1. Over de productie van virusmonsternamebuizen.
Virusmonsterbuisjes behoren tot de medische hulpmiddelen. De meeste binnenlandse fabrikanten zijn geregistreerd voor eersteklas producten, terwijl slechts enkele bedrijven geregistreerd zijn voor tweedeklas producten. Recentelijk hebben veel bedrijven, om te voldoen aan de noodbehoeften in Wuhan en andere gebieden, via een "noodprocedure" een aanvraag ingediend voor een eersteklas registratie. Een virusmonsterbuisje bestaat uit een wattenstaafje, een virusconserveringsvloeistof en een buitenverpakking. Omdat er geen uniforme nationale of industriële norm bestaat, variëren de producten van verschillende fabrikanten sterk.
1. Afnamestaafje: Het afnamestaafje komt direct in contact met de bemonsteringslocatie en het materiaal van de afnamekop is van groot belang voor de daaropvolgende detectie. De afnamekop moet gemaakt zijn van polyester (PE) synthetische vezels of rayon (kunstvezels). Wattenstaafjes van calciumalginaat of houten stokjes (inclusief bamboestokjes) mogen niet worden gebruikt en het materiaal van de afnamekop mag geen katoen zijn. Katoenvezels hebben namelijk een sterke adsorptie van eiwitten, waardoor deze moeilijk in de bewaarvloeistof terechtkomen. Bovendien zal een houten stokje of bamboestokje met calciumalginaat en houtcomponenten, wanneer het breekt, eiwitten adsorberen tijdens het weken in de bewaarvloeistof, wat zelfs de daaropvolgende PCR-reactie kan remmen. Het wordt aanbevolen om synthetische vezels zoals PE-vezels, polyestervezels en polypropyleenvezels te gebruiken voor de afnamekop. Natuurlijke vezels zoals katoen worden afgeraden. Nylonvezels worden ook afgeraden, omdat nylonvezels (vergelijkbaar met tandenborstelkopjes) slecht water absorberen, wat resulteert in onvoldoende bemonsteringsvolume en een lagere detectiesnelheid. Calciumalginaatspons is verboden als materiaal voor bemonsteringswattenstaafjes! Er zijn twee soorten wattenstaafjes met een handvat: gebroken en ingebouwd. Bij een gebroken wattenstaafje wordt het wattenstaafje na bemonstering in het bewaarbuisje geplaatst en wordt de dop van het buisje gebroken bij de punt van het wattenstaafje. Bij een ingebouwd wattenstaafje wordt het wattenstaafje na bemonstering direct in het bewaarbuisje geplaatst en wordt de dop van het bewaarbuisje vastgedraaid door het kleine gaatje uit te lijnen met de bovenkant van het handvat. De laatste methode is relatief veilig. Wanneer een gebroken wattenstaafje wordt gebruikt in combinatie met een kleiner bewaarbuisje, kan er vloeistof in het buisje spatten. Let daarom goed op het risico op besmetting door onjuist gebruik van het product. Het wordt aanbevolen om holle buizen van geëxtrudeerd polystyreen (PS) of spuitgegoten polypropyleen (PP) te gebruiken voor het handvat van het wattenstaafje. Ongeacht het gebruikte materiaal, mogen er geen calciumalginaatadditieven worden toegevoegd. Houten stokjes of bamboestokjes zijn ook niet toegestaan. Kortom, het bemonsteringsstaafje moet de juiste hoeveelheid bemonstering en de juiste hoeveelheid vrijgave garanderen, en de geselecteerde materialen mogen geen stoffen bevatten die latere tests beïnvloeden.
2. Oplossing voor virusconservering: Er zijn twee soorten oplossingen voor virusconservering die veelvuldig op de markt worden gebruikt: een virusconserveringsoplossing die is aangepast op basis van het transportmedium, en een aangepaste oplossing voor nucleïnezuurextractielysaat.
Het belangrijkste bestanddeel van de eerstgenoemde is Eagle's basiscultuurmedium (MEM) of Hank's gebalanceerde zoutoplossing, waaraan de zouten, aminozuren, vitaminen, glucose en eiwitten zijn toegevoegd die nodig zijn voor het overleven van het virus. Deze bewaaroplossing gebruikt fenolrood-natriumzout als indicator en oplossing. Wanneer de pH-waarde tussen 6,6 en 8,0 ligt, is de oplossing roze. De benodigde glucose, L-glutamine en eiwitten worden aan de bewaaroplossing toegevoegd. De eiwitten worden geleverd in de vorm van foetaal runderserum of runderalbumine, wat de eiwitmantel van het virus kan stabiliseren. Omdat de bewaaroplossing rijk is aan voedingsstoffen, bevordert dit het overleven van het virus, maar is het ook gunstig voor de groei van bacteriën. Als de bewaaroplossing besmet raakt met bacteriën, zullen deze zich in grote hoeveelheden vermenigvuldigen. De koolstofdioxide in hun metabolieten zorgt ervoor dat de pH van de bewaaroplossing daalt van roze naar geel. Daarom voegen de meeste fabrikanten antibacteriële ingrediënten toe aan hun formuleringen. De aanbevolen antibacteriële middelen zijn penicilline, streptomycine, gentamicine en polymyxine B. Natriumazide en 2-methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) en 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (CMCI) worden niet aanbevolen, omdat deze componenten de PCR-reactie beïnvloeden. Omdat het monster dat met deze conserveringsoplossing wordt geleverd in principe een levend virus is, blijft de originaliteit van het monster zoveel mogelijk behouden. Het kan niet alleen worden gebruikt voor de extractie en detectie van virusnucleïnezuren, maar ook voor de kweek en isolatie van virussen. Het is echter belangrijk om te weten dat bij gebruik voor detectie de extractie en zuivering van nucleïnezuren na inactivatie moet plaatsvinden.
Een ander type conserveringsoplossing, bereid op basis van een lysaat verkregen uit nucleïnezuurextractie, bestaat voornamelijk uit gebalanceerde zouten, EDTA als chelerend middel, guanidinezout (zoals guanidine-isothiocyanaat, guanidinehydrochloride, enz.), anionische oppervlakteactieve stoffen (zoals natriumdodecaansulfaat), kationische oppervlakteactieve stoffen (zoals tetradecyltrimethylammoniumoxalaat), fenol, 8-hydroxychinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K en andere componenten. Deze bewaaroplossing splitst het virus direct om het nucleïnezuur vrij te maken en RNase te elimineren. Het is met name geschikt voor gebruik bij RT-PCR, maar het lysaat kan het virus inactiveren. Dit type monster is daarom niet geschikt voor viruskweek.
Het wordt aanbevolen om voor de conserveringsoplossing van virussen EDTA-zouten te gebruiken als metaalionchelerend middel (zoals dikaliumethyleendiaminetetraazijnzuur, dinatriumethyleendiaminetetraazijnzuur, enz.), en het gebruik van heparine (zoals natriumheparine, lithiumheparine) wordt afgeraden om de PCR-detectie niet te beïnvloeden.
3. Bewaarbuis: Het materiaal van de bewaarbuis moet zorgvuldig worden gekozen. Er zijn gegevens die suggereren dat polypropyleen (Polypropylene) de adsorptie van nucleïnezuur bevordert, met name bij een hoge ionenconcentratie. Polyethyleen (Polyethylene) is daarom geschikter dan polypropyleen, omdat het DNA/RNA gemakkelijker vasthoudt. Polyethyleen-propyleenpolymeer (Polyallomer) en sommige speciaal bewerkte polypropyleen (Polypropylene) plastic containers zijn geschikter voor de opslag van DNA/RNA. Bovendien moet bij gebruik van een breekbaar wattenstaafje een bewaarbuis met een hoogte van meer dan 8 cm worden gekozen om te voorkomen dat de inhoud spat en besmet raakt wanneer het wattenstaafje breekt.
4. Water voor de conserveringsoplossing: Het ultrazuivere water dat voor de conserveringsoplossing wordt gebruikt, moet worden gefilterd door een ultrafiltratiemembraan met een moleculair gewicht van 13.000 om de verwijdering van polymere onzuiverheden van biologische oorsprong, zoals RNase, DNase en endotoxinen, te garanderen. Gewoon gezuiverd water of gedestilleerd water wordt niet aanbevolen.
2. Gebruik van virusmonsternamebuizen
Het afnemen van monsters met behulp van een virusmonsterbuisje wordt hoofdzakelijk onderverdeeld in orofaryngeale monstername en nasofaryngeale monstername:
1. Orofaryngeale bemonstering: Druk eerst met de tongspatel op de tong en breng vervolgens het uiteinde van het bemonsteringsstaafje in de keelholte om de beide keelamandelen en de achterste keelwand af te nemen. Veeg de achterste keelwand met lichte druk af en vermijd contact met de tong.
2. Neuskeelafname: meet met een wattenstaafje de afstand van de neuspunt tot de oorlel en markeer dit met een vinger. Breng het wattenstaafje in de neusholte in de richting van de neus (het gezicht). Het wattenstaafje moet minstens tot halverwege de lengte van de oorlel reiken, tot aan de neuspunt. Laat het wattenstaafje 15-30 seconden in de neus zitten, draai het voorzichtig 3-5 keer rond en trek het vervolgens terug.
Het is niet moeilijk te zien dat, ongeacht of het om een keeluitstrijkje of een neusuitstrijkje gaat, het afnemen van een monster een technisch lastige en besmettelijke taak is. De kwaliteit van het afgenomen monster is direct van invloed op de daaropvolgende detectie. Als het afgenomen monster een lage virusconcentratie heeft, is de kans op vals-negatieve resultaten groot, waardoor de diagnose moeilijk te bevestigen is.
Geplaatst op: 21 juni 2020
