ความคิดหลายอย่างเกี่ยวกับหลอดเก็บตัวอย่างไวรัส

1. เกี่ยวกับการผลิตหลอดเก็บตัวอย่างไวรัส
หลอดเก็บตัวอย่างไวรัสจัดอยู่ในกลุ่มผลิตภัณฑ์อุปกรณ์การแพทย์ ผู้ผลิตในประเทศส่วนใหญ่จดทะเบียนผลิตภัณฑ์ชั้นหนึ่ง และมีเพียงไม่กี่บริษัทที่จดทะเบียนผลิตภัณฑ์ชั้นสอง เมื่อเร็ว ๆ นี้ เพื่อตอบสนองความต้องการฉุกเฉินในเมืองอู่ฮั่นและเมืองอื่น ๆ หลายบริษัทได้ใช้ "ช่องทางฉุกเฉิน" เพื่อขออนุญาตบันทึกข้อมูลชั้นหนึ่ง หลอดเก็บตัวอย่างไวรัสประกอบด้วยไม้พันสำลีเก็บตัวอย่าง น้ำยาฆ่าเชื้อไวรัส และบรรจุภัณฑ์ภายนอก เนื่องจากไม่มีมาตรฐานระดับชาติหรือมาตรฐานอุตสาหกรรมที่เป็นหนึ่งเดียวกัน ผลิตภัณฑ์ของผู้ผลิตแต่ละรายจึงมีความแตกต่างกันอย่างมาก

1. สำลีเก็บตัวอย่าง: สำลีเก็บตัวอย่างสัมผัสกับจุดเก็บตัวอย่างโดยตรง และวัสดุของหัวสำลีเก็บตัวอย่างจะสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการตรวจจับในภายหลัง หัวสำลีเก็บตัวอย่างควรทำจากเส้นใยสังเคราะห์โพลีเอสเตอร์ (PE) หรือเรยอน (เส้นใยสังเคราะห์) ไม่สามารถใช้ฟองน้ำแคลเซียมอัลจิเนตหรือสำลีก้านไม้ (รวมถึงไม้ไผ่) ได้ และวัสดุของหัวสำลีต้องไม่เป็นผลิตภัณฑ์จากฝ้าย เนื่องจากใยฝ้ายมีการดูดซับโปรตีนสูง จึงไม่สามารถไหลเข้าสู่สารละลายจัดเก็บในภายหลังได้ง่าย และเมื่อก้านไม้หรือไม้ไผ่ที่มีแคลเซียมอัลจิเนตและส่วนประกอบที่ทำจากไม้แตก การแช่ในสารละลายจัดเก็บจะดูดซับโปรตีนและยับยั้งปฏิกิริยา PCR ในภายหลัง ขอแนะนำให้ใช้ใยสังเคราะห์ เช่น ใย PE ใยโพลีเอสเตอร์ และใยโพลีโพรพิลีนเป็นวัสดุของหัวสำลี ไม่แนะนำให้ใช้ใยธรรมชาติ เช่น ฝ้าย ไม่แนะนำให้ใช้ใยไนลอน เนื่องจากใยไนลอน (คล้ายกับหัวแปรงสีฟัน) จะดูดซับน้ำ คุณภาพต่ำ ทำให้ปริมาณตัวอย่างไม่เพียงพอ ส่งผลต่ออัตราการตรวจจับ ห้ามใช้ฟองน้ำแคลเซียมอัลจิเนตสำหรับวัสดุเก็บตัวอย่าง! ด้ามจับไม้กวาดมีสองแบบ: แบบหักและแบบติดตั้ง หลังจากเก็บตัวอย่างแล้ว ให้นำไม้กวาดที่หักใส่ในหลอดเก็บตัวอย่าง และฝาหลอดจะแตกเมื่อหักจากตำแหน่งใกล้กับหัวเก็บตัวอย่าง ด้ามจับไม้กวาดในตัวจะสอดไม้กวาดตัวอย่างลงในหลอดเก็บตัวอย่างโดยตรง และปิดฝาครอบหลอดเก็บตัวอย่างไว้ เมื่อเปรียบเทียบสองวิธีนี้ วิธีหลังค่อนข้างปลอดภัย เมื่อใช้ไม้กวาดที่หักร่วมกับหลอดเก็บตัวอย่างขนาดเล็ก อาจทำให้ของเหลวกระเด็นเข้าไปในหลอดเมื่อแตก และควรระมัดระวังความเสี่ยงต่อการปนเปื้อนที่เกิดจากการใช้งานผลิตภัณฑ์อย่างไม่ถูกต้อง ขอแนะนำให้ใช้วัสดุสำหรับด้ามจับไม้กวาดที่ทำจากท่อโพลีสไตรีน (PS) แบบกลวง หรือท่อฉีดขึ้นรูปโพลีโพรพิลีน (PP) ไม่ว่าจะใช้วัสดุชนิดใด จะไม่สามารถเติมสารเติมแต่งแคลเซียมอัลจิเนตได้ แท่งไม้หรือไม้ไผ่ กล่าวโดยสรุป ไม้พันสำลีเก็บตัวอย่างควรตรวจสอบปริมาณตัวอย่างและปริมาณการปล่อยตัวอย่าง และวัสดุที่เลือกต้องไม่มีสารที่ส่งผลต่อการทดสอบครั้งต่อไป

2. สารละลายเก็บรักษาไวรัส: มีสารละลายเก็บรักษาไวรัสสองประเภทที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในท้องตลาด ประเภทหนึ่งคือสารละลายบำรุงรักษาไวรัสที่ปรับเปลี่ยนตามตัวกลางการขนส่ง และอีกประเภทหนึ่งคือสารละลายที่ปรับเปลี่ยนสำหรับไลเสทสกัดกรดนิวคลีอิก
ส่วนประกอบหลักของสารตั้งต้นคืออาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐาน (MEM) ของอีเกิล หรือเกลือสมดุลของแฮงค์ ซึ่งเติมเกลือ กรดอะมิโน วิตามิน กลูโคส และโปรตีนที่จำเป็นต่อการอยู่รอดของไวรัส สารละลายสำหรับเก็บรักษานี้ใช้เกลือฟีนอลเรดโซเดียมเป็นตัวบ่งชี้และสารละลาย เมื่อค่า pH อยู่ที่ 6.6-8.0 สารละลายจะเป็นสีชมพู กลูโคส แอล-กลูตามีน และโปรตีนที่จำเป็นจะถูกเติมลงในสารละลายสำหรับเก็บรักษา โปรตีนจะอยู่ในรูปของซีรัมวัวจากตัวอ่อน หรืออัลบูมินจากซีรัมวัว ซึ่งสามารถทำให้เปลือกโปรตีนของไวรัสมีความเสถียร เนื่องจากสารละลายสำหรับเก็บรักษาอุดมไปด้วยสารอาหาร จึงเอื้อต่อการอยู่รอดของไวรัสและเป็นประโยชน์ต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย หากสารละลายสำหรับเก็บรักษาปนเปื้อนแบคทีเรีย จะเพิ่มจำนวนขึ้นในปริมาณมาก คาร์บอนไดออกไซด์ในเมตาบอไลต์จะทำให้ค่า pH ของสารละลายสำหรับเก็บรักษาเปลี่ยนจากสีชมพูเป็นสีเหลือง ดังนั้น ผู้ผลิตส่วนใหญ่จึงได้เพิ่มส่วนผสมต้านเชื้อแบคทีเรียลงในสูตรการผลิตของตน สารต้านเชื้อแบคทีเรียที่แนะนำ ได้แก่ เพนิซิลลิน สเตรปโตมัยซิน เจนตามัยซิน และโพลีไมซิน บี ไม่แนะนำให้ใช้โซเดียมอะไซด์และ 2-เมทิล สารยับยั้ง เช่น 4-เมทิล-4-ไอโซไทอะโซลิน-3-โอน (MCI) และ 5-คลอโร-2-เมทิล-4-ไอโซไทอะโซลิน-3-โอน (CMCI) เนื่องจากส่วนประกอบเหล่านี้มีผลต่อปฏิกิริยา PCR เนื่องจากตัวอย่างที่ได้จากสารละลายเก็บรักษานี้โดยพื้นฐานแล้วเป็นไวรัสที่มีชีวิต จึงสามารถรักษาความเป็นต้นฉบับของตัวอย่างไว้ได้มากที่สุด และไม่เพียงแต่ใช้สำหรับการสกัดและตรวจหากรดนิวคลีอิกของไวรัสเท่านั้น แต่ยังใช้ในการเพาะเลี้ยงและแยกไวรัสได้อีกด้วย อย่างไรก็ตาม โปรดทราบว่าเมื่อนำมาใช้เพื่อการตรวจจับ จำเป็นต้องทำการสกัดและการทำให้บริสุทธิ์กรดนิวคลีอิกหลังจากการทำให้หมดฤทธิ์แล้ว
สารละลายเก็บรักษาอีกชนิดหนึ่งที่เตรียมจากไลเสทสกัดกรดนิวคลีอิก ส่วนประกอบหลัก ได้แก่ เกลือสมดุล สารคีเลต EDTA เกลือกัวนิดีน (เช่น กัวนิดีนไอโซไทโอไซยาเนต กัวนิดีนไฮโดรคลอไรด์ ฯลฯ) สารลดแรงตึงผิวประจุลบ (เช่น โดเดเคนโซเดียมซัลเฟต) สารลดแรงตึงผิวประจุบวก (เช่น เตตระเดซิลไตรเมทิลแอมโมเนียมออกซาเลต) ฟีนอล 8-ไฮดรอกซีควิโนลีน ไดไธโอไทรทอล (DTT) โปรตีเนส เค และส่วนประกอบอื่นๆ สารละลายเก็บรักษานี้ใช้สำหรับแยกไวรัสโดยตรงเพื่อปลดปล่อยกรดนิวคลีอิกและกำจัด RNase หากใช้เฉพาะสำหรับ RT-PCR จะเหมาะสมกว่า แต่ไลเสทสามารถยับยั้งการทำงานของไวรัสได้ ตัวอย่างชนิดนี้ไม่สามารถใช้สำหรับการแยกเชื้อไวรัสได้

แนะนำให้ใช้สารคีเลตไอออนโลหะที่ใช้ในสารละลายรักษาไวรัสโดยใช้เกลือ EDTA (เช่น กรดไดโพแทสเซียมเอทิลีนไดอะมีนเตตราอะซิติก กรดไดโซเดียมเอทิลีนไดอะมีนเตตราอะซิติก เป็นต้น) และไม่แนะนำให้ใช้เฮปาริน (เช่น โซเดียมเฮปาริน ลิเธียมเฮปาริน) เพื่อไม่ให้ส่งผลต่อการตรวจจับ PCR
3. หลอดเก็บตัวอย่าง: ควรเลือกวัสดุของหลอดเก็บตัวอย่างอย่างระมัดระวัง มีข้อมูลบ่งชี้ว่าพอลิโพรพิลีน (Polypropylene) เกี่ยวข้องกับการดูดซับกรดนิวคลีอิก โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ความเข้มข้นของไอออนแรงดึงสูง โพลีเอทิลีน (Polyethylene) เป็นที่นิยมมากกว่าโพลีโพรพิลีน (Polypropylene) ง่ายต่อการจับ DNA/RNA พลาสติกโพลีเอทิลีน-โพรพิลีน (Polyallomer) และภาชนะพลาสติกโพลีโพรพิลีน (Polypropylene) ที่ผ่านการแปรรูปเป็นพิเศษบางชนิดเหมาะสมกว่าสำหรับการเก็บ DNA/RNA นอกจากนี้ เมื่อใช้ก้านสำลีที่แตกหักได้ หลอดเก็บตัวอย่างควรเลือกภาชนะที่มีความสูงมากกว่า 8 ซม. เพื่อป้องกันไม่ให้เนื้อหากระเด็นและปนเปื้อนเมื่อก้านสำลีแตก

4. น้ำสำหรับสารละลายถนอมรักษากระบวนการผลิต: น้ำบริสุทธิ์พิเศษที่ใช้สำหรับสารละลายถนอมรักษากระบวนการผลิตควรกรองผ่านเยื่อกรองอัลตราฟิลเตรชันที่มีน้ำหนักโมเลกุล 13,000 เพื่อให้แน่ใจว่าสามารถกำจัดสิ่งเจือปนที่เป็นโพลิเมอร์ออกจากแหล่งชีวภาพ เช่น RNase, DNase และเอนโดท็อกซินได้ และไม่แนะนำให้ใช้น้ำบริสุทธิ์ธรรมดา ควรใช้น้ำหรือน้ำกลั่น

2. การใช้หลอดเก็บตัวอย่างไวรัส

การสุ่มตัวอย่างโดยใช้หลอดสุ่มตัวอย่างไวรัสแบ่งออกเป็นการสุ่มตัวอย่างช่องปากและคอหอยและการสุ่มตัวอย่างโพรงหลังจมูกเป็นหลัก:

1. การเก็บตัวอย่างช่องปากและคอหอย: ขั้นแรกให้กดลิ้นด้วยไม้กดลิ้น จากนั้นยื่นหัวของไม้พันสำลีเก็บตัวอย่างเข้าไปในลำคอเพื่อเช็ดต่อมทอนซิลคอหอยทั้งสองข้างและผนังคอหอยด้านหลัง และเช็ดผนังคอหอยด้านหลังด้วยแรงเบาๆ หลีกเลี่ยงการสัมผัสส่วนลิ้น

2. การเก็บตัวอย่างจากโพรงจมูก: วัดระยะห่างจากปลายจมูกถึงติ่งหูด้วยสำลี แล้วทำเครื่องหมายด้วยนิ้ว สอดสำลีเก็บตัวอย่างเข้าไปในโพรงจมูกในทิศทางแนวตั้งของจมูก (ใบหน้า) สำลีควรยื่นยาวอย่างน้อยครึ่งหนึ่งของความยาวติ่งหูถึงปลายจมูก ทิ้งสำลีไว้ในจมูกเป็นเวลา 15-30 วินาที หมุนเบาๆ 3-5 ครั้ง แล้วดึงสำลีออก
สังเกตได้ไม่ยากจากวิธีการใช้ ไม่ว่าจะเป็นการใช้ไม้พันสำลีเช็ดคอหอย (oropharyngeal swab) หรือไม้พันสำลีเช็ดโพรงจมูก (nasopharyngeal swab) การเก็บตัวอย่างเป็นงานทางเทคนิคที่ยากและมีการปนเปื้อน คุณภาพของตัวอย่างที่เก็บได้ขึ้นอยู่กับผลการตรวจในภายหลังโดยตรง หากตัวอย่างที่เก็บมีค่าปริมาณไวรัสต่ำ มักเกิดผลลบลวง (false negative) และยากต่อการยืนยันการวินิจฉัย