1. Om tillverkning av virusprovtagningsrör
Virusprovtagningsrör tillhör medicintekniska produkter. De flesta inhemska tillverkare är registrerade enligt förstklassiga produkter, och få företag är registrerade enligt andraklassiga produkter. För att möta de akuta behoven i Wuhan och andra platser har många företag nyligen valt "nödkanalen" och ansökt om förstaklassigt registertillstånd. Virusprovtagningsröret består av en provtagningspinne, viruskonserveringslösning och ytterförpackning. Eftersom det inte finns någon enhetlig nationell standard eller branschstandard varierar produkterna från olika tillverkare kraftigt.
1. Provtagningspinne: Provtagningspinnen är i direkt kontakt med provtagningsplatsen, och materialet i provtagningshuvudet är nära relaterat till den efterföljande detektionen. Provtagningspinnens huvud ska vara tillverkat av polyester (PE) syntetfiber eller rayon (konstfiber). Kalciumalginatsvampar eller träpinnar (inklusive bambupinnar) kan inte användas, och materialet i pinnen får inte vara bomullsprodukter. Eftersom bomullsfibrer har en stark adsorption av protein är det inte lätt att eluera in i den efterföljande förvaringslösningen; och när en träpinne eller bambupinne som innehåller kalciumalginat och träkomponenter går sönder, kommer blötläggning i förvaringslösningen också att adsorbera protein, och till och med hämma den efterföljande PCR-reaktionen. Det rekommenderas att använda syntetfibrer som PE-fiber, polyesterfiber och polypropenfiber som material i pinnens huvud. Naturfibrer som bomull rekommenderas inte. Nylonfibrer rekommenderas inte heller eftersom nylonfibrer (liknande tandborsthuvuden) absorberar vatten. Dåliga nylonfibrer (liknande tandborsthuvuden) absorberar vatten. Dåliga nylonfibrer (liknande tandborsthuvuden) absorberar vatten. Dåliga nylonfibrer (liknande tandborsthuvuden) kan resultera i otillräcklig provtagningsvolym, vilket påverkar detektionshastigheten. Kalciumalginatsvampar är förbjudna för provtagning av pinnens material! Pinnens handtag finns i två typer: trasiga och inbyggda. Den trasiga provpinnen placeras i förvaringsröret efter provtagning, och rörets lock bryts efter att ha brutits från positionen nära provtagningshuvudet. Den inbyggda provpinnen placeras direkt i förvaringsröret efter provtagning, och förvaringsrörets lock monteras. Rikta in det lilla hålet med handtagets övre del och dra åt rörlocket. Jämfört med de två metoderna är den senare relativt säker. När den trasiga provpinnen används tillsammans med ett mindre förvaringsrör kan det orsaka vätskestänk i röret om det går sönder, och full uppmärksamhet bör ägnas åt risken för kontaminering orsakad av felaktig användning av produkten. Det rekommenderas att använda ihåligt polystyren (PS) extruderat rör eller polypropen (PP) injektionsveckrör som material i provpinnens handtag. Oavsett vilket material som används får inte kalciumalginattillsatser tillsättas; träpinnar eller bambupinnar. Kort sagt, provtagningspinnen bör säkerställa mängden provtagning och mängden frisättning, och de valda materialen får inte innehålla ämnen som påverkar efterföljande tester.
2. Viruskonserveringslösning: Det finns två typer av viruskonserveringslösningar som används i stor utsträckning på marknaden, en är en viruskonserveringslösning modifierad baserat på transportmediet, och den andra är en modifierad lösning för nukleinsyraextraktionslysat.
Huvudkomponenten i den förstnämnda är Eagle's basic culture medium (MEM) eller Hanks balanserade salt, som tillsätts med de salter, aminosyror, vitaminer, glukos och protein som är nödvändiga för virusets överlevnad. Denna förvaringslösning använder fenolrött natriumsalt som indikator och lösning. När pH-värdet är 6,6-8,0 är lösningen rosa. Nödvändig glukos, L-glutamin och protein tillsätts till konserveringslösningen. Proteinet tillhandahålls i form av fetalt bovint serum eller bovint serumalbumin, vilket kan stabilisera virusets proteinskal. Eftersom konserveringslösningen är rik på näringsämnen är den gynnsam för virusets överlevnad men också fördelaktig för bakterietillväxt. Om konserveringslösningen är förorenad med bakterier kommer den att föröka sig i stora mängder. Koldioxiden i dess metaboliter kommer att orsaka att konserveringslösningens pH-värde sjunker från rosa till gult. Därför har de flesta tillverkare tillsatt antibakteriella ingredienser i sina formuleringar. De rekommenderade antibakteriella medlen är penicillin, streptomycin, gentamicin och polymyxin B. Natriumazid och 2-metyl rekommenderas inte. Hämmare som 4-metyl-4-isotiazolin-3-on (MCI) och 5-klor-2-metyl-4-isotiazolin-3-on (CMCI) rekommenderas inte eftersom dessa komponenter har en effekt på PCR-reaktionen. Eftersom provet som tillhandahålls av denna konserveringslösning i grunden är ett levande virus, kan provets originalitet bibehållas i största möjliga utsträckning, och det kan användas inte bara för extraktion och detektion av virusnukleinsyror, utan även för odling och isolering av virus. Det bör dock noteras att när det används för detektion måste nukleinsyraextraktion och rening utföras efter inaktivering.
En annan typ av konserveringslösning framställd baserad på nukleinsyraextraktionslysat, huvudkomponenterna är balanserade salter, EDTA-kelatbildande medel, guanidinsalt (såsom guanidinisotiocyanat, guanidinhydroklorid, etc.), anjoniskt tensid (såsom dodekannatriumsulfat), katjoniska tensider (såsom tetradecyltrimetylammoniumoxalat), fenol, 8-hydroxikinolin, ditiotreitol (DTT), proteinas K och andra komponenter. Denna lagringslösning är avsedd att direkt klyva viruset för att frigöra nukleinsyran och eliminera RNase. Om den endast används för RT-PCR är den mer lämplig, men lysatet kan inaktivera viruset. Denna typ av prov kan inte användas för separation av viruskulturer.
Det rekommenderas att metalljonkelatbildaren som används i viruskonserveringslösningen använder EDTA-salter (såsom dikaliumetylendiamintetraättiksyra, dinatriumetylendiamintetraättiksyra, etc.), och det rekommenderas inte att använda heparin (såsom natriumheparin, litiumheparin) för att inte påverka PCR-detektionen.
3. Konserveringsrör: Materialet i konserveringsröret bör väljas noggrant. Det finns data som tyder på att polypropen (polypropylen) är relaterat till adsorption av nukleinsyra, särskilt vid hög jonkoncentration. Polyeten (polyeten) är mer att föredra än polypropen (polypropylen). Lätt att greppa DNA/RNA. Polyeten-propylenpolymer (polyallomer) plast och vissa specialbearbetade polypropen (polypropylen) plastbehållare är mer lämpade för DNA/RNA-förvaring. Dessutom, när man använder en ömtålig bomullspinne, bör man försöka välja en behållare med en höjd på mer än 8 cm i förvaringsröret för att förhindra att innehållet stänker och kontamineras när bomullspinnen bryts.
4. Vatten för konserveringslösning i produktionen: Det ultrarena vattnet som används för konserveringslösning i produktionen bör filtreras genom ett ultrafiltreringsmembran med en molekylvikt på 13 000 för att säkerställa att polymerföroreningar från biologiska källor, såsom RNase, DNase och endotoxin, avlägsnas, och vanlig rening rekommenderas inte. Vatten eller destillerat vatten.
2. Användning av virusprovtagningsrör
Provtagning med virusprovtagningsrör är huvudsakligen indelad i orofaryngeal provtagning och nasofaryngeal provtagning:
1. Orofaryngeal provtagning: Tryck först på tungan med tungspateln, för sedan ut provtagningspinnen i halsen för att torka av de bilaterala svalgmandlarna och den bakre svalgväggen, och torka sedan av den bakre svalgväggen med lätt kraft. Undvik att vidröra tungenheten.
2. Nasofaryngealt prov: mät avståndet från nässpetsen till örsnibben med en bomullspinne och markera med ett finger. För in provtagningspinnen i näshålan i riktning mot den vertikala näsan (ansiktet). Pinnen ska sträcka sig minst halva örsnibbens längd till nässpetsen. Låt pinnen sitta kvar i näsan i 15–30 sekunder, rotera försiktigt 3–5 gånger och dra ut pinnen.
Det är inte svårt att se utifrån användningsmetoden om det är en orofaryngeal eller nasofaryngeal pinnprovtagning, provtagning är en teknisk uppgift som är svår och kontaminerad. Kvaliteten på det insamlade provet är direkt relaterad till den efterföljande detektionen. Om det insamlade provet har en låg virusmängd är det lätt att orsaka falska negativa resultat och svårt att bekräfta diagnosen.
Publiceringstid: 21 juni 2020
