1. Om produksjon av virusprøverør
Virusprøvetakingsrør tilhører medisinsk utstyr. De fleste innenlandske produsenter er registrert i henhold til førsteklasses produkter, og få selskaper er registrert i henhold til annenrangs produkter. Nylig, for å møte nødbehovene i Wuhan og andre steder, har mange selskaper tatt "nødkanalen" og "søk om tillatelse til førsteklasses registrering". Virusprøvetakingsrøret består av en prøvetakingspinne, viruskonserveringsløsning og ytteremballasje. Siden det ikke finnes noen enhetlig nasjonal standard eller industristandard, varierer produktene fra ulike produsenter sterkt.
1. Prøvetakingspinne: Prøvetakingspinnen er i direkte kontakt med prøvetakingsstedet, og materialet i prøvetakingshodet er nært knyttet til den påfølgende deteksjonen. Prøvetakingspinnehodet skal være laget av polyester (PE) syntetisk fiber eller rayon (kunstfiber). Kalsiumalginatsvamp eller trepinner (inkludert bambuspinner) kan ikke brukes, og materialet i pinnehodet kan ikke være bomullsprodukter. Fordi bomullsfibre har en sterk adsorpsjon av protein, er det ikke lett å eluere inn i den påfølgende oppbevaringsløsningen. Og når en trepinne eller bambuspinne som inneholder kalsiumalginat og trekomponenter er ødelagt, vil bløtlegging i oppbevaringsløsningen også absorbere protein, og til og med det kan hemme den påfølgende PCR-reaksjonen. Det anbefales å bruke syntetiske fibre som PE-fiber, polyesterfiber og polypropylenfiber som materiale i pinnehodet. Naturfibre som bomull anbefales ikke. Nylonfibre anbefales heller ikke fordi nylonfibre (ligner på tannbørstehoder) absorberer vann. Dårlig, noe som resulterer i utilstrekkelig prøvetakingsvolum, noe som påvirker deteksjonsraten. Kalsiumalginatsvamp er forbudt for prøvetaking av pinnemateriale! Pinnehåndtak har to typer: ødelagt og innebygd. Den ødelagte vattpinnen plasseres i oppbevaringsrøret etter prøvetaking, og rørkorken brytes etter å ha blitt brutt fra posisjonen nær prøvetakingshodet. Den innebygde vattpinnen plasseres direkte i oppbevaringsrøret etter prøvetaking, og oppbevaringsrørets deksel bygges inn. Juster det lille hullet med toppen av håndtaket og stram rørdekselet. Sammenlignet med de to metodene er sistnevnte relativt trygg. Når den ødelagte vattpinnen brukes sammen med et mindre oppbevaringsrør, kan det føre til væskesprut i røret når det er ødelagt, og full oppmerksomhet bør rettes mot risikoen for forurensning forårsaket av feil bruk av produktet. Det anbefales å bruke hule polystyren (PS) ekstruderte rør eller polypropylen (PP) injeksjonsrør som materiale i vattpinnens håndtak. Uansett hvilket materiale som brukes, kan ikke kalsiumalginattilsetningsstoffer tilsettes; trepinner eller bambuspinner. Kort sagt, prøvetakingspinnen bør sikre mengden prøvetaking og mengden utslipp, og de valgte materialene må ikke inneholde stoffer som påvirker etterfølgende testing.
2. Viruskonserveringsløsning: Det finnes to typer viruskonserveringsløsninger som er mye brukt på markedet. Den ene er en virusvedlikeholdsløsning modifisert basert på transportmediet, og den andre er en modifisert løsning for nukleinsyreekstraksjonslysat.
Hovedkomponenten i førstnevnte er Eagle's basic culture medium (MEM) eller Hanks balanserte salt, som tilsettes salter, aminosyrer, vitaminer, glukose og protein som er nødvendig for virusoverlevelse. Denne lagringsløsningen bruker fenolrødt natriumsalt som indikator og løsning. Når pH-verdien er 6,6-8,0, er løsningen rosa. Nødvendig glukose, L-glutamin og protein tilsettes konserveringsløsningen. Proteinet tilføres i form av føtalt bovint serum eller bovint serumalbumin, som kan stabilisere virusets proteinskall. Fordi konserveringsløsningen er rik på næringsstoffer, er den gunstig for virusets overlevelse, men også gunstig for bakterievekst. Hvis konserveringsløsningen er forurenset med bakterier, vil den formere seg i store mengder. Karbondioksidet i metabolittene vil føre til at konserveringsløsningens pH faller fra rosa til gul. Derfor har de fleste produsenter tilsatt antibakterielle ingredienser i formuleringene sine. De anbefalte antibakterielle midlene er penicillin, streptomycin, gentamicin og polymyksin B. Natriumazid og 2-metyl anbefales ikke. Inhibitorer som 4-metyl-4-isotiazolin-3-on (MCI) og 5-klor-2-metyl-4-isotiazolin-3-on (CMCI) anbefales ikke, fordi disse komponentene har en effekt på PCR-reaksjonen. Siden prøven fra denne konserveringsløsningen i utgangspunktet er et levende virus, kan prøvens originalitet bevares i størst mulig grad, og den kan ikke bare brukes til ekstraksjon og deteksjon av virusnukleinsyrer, men også til dyrking og isolering av virus. Det bør imidlertid bemerkes at når den brukes til deteksjon, må nukleinsyreekstraksjon og rensing utføres etter inaktivering.
En annen type konserveringsløsning fremstilt basert på nukleinsyreekstraksjonslysat, hovedkomponentene er balanserte salter, EDTA-kelateringsmiddel, guanidinsalt (som guanidinisotiocyanat, guanidinhydroklorid, etc.), anionisk overflateaktivt middel (som dodekannatriumsulfat), kationiske overflateaktive stoffer (som tetradecyltrimetylammoniumoksalat), fenol, 8-hydroksykinolin, ditiotreitol (DTT), proteinase K og andre komponenter. Denne lagringsløsningen er for å kløyve viruset direkte for å frigjøre nukleinsyren og eliminere RNase. Hvis den kun brukes til RT-PCR, er den mer egnet, men lysatet kan inaktivere viruset. Denne typen prøve kan ikke brukes til separasjon av viruskulturer.
Det anbefales å bruke EDTA-salter (som dikaliumetylendiamintetraeddiksyre, dinatriumetylendiamintetraeddiksyre, etc.) for metallionkeleringsmidlet som brukes i viruskonserveringsløsningen, og det anbefales ikke å bruke heparin (som natriumheparin, litiumheparin) for ikke å påvirke PCR-deteksjonen.
3. Oppbevaringsrør: Materialet i oppbevaringsrøret bør velges nøye. Det finnes data som tyder på at polypropylen (polypropylen) er relatert til adsorpsjon av nukleinsyre, spesielt ved høy spenningsionkonsentrasjon. Polyetylen (polyetylen) er mer foretrukket enn polypropylen (polypropylen). DNA/RNA er lett å få tak i. Polyetylen-propylenpolymer (polyallomer)-plast og noen spesialbehandlede polypropylen (polypropylen)-plastbeholdere er mer egnet for oppbevaring av DNA/RNA. I tillegg, når du bruker en skjør vattpinne, bør du prøve å velge en beholder med en høyde på over 8 cm i oppbevaringsrøret for å forhindre at innholdet spruter og forurenses når vattpinnen knuses.
4. Vann til produksjonskonserveringsløsning: Det ultrarene vannet som brukes til produksjonskonserveringsløsningen bør filtreres gjennom en ultrafiltreringsmembran med en molekylvekt på 13 000 for å sikre fjerning av polymerforurensninger fra biologiske kilder, som RNase, DNase og endotoksin, og vanlig rensing anbefales ikke. Vann eller destillert vann.
2. Bruk av virusprøverør
Prøvetaking ved bruk av virusprøverøret er hovedsakelig delt inn i orofaryngeal prøvetaking og nasofaryngeal prøvetaking:
1. Orofaryngeal prøvetaking: Trykk først på tungen med tungespatelen, fortsett deretter med hodet på prøvetakingspinnen inn i halsen for å tørke av de bilaterale svelgmandlene og den bakre svelgveggen, og tørk av den bakre svelgveggen med lett kraft. Unngå å berøre tungeenheten.
2. Prøvetaking fra nese og svelg: Mål avstanden fra nesetippen til øreflippen med en vattpinne og merk med en finger. Før prøvetakingspinnen inn i nesehulen i retning av den vertikale nesen (ansiktet). Pinnen skal strekke seg fra minst halvparten av øreflippen til nesetippen. La pinnen være i nesen i 15–30 sekunder, roter forsiktig 3–5 ganger, og trekk ut pinnen.
Det er ikke vanskelig å se ut fra bruksmetoden om det er en orofaryngeal eller nasofaryngeal vattpinne. Prøvetaking er en teknisk oppgave som er vanskelig og forurenset. Kvaliteten på den innsamlede prøven er direkte relatert til den påfølgende deteksjonen. Hvis den innsamlede prøven har en lav virusmengde, er det lett å forårsake falske negative resultater, og det er vanskelig å bekrefte diagnosen.
Publisert: 21. juni 2020
