1. Sobre a fabricação de tubos de coleta de amostras de vírus
Os tubos de coleta de amostras de vírus pertencem a dispositivos médicos. A maioria dos fabricantes nacionais é registrada como produtos de primeira classe, enquanto poucas empresas são registradas como produtos de segunda classe. Recentemente, para atender às necessidades emergenciais de Wuhan e outras localidades, muitas empresas adotaram o "canal de emergência" para solicitar a permissão de registro de primeira classe. O tubo de coleta de amostras de vírus é composto por um cotonete, uma solução de preservação de vírus e uma embalagem externa. Como não existe um padrão nacional ou padrão industrial unificado, os produtos dos diversos fabricantes variam muito.
1. Cotonete de amostragem: O cotonete de amostragem entra em contato direto com o local da amostragem, e o material da cabeça de amostragem está intimamente relacionado à detecção subsequente. A cabeça do cotonete de amostragem deve ser feita de fibra sintética de poliéster (PE) ou rayon (fibra sintética). Esponjas de alginato de cálcio ou cotonetes de madeira (incluindo bambu) não podem ser usados, e o material da cabeça do cotonete não pode ser algodão. Como a fibra de algodão tem forte adsorção de proteínas, não é fácil eluí-la na solução de armazenamento subsequente; e quando um bastão de madeira ou bambu contendo alginato de cálcio e componentes de madeira é quebrado, a imersão na solução de armazenamento também adsorve proteínas e pode até mesmo inibir a reação de PCR subsequente. Recomenda-se o uso de fibras sintéticas, como fibra de PE, fibra de poliéster e fibra de polipropileno, para o material da cabeça do cotonete. Fibras naturais como algodão não são recomendadas. Fibras de nylon também não são recomendadas, pois as fibras de nylon (semelhantes às cabeças de escova de dentes) absorvem água. Ruim, resultando em volume de amostragem insuficiente, afetando a taxa de detecção. A esponja de alginato de cálcio é proibida para amostragem de material de swab! O cabo do swab tem dois tipos: quebrado e embutido. O swab quebrado é colocado no tubo de armazenamento após a coleta, e a tampa do tubo é quebrada após ser quebrada da posição próxima à cabeça de amostragem; o swab embutido coloca diretamente o swab de amostragem no tubo de armazenamento após a coleta, e a tampa do tubo do tubo de armazenamento é embutida. Alinhe o pequeno orifício com a parte superior do cabo e aperte a tampa do tubo. Comparando os dois métodos, o último é relativamente seguro. Quando o swab quebrado é usado em conjunto com um tubo de armazenamento de tamanho menor, pode causar respingos de líquido no tubo quando quebrado, e deve-se prestar total atenção ao risco de contaminação causado pelo uso inadequado do produto. Recomenda-se o uso de tubo extrudado de poliestireno (PS) oco ou tubo de vinco por injeção de polipropileno (PP) para o material do cabo do swab. Independentemente do material usado, aditivos de alginato de cálcio não podem ser adicionados; Varetas de madeira ou bambu. Em resumo, o cotonete de amostragem deve garantir a quantidade de amostra e a quantidade de liberação, e os materiais selecionados não devem conter substâncias que afetem os testes subsequentes.
2. Solução de preservação de vírus: Existem dois tipos de soluções de preservação de vírus amplamente utilizadas no mercado: uma é uma solução de manutenção de vírus modificada com base no meio de transporte, e a outra é uma solução modificada para lisado de extração de ácido nucleico.
O principal componente do primeiro é o meio de cultura básico de Eagle (MEM) ou sal balanceado de Hank, ao qual são adicionados os sais, aminoácidos, vitaminas, glicose e proteínas necessários para a sobrevivência do vírus. Esta solução de armazenamento utiliza sal de sódio vermelho de fenol como indicador e solução. Quando o valor de pH é de 6,6 a 8,0, a solução apresenta uma coloração rosa. A glicose, a L-glutamina e a proteína necessárias são adicionadas à solução de preservação. A proteína é fornecida na forma de soro fetal bovino ou albumina sérica bovina, que pode estabilizar a camada proteica do vírus. Como a solução de preservação é rica em nutrientes, ela é propícia à sobrevivência do vírus, mas também benéfica para o crescimento de bactérias. Se a solução de preservação estiver contaminada com bactérias, elas se multiplicarão em grandes quantidades. O dióxido de carbono em seus metabólitos fará com que o pH da solução de preservação caia de rosa para amarelo. Portanto, a maioria dos fabricantes adicionou ingredientes antibacterianos às suas formulações. Os agentes antibacterianos recomendados são penicilina, estreptomicina, gentamicina e polimixina B. Azida sódica e 2-metil não são inibidores recomendados, como 4-metil-4-isotiazolin-3-ona (MCI) e 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona (CMCI), pois esses componentes afetam a reação de PCR. Como a amostra fornecida por esta solução de preservação é basicamente um vírus vivo, a originalidade da amostra pode ser preservada ao máximo, e ela pode ser usada não apenas para a extração e detecção de ácidos nucleicos virais, mas também para o cultivo e isolamento de vírus. No entanto, deve-se observar que, quando usado para detecção, a extração e a purificação do ácido nucleico devem ser realizadas após a inativação.
Outro tipo de solução de preservação preparada com base no lisado de extração de ácido nucleico, cujos principais componentes são sais balanceados, agente quelante EDTA, sal de guanidina (como isotiocianato de guanidina, cloridrato de guanidina, etc.), surfactante aniônico (como dodecano, sulfato de sódio), surfactantes catiônicos (como oxalato de tetradeciltrimetilamônio), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteinase K e outros componentes. Esta solução de armazenamento cliva diretamente o vírus para liberar o ácido nucleico e eliminar a RNase. Se usada apenas para RT-PCR, é mais adequada, mas o lisado pode inativar o vírus. Este tipo de amostra não pode ser usado para separação de cultura viral.
O agente quelante de íons metálicos usado na solução de preservação do vírus é recomendado para usar sais de EDTA (como ácido etilenodiaminotetracético dipotássico, ácido etilenodiaminotetracético dissódico, etc.), e não é recomendado usar heparina (como heparina sódica, heparina de lítio), para não afetar a detecção de PCR.
3. Tubo de preservação: O material do tubo de preservação deve ser selecionado cuidadosamente. Há dados que sugerem que o polipropileno (polipropileno) está relacionado à adsorção de ácido nucleico, especialmente em altas concentrações de íons de tensão. O polietileno (polietileno) é mais preferível do que o polipropileno (polipropileno). DNA/RNA de fácil apreensão. Plásticos de polímero de polietileno-propileno (polialômero) e alguns recipientes de plástico de polipropileno (polipropileno) especialmente processados são mais adequados para armazenamento de DNA/RNA. Além disso, ao usar um cotonete quebrável, o tubo de armazenamento deve ser selecionado em um recipiente com altura superior a 8 cm para evitar respingos e contaminação do conteúdo quando o cotonete for quebrado.
4. Água para solução de preservação da produção: A água ultrapura utilizada para a solução de preservação da produção deve ser filtrada através de uma membrana de ultrafiltração com peso molecular de 13.000 para garantir a remoção de impurezas poliméricas de fontes biológicas, como RNase, DNase e endotoxina. A purificação comum não é recomendada. Água ou água destilada.
2. Uso de tubos de coleta de amostras de vírus
A coleta de amostras com o tubo de coleta de vírus é dividida principalmente em coleta orofaríngea e coleta nasofaríngea:
1. Amostragem orofaríngea: primeiro pressione a língua com o abaixador de língua, depois estenda a cabeça do cotonete de amostragem na garganta para limpar as amígdalas faríngeas bilaterais e a parede posterior da faringe e limpe a parede posterior da faringe com força leve, evitando tocar na unidade da língua.
2. Amostragem nasofaríngea: meça a distância da ponta do nariz ao lóbulo da orelha com um cotonete e marque com o dedo, insira o cotonete de amostragem na cavidade nasal na direção do nariz vertical (rosto), o cotonete deve se estender pelo menos metade do comprimento do lóbulo da orelha até a ponta do nariz, deixe o cotonete no nariz por 15 a 30 segundos, gire suavemente de 3 a 5 vezes e retire o cotonete.
Não é difícil perceber pelo método de utilização, seja um swab orofaríngeo ou um swab nasofaríngeo, que a coleta de amostras é uma tarefa técnica, complexa e contaminada. A qualidade da amostra coletada está diretamente relacionada à detecção subsequente. Se a amostra coletada tiver carga viral baixa, é fácil causar falsos negativos e dificultar a confirmação do diagnóstico.
Data de publicação: 21/06/2020
