ข้อคิดเห็นหลายประการเกี่ยวกับหลอดเก็บตัวอย่างไวรัส

1. เกี่ยวกับการผลิตหลอดเก็บตัวอย่างไวรัส
หลอดเก็บตัวอย่างไวรัสจัดอยู่ในกลุ่มผลิตภัณฑ์เครื่องมือแพทย์ ผู้ผลิตในประเทศส่วนใหญ่จดทะเบียนตามประเภทผลิตภัณฑ์ชั้นหนึ่ง และมีเพียงไม่กี่บริษัทที่จดทะเบียนตามประเภทผลิตภัณฑ์ชั้นสอง เมื่อไม่นานมานี้ เพื่อตอบสนองความต้องการเร่งด่วนในเมืองอู่ฮั่นและพื้นที่อื่นๆ บริษัทหลายแห่งได้ใช้ “ช่องทางฉุกเฉิน” เพื่อ “ยื่นขออนุญาตจดทะเบียนชั้นหนึ่ง” หลอดเก็บตัวอย่างไวรัสประกอบด้วยไม้สำลีสำหรับเก็บตัวอย่าง สารละลายรักษาสภาพไวรัส และบรรจุภัณฑ์ภายนอก เนื่องจากไม่มีมาตรฐานระดับชาติหรือมาตรฐานอุตสาหกรรมที่เป็นเอกภาพ ผลิตภัณฑ์ของผู้ผลิตต่างๆ จึงมีความแตกต่างกันอย่างมาก

1. ไม้สำลีสำหรับเก็บตัวอย่าง: ไม้สำลีสำหรับเก็บตัวอย่างสัมผัสกับบริเวณที่ต้องการเก็บตัวอย่างโดยตรง และวัสดุของหัวไม้สำลีมีความเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับการตรวจวิเคราะห์ในขั้นตอนต่อไป หัวไม้สำลีควรทำจากเส้นใยสังเคราะห์โพลีเอสเตอร์ (PE) หรือเรยอน (เส้นใยสังเคราะห์) ไม่ควรใช้ฟองน้ำแคลเซียมอัลจิเนตหรือไม้สำลี (รวมถึงไม้ไผ่) และวัสดุของหัวไม้สำลีไม่ควรเป็นผลิตภัณฑ์จากฝ้าย เนื่องจากเส้นใยฝ้ายดูดซับโปรตีนได้ดี ทำให้โปรตีนละลายในสารละลายสำหรับเก็บรักษาได้ยาก และเมื่อไม้สำลีหรือไม้ไผ่ที่มีส่วนประกอบของแคลเซียมอัลจิเนตและไม้หัก การแช่ในสารละลายเก็บรักษาจะดูดซับโปรตีน และอาจยับยั้งปฏิกิริยา PCR ในขั้นตอนต่อไปได้ จึงแนะนำให้ใช้เส้นใยสังเคราะห์ เช่น เส้นใย PE เส้นใยโพลีเอสเตอร์ และเส้นใยโพลีโพรพีลีน สำหรับวัสดุของหัวไม้สำลี ไม่แนะนำให้ใช้เส้นใยธรรมชาติ เช่น ฝ้าย และไม่แนะนำให้ใช้เส้นใยไนลอน เนื่องจากเส้นใยไนลอน (คล้ายกับหัวแปรงสีฟัน) ดูดซับน้ำได้ไม่ดี ทำให้ปริมาณตัวอย่างไม่เพียงพอ ส่งผลต่ออัตราการตรวจพบ ห้ามใช้ฟองน้ำแคลเซียมอัลจิเนตเป็นวัสดุสำหรับเก็บตัวอย่าง! ด้ามสำลีมีสองแบบ: แบบหักและแบบต่อด้าม แบบหักคือ หลังจากเก็บตัวอย่างเสร็จแล้ว ให้ใส่สำลีลงในหลอดเก็บตัวอย่าง แล้วหักฝาหลอดจากตำแหน่งใกล้กับหัวเก็บตัวอย่าง ส่วนแบบต่อด้ามคือ ใส่สำลีเก็บตัวอย่างลงในหลอดเก็บตัวอย่างโดยตรงหลังจากเก็บตัวอย่างเสร็จแล้ว แล้วจัดตำแหน่งรูเล็กๆ บนฝาหลอดเก็บตัวอย่างให้ตรงกับด้านบนของด้าม แล้วขันฝาหลอดให้แน่น เมื่อเปรียบเทียบสองวิธีนี้ วิธีหลังค่อนข้างปลอดภัยกว่า เมื่อใช้สำลีหักร่วมกับหลอดเก็บตัวอย่างขนาดเล็ก อาจทำให้ของเหลวกระเด็นเข้าไปในหลอดได้เมื่อหัก จึงควรระมัดระวังความเสี่ยงของการปนเปื้อนที่เกิดจากการใช้งานที่ไม่เหมาะสม แนะนำให้ใช้ท่อโพลีสไตรีน (PS) แบบกลวงหรือท่อโพลีโพรพีลีน (PP) แบบฉีดขึ้นรูปเป็นวัสดุสำหรับด้ามสำลี ไม่ว่าจะใช้วัสดุใดก็ตาม ห้ามเติมสารเติมแต่งแคลเซียมอัลจิเนต และห้ามใช้ไม้หรือไม้ไผ่เป็นวัสดุ โดยสรุปแล้ว ไม้สำลีสำหรับเก็บตัวอย่างควรช่วยให้มั่นใจได้ถึงปริมาณตัวอย่างและปริมาณสารที่ปล่อยออกมา และวัสดุที่เลือกใช้ต้องไม่มีสารที่ส่งผลกระทบต่อการทดสอบในภายหลัง

2. สารละลายสำหรับรักษาสภาพไวรัส: สารละลายสำหรับรักษาสภาพไวรัสที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในท้องตลาดมีอยู่ 2 ชนิด คือ ชนิดแรกคือสารละลายบำรุงรักษาไวรัสที่ดัดแปลงจากตัวกลางในการขนส่ง และชนิดที่สองคือสารละลายที่ดัดแปลงสำหรับสกัดกรดนิวคลีอิกจากสารละลายที่ได้จากการแยกไวรัส
ส่วนประกอบหลักของสารละลายเก็บรักษาไวรัสแบบแรกคือ สารละลายอาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐานของ Eagle (MEM) หรือสารละลายเกลือสมดุลของ Hank ซึ่งเติมเกลือ กรดอะมิโน วิตามิน กลูโคส และโปรตีนที่จำเป็นต่อการอยู่รอดของไวรัส สารละลายเก็บรักษานี้ใช้เกลือโซเดียมฟีนอลเรดเป็นตัวบ่งชี้และสารละลาย เมื่อค่า pH อยู่ระหว่าง 6.6-8.0 สารละลายจะเป็นสีชมพู มีการเติมกลูโคส แอล-กลูตามีน และโปรตีนที่จำเป็นลงในสารละลายเก็บรักษา โปรตีนที่ให้มาอยู่ในรูปของซีรั่มจากลูกวัวหรืออัลบูมินจากซีรั่มวัว ซึ่งสามารถช่วยให้เปลือกโปรตีนของไวรัสคงตัวได้ เนื่องจากสารละลายเก็บรักษามีสารอาหารอุดมสมบูรณ์ จึงเอื้อต่อการอยู่รอดของไวรัส แต่ก็เป็นประโยชน์ต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรียด้วย หากสารละลายเก็บรักษาปนเปื้อนด้วยแบคทีเรีย แบคทีเรียจะเพิ่มจำนวนมาก และก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ในสารเมตาบอไลต์ของแบคทีเรียจะทำให้ค่า pH ของสารละลายเก็บรักษาลดลงจากสีชมพูเป็นสีเหลือง ดังนั้นผู้ผลิตส่วนใหญ่จึงได้เพิ่มส่วนผสมต้านแบคทีเรียลงในสูตรของตน สารต้านแบคทีเรียที่แนะนำ ได้แก่ เพนิซิลลิน สเตรปโตมัยซิน เจนตาไมซิน และโพลีมัยซิน บี ไม่แนะนำให้ใช้โซเดียมอะไซด์และ 2-เมทิล สารยับยั้ง เช่น 4-เมทิล-4-ไอโซไทอะโซลิน-3-โอน (MCI) และ 5-คลอโร-2-เมทิล-4-ไอโซไทอะโซลิน-3-โอน (CMCI) เนื่องจากส่วนประกอบเหล่านี้มีผลต่อปฏิกิริยา PCR เนื่องจากตัวอย่างที่ได้จากสารละลายเก็บรักษานี้เป็นไวรัสที่มีชีวิต จึงสามารถรักษาสภาพดั้งเดิมของตัวอย่างไว้ได้มากที่สุด และสามารถนำไปใช้ไม่เพียงแต่สำหรับการสกัดและตรวจหาดีเอ็นเอของไวรัสเท่านั้น แต่ยังใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงและแยกไวรัสได้อีกด้วย อย่างไรก็ตาม ควรทราบว่าเมื่อใช้สำหรับการตรวจหา ต้องทำการสกัดและทำให้บริสุทธิ์ดีเอ็นเอหลังจากที่ไวรัสไม่ทำงานแล้ว
สารละลายเก็บรักษาอีกชนิดหนึ่งเตรียมจากสารสกัดกรดนิวคลีอิก โดยมีส่วนประกอบหลักคือ เกลือสมดุล สารคีเลต EDTA เกลือกัวนิดีน (เช่น กัวนิดีนไอโซไทโอไซยาเนต กัวนิดีนไฮโดรคลอไรด์ เป็นต้น) สารลดแรงตึงผิวประจุลบ (เช่น โซเดียมโดเดเคนซัลเฟต) สารลดแรงตึงผิวประจุบวก (เช่น เตตระเดซิลไตรเมทิลแอมโมเนียมออกซาเลต) ฟีนอล 8-ไฮดรอกซีควิโนลีน ไดไทโอไทรทอล (DTT) โปรตีเนส เค และส่วนประกอบอื่นๆ สารละลายเก็บรักษานี้จะทำลายไวรัสโดยตรงเพื่อปลดปล่อยกรดนิวคลีอิกและกำจัด RNase หากใช้สำหรับ RT-PCR เท่านั้นจะเหมาะสมกว่า แต่สารสกัดอาจทำให้ไวรัสไม่ทำงานได้ ตัวอย่างชนิดนี้ไม่สามารถใช้สำหรับการแยกไวรัสโดยการเพาะเลี้ยงได้

สารคีเลตไอออนโลหะที่ใช้ในสารละลายรักษาสภาพไวรัส แนะนำให้ใช้เกลือ EDTA (เช่น ไดโพแทสเซียมเอทิลีนไดอะมีนเตตระอะเซติกแอซิด, ไดโซเดียมเอทิลีนไดอะมีนเตตระอะเซติกแอซิด เป็นต้น) และไม่แนะนำให้ใช้เฮปาริน (เช่น โซเดียมเฮปาริน, ลิเธียมเฮปาริน) เพื่อไม่ให้ส่งผลกระทบต่อการตรวจจับ PCR
3. หลอดเก็บรักษา: ควรเลือกวัสดุของหลอดเก็บรักษาอย่างระมัดระวัง มีข้อมูลที่บ่งชี้ว่าโพลีโพรพีลีน (Polypropylene) เกี่ยวข้องกับการดูดซับกรดนิวคลีอิก โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ความเข้มข้นของไอออนสูง โพลีเอทิลีน (Polyethylene) จึงเป็นที่นิยมมากกว่าโพลีโพรพีลีน (Polypropylene) เนื่องจากสามารถจับ DNA/RNA ได้ง่ายกว่า พลาสติกโพลีเอทิลีน-โพรพีลีน (Polyallomer) และภาชนะพลาสติกโพลีโพรพีลีน (Polypropylene) ที่ผ่านกระบวนการพิเศษบางชนิดจึงเหมาะสมกว่าสำหรับการเก็บรักษา DNA/RNA นอกจากนี้ เมื่อใช้ไม้สำลีที่หักได้ ควรเลือกหลอดเก็บรักษาที่มีความสูงมากกว่า 8 ซม. เพื่อป้องกันไม่ให้เนื้อหาภายในกระเด็นและปนเปื้อนเมื่อไม้สำลีหัก

4. น้ำสำหรับสารละลายรักษาคุณภาพในการผลิต: น้ำบริสุทธิ์พิเศษที่ใช้สำหรับสารละลายรักษาคุณภาพในการผลิตควรผ่านการกรองด้วยเยื่อกรองละเอียดพิเศษที่มีน้ำหนักโมเลกุล 13,000 เพื่อให้แน่ใจว่าได้กำจัดสิ่งเจือปนโพลีเมอร์จากแหล่งชีวภาพ เช่น RNase, DNase และเอนโดท็อกซิน และไม่แนะนำให้ใช้น้ำบริสุทธิ์ทั่วไปหรือน้ำกลั่น

2. การใช้หลอดเก็บตัวอย่างไวรัส

การเก็บตัวอย่างโดยใช้หลอดเก็บตัวอย่างไวรัสส่วนใหญ่แบ่งออกเป็น การเก็บตัวอย่างจากช่องปากและลำคอ และการเก็บตัวอย่างจากโพรงจมูกและลำคอ:

1. การเก็บตัวอย่างจากช่องปากและลำคอ: ขั้นแรกให้ใช้ไม้กดลิ้นกดลิ้นลง จากนั้นสอดปลายไม้เก็บตัวอย่างเข้าไปในลำคอเพื่อเช็ดต่อมทอนซิลทั้งสองข้างและผนังคอหอยด้านหลัง โดยเช็ดผนังคอหอยด้านหลังด้วยแรงเบาๆ หลีกเลี่ยงการสัมผัสลิ้น

2. การเก็บตัวอย่างจากโพรงจมูก: วัดระยะจากปลายจมูกถึงติ่งหูด้วยไม้สำลี แล้วทำเครื่องหมายด้วยนิ้ว จากนั้นสอดไม้สำลีเข้าไปในโพรงจมูกในแนวตั้ง โดยให้ไม้สำลีอยู่ลึกอย่างน้อยครึ่งหนึ่งของความยาวติ่งหูถึงปลายจมูก ทิ้งไม้สำลีไว้ในจมูกประมาณ 15-30 วินาที หมุนเบาๆ 3-5 ครั้ง แล้วดึงไม้สำลีออก
จากการใช้งานก็เห็นได้ชัดว่า ไม่ว่าจะเป็นการเก็บตัวอย่างจากช่องปากหรือโพรงจมูก การเก็บตัวอย่างนั้นเป็นงานทางเทคนิคที่ยากและมีโอกาสปนเปื้อนสูง คุณภาพของตัวอย่างที่เก็บได้มีความสัมพันธ์โดยตรงกับการตรวจวินิจฉัยในภายหลัง หากตัวอย่างที่เก็บได้มีปริมาณไวรัสต่ำ ก็มีโอกาสเกิดผลลบเท็จได้ง่าย และยากต่อการยืนยันการวินิจฉัย