1. Об изготовлении пробирок для забора вирусов
Пробирки для забора вируса относятся к изделиям медицинского назначения. Большинство отечественных производителей зарегистрированы в соответствии с продукцией первого класса, и лишь немногие компании зарегистрированы в соответствии с продукцией второго класса. В последнее время, чтобы удовлетворить экстренные потребности Уханя и других городов, многие компании воспользовались «экстренным каналом»: «Подать заявку на получение разрешения на запись первого класса». Пробирка для забора вируса состоит из тампона для забора, раствора для консервации вируса и внешней упаковки. Поскольку единого национального или отраслевого стандарта не существует, продукция разных производителей сильно различается.
1. Тампон для отбора проб: Тампон для отбора проб непосредственно контактирует с местом отбора проб, а материал головки тампона тесно связан с последующим обнаружением. Головка тампона для отбора проб должна быть изготовлена из синтетического полиэфирного (ПЭ) волокна или вискозы (искусственного волокна). Нельзя использовать губки с альгинатом кальция или деревянные палочки (включая бамбуковые), а материал головки тампона не может быть хлопковым. Поскольку хлопковое волокно обладает сильной адсорбцией белка, его трудно элюировать в последующий раствор для хранения; и если деревянная или бамбуковая палочка, содержащая альгинат кальция и деревянные компоненты, сломана, замачивание в растворе для хранения также адсорбирует белок и даже может ингибировать последующую реакцию ПЦР. Рекомендуется использовать синтетические волокна, такие как ПЭ, полиэфирное и полипропиленовое волокно для материала головки тампона. Натуральные волокна, такие как хлопок, не рекомендуются. Нейлоновые волокна также не рекомендуются, поскольку нейлоновые волокна (аналогичные головкам зубных щеток) впитывают воду. Плохо, что приводит к недостаточному объему пробы, что влияет на скорость обнаружения. Губка из альгината кальция запрещена для отбора проб материала тампона! Ручка тампона бывает двух типов: сломанная и встроенная. Сломанный тампон помещается в пробирку для хранения после отбора пробы, а крышка пробирки ломается после того, как была сломана из положения рядом с головкой пробоотборника; встроенный тампон непосредственно помещает тампон для отбора проб в пробирку для хранения после отбора пробы, а крышка трубки для хранения встроена Совместите небольшое отверстие с верхней частью ручки и затяните крышку трубки. Сравнивая два метода, последний является относительно безопасным. Когда сломанный тампон используется вместе с пробиркой для хранения меньшего размера, это может привести к разбрызгиванию жидкости в пробирке при разрушении, и следует уделять особое внимание риску загрязнения, вызванному неправильным использованием продукта. Рекомендуется использовать полую экструдированную трубку из полистирола (PS) или инжекционную складчатую трубку из полипропилена (PP) для материала ручки тампона. Независимо от того, какой материал используется, добавки альгината кальция не могут быть добавлены; Деревянные или бамбуковые палочки. Проще говоря, тампон для отбора проб должен обеспечивать необходимое количество пробы и количество высвобождаемой пробы, а выбранные материалы не должны содержать веществ, влияющих на результаты последующих испытаний.
2. Раствор для сохранения вирусов: на рынке широко используются два вида растворов для сохранения вирусов: один — это раствор для сохранения вирусов, модифицированный на основе транспортной среды, а другой — это модифицированный раствор для лизата экстракции нуклеиновых кислот.
Основным компонентом первой является основная питательная среда Игла (MEM) или сбалансированная солевая среда Хэнка, в которую добавляют соли, аминокислоты, витамины, глюкозу и белок, необходимые для выживания вируса. В этом растворе для хранения в качестве индикатора и раствора используется натриевая соль фенолового красного. При значении pH от 6,6 до 8,0 раствор становится розовым. В раствор для сохранения добавляют необходимую глюкозу, L-глутамин и белок. Белок предоставляется в форме эмбриональной бычьей сыворотки или бычьего сывороточного альбумина, который может стабилизировать белковую оболочку вируса. Поскольку раствор для сохранения богат питательными веществами, он способствует выживанию вируса, но также полезен для роста бактерий. Если раствор для сохранения загрязнен бактериями, они будут размножаться в больших количествах. Диоксид углерода в его метаболитах приведет к тому, что pH раствора для сохранения понизится с розового до желтого. Поэтому большинство производителей добавляют антибактериальные ингредиенты в свои рецептуры. Рекомендуемые антибактериальные средства - пенициллин, стрептомицин, гентамицин и полимиксин B. Азид натрия и 2-метил не рекомендуются. Ингибиторы, такие как 4-метил-4-изотиазолин-3-он (MCI) и 5-хлор-2-метил-4-изотиазолин-3-он (CMCI), поскольку эти компоненты влияют на реакцию ПЦР. Поскольку образец, предоставленный этим консервирующим раствором, в основном представляет собой живой вирус, оригинальность образца может быть сохранена в максимальной степени, и его можно использовать не только для экстракции и обнаружения вирусных нуклеиновых кислот, но также для культивирования и выделения вирусов. Однако следует отметить, что при использовании для обнаружения экстракция и очистка нуклеиновых кислот должны проводиться после инактивации.
Другой тип раствора для консервации, приготовленный на основе лизата экстракции нуклеиновых кислот, содержит сбалансированные соли, хелатирующий агент ЭДТА, соль гуанидина (например, изотиоцианат гуанидина, гидрохлорид гуанидина и т.д.), анионное поверхностно-активное вещество (например, сульфат натрия додекана), катионное поверхностно-активное вещество (например, оксалат тетрадецилтриметиламмония), фенол, 8-гидроксихинолин, дитиотреитол (ДТТ), протеиназу К и другие компоненты. Этот раствор для хранения предназначен для прямого расщепления вируса с высвобождением нуклеиновой кислоты и удалением РНКазы. Он более подходит для использования только в ОТ-ПЦР, но лизат может инактивировать вирус. Этот тип образца не может быть использован для выделения вирусной культуры.
В качестве хелатирующего агента ионов металлов, используемого в растворе для консервации вируса, рекомендуется использовать соли ЭДТА (например, дикалийэтилендиаминтетрауксусную кислоту, динатрийэтилендиаминтетрауксусную кислоту и т. д.), и не рекомендуется использовать гепарин (например, натрийгепарин, литийгепарин), чтобы не повлиять на обнаружение ПЦР.
3. Трубка для хранения: Материал трубки для хранения следует выбирать тщательно. Имеются данные, что полипропилен (PP) связан с адсорбцией нуклеиновых кислот, особенно при высокой концентрации ионов. Полиэтилен (PE) предпочтительнее полипропилена (PP). Легко захватывает ДНК/РНК. Контейнеры из полиэтиленпропиленового полимера (PO) и некоторые специально обработанные полипропиленовые контейнеры (PP) лучше подходят для хранения ДНК/РНК. Кроме того, при использовании хрупкого тампона следует выбирать контейнер высотой более 8 см, чтобы предотвратить разбрызгивание и загрязнение содержимого при разрушении тампона.
4. Вода для приготовления раствора для консервации продукции: сверхчистая вода, используемая для приготовления раствора для консервации продукции, должна быть профильтрована через ультрафильтрационную мембрану с молекулярной массой 13 000 для обеспечения удаления полимерных примесей биологического происхождения, таких как РНКазы, ДНКазы и эндотоксины. Обычная очистка не рекомендуется. Используйте воду или дистиллированную воду.
2. Использование пробирок для забора проб вируса
Отбор проб с использованием пробирки для взятия проб вируса в основном делится на отбор проб из ротоглотки и из носоглотки:
1. Взятие мазка из ротоглотки: сначала прижмите язык шпателем, затем введите головку тампона в горло, чтобы протереть двусторонние глоточные миндалины и заднюю стенку глотки, и с легким усилием протрите заднюю стенку глотки, избегая касания языка.
2. Взятие пробы из носоглотки: измерьте тампоном расстояние от кончика носа до мочки уха и отметьте пальцем, введите тампон в носовую полость по направлению к вертикали носа (лицу); тампон должен заходить как минимум на половину длины мочки уха до кончика носа. Оставьте тампон в носу на 15–30 секунд, аккуратно поверните 3–5 раз и извлеките тампон.
Нетрудно понять по способу взятия образца, будь то мазок из ротоглотки или носоглотки, что его взятие — это технически сложная и загрязненная процедура. Качество полученного образца напрямую связано с последующим выявлением вируса. Если в образце низкая вирусная нагрузка, легко получить ложноотрицательный результат, что затрудняет подтверждение диагноза.
Время публикации: 21 июня 2020 г.
