1. O výrobe skúmaviek na odber vzoriek vírusu
Skúmavky na odber vzoriek vírusu patria medzi zdravotnícke pomôcky. Väčšina domácich výrobcov je registrovaná ako prvotriedne produkty a len málo spoločností je registrovaných ako druhotriedne produkty. V poslednom čase, aby vyhoveli núdzovým potrebám Wu-chanu a iných miest, mnoho spoločností prijalo „núdzový kanál“ „Požiadajte o povolenie na záznam prvej triedy“. Skúmavka na odber vzoriek vírusu sa skladá z tampónu na odber vzoriek, roztoku na konzerváciu vírusu a vonkajšieho obalu. Keďže neexistuje jednotná národná norma ani priemyselná norma, produkty rôznych výrobcov sa značne líšia.
1. Tampón na odber vzoriek: Tampón na odber vzoriek je v priamom kontakte s miestom odberu vzoriek a materiál hlavice na odber vzoriek úzko súvisí s následnou detekciou. Hlavica tampónu na odber vzoriek by mala byť vyrobená zo syntetického polyesterového (PE) vlákna alebo umelého vlákna (rayon). Nemožno použiť alginátovú špongiu alebo drevené tyčinky (vrátane bambusových tyčiniek) a materiál hlavice tampónu nemôže byť z bavlnených výrobkov. Pretože bavlnené vlákno má silnú adsorpciu bielkovín, nie je ľahké ho eluovať do následného skladovacieho roztoku; a ak je drevená alebo bambusová tyčinka obsahujúca alginát vápenatý a drevené komponenty zlomená, namočená v skladovacom roztoku tiež adsorbuje bielkoviny a dokonca môže inhibovať následnú PCR reakciu. Na materiál hlavice tampónu sa odporúča použiť syntetické vlákna, ako sú PE vlákna, polyesterové vlákna a polypropylénové vlákna. Prírodné vlákna, ako je bavlna, sa neodporúčajú. Nylonové vlákna sa tiež neodporúčajú, pretože nylonové vlákna (podobne ako hlavice zubných kefiek) absorbujú vodu zle, čo vedie k nedostatočnému objemu vzorky, čo ovplyvňuje mieru detekcie. Alginátová špongia na odber vzoriek je zakázaná! Rukoväť tampónu má dva typy: zlomenú a vstavanú. Zlomený tampón sa po odbere vzorky vloží do úložnej skúmavky a uzáver skúmavky sa po zlomení v blízkosti odberovej hlavice zlomí; vstavaný tampón po odbere vzorky priamo vloží odberový tampón do úložnej skúmavky a zabuduje sa kryt skúmavky. Zarovnajte malý otvor s hornou časťou rukoväte a utiahnite kryt skúmavky. Pri porovnaní týchto dvoch metód je druhá relatívne bezpečná. Ak sa zlomený tampón používa v spojení s menšou úložnou skúmavkou, môže pri zlomení spôsobiť rozstreknutie tekutiny do skúmavky a je potrebné venovať plnú pozornosť riziku kontaminácie spôsobenej nesprávnym použitím produktu. Ako materiál rukoväte tampónu sa odporúča použiť dutú extrudovanú polystyrénovú (PS) skúmavku alebo vstrekovaciu ryhovaciu skúmavku z polypropylénu (PP). Bez ohľadu na použitý materiál sa nesmú pridávať prísady alginátu vápenatého; drevené tyčinky ani bambusové tyčinky. Stručne povedané, odberový tampón by mal zabezpečiť množstvo odobratého vzorky a množstvo uvoľneného vzorky a vybrané materiály nesmú obsahovať látky, ktoré ovplyvňujú následné testovanie.
2. Roztok na konzerváciu vírusov: Na trhu sa bežne používajú dva druhy roztokov na konzerváciu vírusov, jeden je roztok na udržiavanie vírusov modifikovaný na základe transportného média a druhý je modifikovaný roztok na extrakciu nukleových kyselín z lyzátu.
Hlavnou zložkou prvého z nich je Eagleovo základné kultivačné médium (MEM) alebo Hankova vyvážená soľ, do ktorej sa pridávajú soli, aminokyseliny, vitamíny, glukóza a bielkoviny potrebné na prežitie vírusu. Tento skladovací roztok používa ako indikátor a roztok sodnú soľ fenolovej červene. Keď je hodnota pH 6,6 – 8,0, roztok je ružový. Do konzervačného roztoku sa pridáva potrebná glukóza, L-glutamín a bielkoviny. Bielkoviny sa poskytujú vo forme fetálneho bovinného séra alebo bovinného sérového albumínu, ktoré môžu stabilizovať proteínový obal vírusu. Pretože konzervačný roztok je bohatý na živiny, je priaznivý pre prežitie vírusu, ale je tiež prospešný pre rast baktérií. Ak je konzervačný roztok kontaminovaný baktériami, budú sa množiť vo veľkom množstve. Oxid uhličitý v jeho metabolitoch spôsobí, že pH konzervačného roztoku klesne z ružovej na žltú. Preto väčšina výrobcov pridáva do svojich receptúr antibakteriálne zložky. Odporúčané antibakteriálne látky sú penicilín, streptomycín, gentamicín a polymyxín B. Azid sodný a 2-metyl sa neodporúčajú. Inhibítory ako 4-metyl-4-izotiazolin-3-ón (MCI) a 5-chlór-2-metyl-4-izotiazolin-3-ón (CMCI) majú vplyv na PCR reakciu. Keďže vzorka získaná týmto konzervačným roztokom je v podstate živý vírus, originalita vzorky sa dá zachovať v maximálnej miere a možno ju použiť nielen na extrakciu a detekciu nukleových kyselín vírusu, ale aj na kultiváciu a izoláciu vírusov. Treba však poznamenať, že pri použití na detekciu sa musí extrakcia a purifikácia nukleových kyselín vykonať až po inaktivácii.
Ďalší druh konzervačného roztoku pripraveného na báze lyzátu extrakcie nukleových kyselín, ktorého hlavnými zložkami sú vyvážené soli, chelatačné činidlo EDTA, guanidínová soľ (ako je guanidín-izotiokyanát, guanidín-hydrochlorid atď.), aniónová povrchovo aktívna látka (ako je dodekán-síran sodný), katiónové povrchovo aktívne látky (ako je tetradecyltrimetylamónium-oxalát), fenol, 8-hydroxychinolín, ditiotreitol (DTT), proteináza K a ďalšie zložky. Tento skladovací roztok slúži na priame štiepenie vírusu, čím sa uvoľní nukleová kyselina a eliminuje RNáza. Ak sa používa iba na RT-PCR, je vhodnejší, ale lyzát môže inaktivovať vírus. Tento typ vzorky sa nemôže použiť na separáciu vírusových kultúr.
Ako chelatačné činidlo pre kovové ióny použité v roztoku na konzerváciu vírusov sa odporúča použiť soli EDTA (ako je kyselina etyléndiamíntetraoctová s dvojdraselnou soľou draselnej soli, kyselina etyléndiamíntetraoctová s dvojsodnou soľou draselnej soli atď.) a neodporúča sa používať heparín (ako je heparín sodný, heparín lítny), aby sa neovplyvnila detekcia PCR.
3. Konzervačná skúmavka: Materiál konzervačnej skúmavky by sa mal vyberať starostlivo. Existujú údaje naznačujúce, že polypropylén (polypropylén) súvisí s adsorpciou nukleových kyselín, najmä pri vysokej koncentrácii iónov, pričom polyetylén (polyetylén) je výhodnejší ako polypropylén (polypropylén). Ľahko uchopiteľná DNA/RNA. Na skladovanie DNA/RNA sú vhodnejšie nádoby z polyetylén-propylénového polyméru (polyallomer) a niektoré špeciálne spracované polypropylénové (polypropylénové) plasty. Okrem toho, pri použití rozbitného tampónu by sa mala snažiť vybrať nádobu s výškou väčšou ako 8 cm, aby sa zabránilo postriekaniu a kontaminácii obsahu pri rozbití tampónu.
4. Voda na konzervačný roztok pri výrobe: Ultračistá voda použitá na konzervačný roztok pri výrobe by sa mala filtrovať cez ultrafiltračnú membránu s molekulovou hmotnosťou 13 000, aby sa zabezpečilo odstránenie polymérnych nečistôt z biologických zdrojov, ako sú RNáza, DNáza a endotoxín, a bežné čistenie sa neodporúča. Voda alebo destilovaná voda.
2. Použitie skúmaviek na odber vzoriek vírusu
Odber vzoriek pomocou skúmavky na odber vzoriek vírusu sa delí hlavne na orofaryngeálny odber a nazofaryngeálny odber:
1. Odber vzoriek z orofaryngu: Najprv stlačte jazyk pomocou tlačidla na jazyk, potom zasuňte hlavičku odberového tampónu do hrdla, aby ste utreli obojstranné faryngeálne mandle a zadnú stenu hltana, a zadnú stenu hltana utrite jemnou silou, pričom sa nedotýkajte jazyka.
2. Odber vzoriek z nosohltanu: pomocou tampónu zmerajte vzdialenosť od špičky nosa k ušnému lalôčiku a označte prstom, vložte tampón do nosovej dutiny v smere vertikálneho nosa (tváre), tampón by mal siahať aspoň do polovice dĺžky ušného lalôčika po špičku nosa. Nechajte tampón v nose 15 – 30 sekúnd, jemne ním 3 – 5-krát otočte a tampón vytiahnite.
Z metódy použitia nie je ťažké vidieť, či už ide o orofaryngeálny alebo nazofaryngeálny výter, odber vzoriek je technická úloha, ktorá je náročná a kontaminovaná. Kvalita odobratej vzorky priamo súvisí s následnou detekciou. Ak má odobratá vzorka nízku vírusovú záťaž, ľahko sa vyskytnú falošne negatívne výsledky a diagnóza sa ťažko potvrdí.
Čas uverejnenia: 21. júna 2020
