahan gamit ang isang daliri, ipasok ang sampling swab sa butas ng ilong sa direksyon ng patayong ilong (mukha), ang swab ay dapat umabot nang hindi bababa sa kalahati ng haba ng earlobe hanggang sa dulo ng ilong. Iwanan ang swab sa ilong nang 15-30 segundo, dahan-dahang iikot nang 3-5 beses, at kunin ang swab.
Hindi mahirap makita mula sa paraan ng paggamit, maging ito man ay oropharyngeal swab o nasopharyngeal swab, ang pagkuha ng sample ay isang teknikal na gawain, na mahirap at kontaminado. Ang kalidad ng nakolektang sample ay direktang nauugnay sa kasunod na pagtuklas. Kung ang nakolektang sample ay may viral load na mababa, madaling magdulot ng mga maling negatibo, at mahirap kumpirmahin ang diagnosis.
Oras ng pag-post: Hunyo-21-2020
