1. Over de productie van virusmonsterbuisjes
Virusmonsterbuisjes behoren tot de medische hulpmiddelen. De meeste binnenlandse fabrikanten zijn geregistreerd voor producten van de eerste klasse, en slechts enkele bedrijven voor producten van de tweede klasse. Om te voldoen aan de noodbehoeften van Wuhan en andere plaatsen, hebben veel bedrijven onlangs gebruikgemaakt van het "noodkanaal": "Vraag toestemming aan voor registratie van de eerste klasse". Het virusmonsterbuisje bestaat uit een wattenstaafje, een virusconserveermiddel en een buitenverpakking. Omdat er geen uniforme nationale of industriële standaard is, lopen de producten van verschillende fabrikanten sterk uiteen.
1. Bemonsteringsstaafje: Het bemonsteringsstaafje komt direct in contact met de bemonsteringslocatie en het materiaal van de bemonsteringskop is nauw verbonden met de daaropvolgende detectie. De kop van het bemonsteringsstaafje moet gemaakt zijn van polyester (PE) synthetische vezel of rayon (kunstmatige vezel). Calciumalginaatsponzen of houten staafjes (inclusief bamboestokjes) kunnen niet worden gebruikt en het materiaal van de kop van het staafje mag geen katoen zijn. Omdat katoenvezels een sterke adsorptie van eiwitten hebben, is het niet gemakkelijk om te elueren in de daaropvolgende bewaaroplossing; en wanneer een houten of bamboestokje met calciumalginaat en houten onderdelen breekt, zal weken in de bewaaroplossing ook eiwitten adsorberen en zelfs de daaropvolgende PCR-reactie remmen. Het wordt aanbevolen om synthetische vezels zoals PE-vezels, polyestervezels en polypropyleenvezels te gebruiken als materiaal voor de kop van het staafje. Natuurlijke vezels zoals katoen worden afgeraden. Nylonvezels worden ook afgeraden, omdat nylonvezels (vergelijkbaar met tandenborstelkoppen) water absorberen. Slecht, wat resulteert in een onvoldoende bemonsteringsvolume, wat de detectiegraad beïnvloedt. Calciumalginaatspons is verboden voor het afnemen van wattenstaafjes! Er zijn twee soorten wattenstaafjes: gebroken en ingebouwd. Het gebroken wattenstaafje wordt na de monstername in de bewaarbuis geplaatst en de dop van de buis wordt gebroken nadat deze is gebroken vlakbij de monsterkop; het ingebouwde wattenstaafje plaatst het wattenstaafje direct na de monstername in de bewaarbuis en de dop van de bewaarbuis is ingebouwd. Lijn het kleine gaatje uit met de bovenkant van de hendel en draai de dop van de buis vast. Vergelijk de twee methoden: de laatste is relatief veilig. Wanneer het gebroken wattenstaafje wordt gebruikt in combinatie met een kleinere bewaarbuis, kan er vloeistof in de buis spatten wanneer deze breekt. Wees daarom extra voorzichtig met het risico op besmetting door onjuist gebruik van het product. Het wordt aanbevolen om holle geëxtrudeerde polystyreen (PS) buis of polypropyleen (PP) injectieplooibuis te gebruiken als materiaal voor de wattenstaafjes. Ongeacht het gebruikte materiaal mogen er geen calciumalginaatadditieven worden toegevoegd; houten stokjes of bamboestokjes. Kortom, het monsternamestaafje moet de hoeveelheid monster en de hoeveelheid vrijgave garanderen en de geselecteerde materialen mogen geen stoffen bevatten die de daaropvolgende tests beïnvloeden.
2. Virusconserveringsoplossing: Er zijn twee soorten virusconserveringsoplossingen die veel worden gebruikt op de markt. De ene is een virusconserveringsoplossing die is aangepast op basis van het transportmedium, en de andere is een aangepaste oplossing voor nucleïnezuurextractielysaat.
Het hoofdbestanddeel van de eerste is Eagle's basiskweekmedium (MEM) of Hank's gebalanceerd zout, waaraan de zouten, aminozuren, vitaminen, glucose en eiwitten worden toegevoegd die nodig zijn voor het overleven van het virus. Deze bewaaroplossing gebruikt fenolrood-natriumzout als indicator en oplossing. Bij een pH-waarde van 6,6-8,0 is de oplossing roze. De benodigde glucose, L-glutamine en eiwitten worden aan de bewaaroplossing toegevoegd. Het eiwit wordt geleverd in de vorm van foetaal runderserum of runderserumalbumine, dat de eiwitmantel van het virus kan stabiliseren. Omdat de bewaaroplossing rijk is aan voedingsstoffen, bevordert deze niet alleen de overleving van het virus, maar ook de groei van bacteriën. Als de bewaaroplossing verontreinigd is met bacteriën, zullen deze zich in grote hoeveelheden vermenigvuldigen. De koolstofdioxide in de metabolieten zorgt ervoor dat de pH van de bewaaroplossing daalt van roze naar geel. Daarom voegen de meeste fabrikanten antibacteriële ingrediënten toe aan hun formuleringen. De aanbevolen antibacteriële middelen zijn penicilline, streptomycine, gentamicine en polymyxine B. Natriumazide en 2-methyl worden niet aanbevolen. Remmers zoals 4-methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) en 5-chloor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (CMCI) hebben een effect op de PCR-reactie. Omdat het monster dat deze conserveringsoplossing oplevert in principe een levend virus is, kan de originaliteit van het monster zoveel mogelijk behouden blijven en kan het niet alleen worden gebruikt voor de extractie en detectie van virusnucleïnezuren, maar ook voor de kweek en isolatie van virussen. Bij gebruik voor detectie moet de extractie en zuivering van nucleïnezuren echter na inactivering plaatsvinden.
Een ander soort bewaaroplossing is gebaseerd op nucleïnezuurextractielysaat. De belangrijkste componenten zijn gebalanceerde zouten, EDTA-chelator, guanidinezout (zoals guanidine-isothiocyanaat, guanidinehydrochloride, enz.), anionische oppervlakteactieve stoffen (zoals dodecaannatriumsulfaat), kationische oppervlakteactieve stoffen (zoals tetradecyltrimethylammoniumoxalaat), fenol, 8-hydroxychinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K en andere componenten. Deze bewaaroplossing is bedoeld om het virus direct te splitsen, waardoor het nucleïnezuur vrijkomt en de RNase wordt geëlimineerd. Het is geschikter voor gebruik alleen voor RT-PCR, maar het lysaat kan het virus inactiveren. Dit type monster kan niet worden gebruikt voor viruskweekscheiding.
Het wordt aanbevolen om voor het in de virusconserveeroplossing gebruikte metaalioncheleringsmiddel EDTA-zouten te gebruiken (zoals dikaliumethyleendiaminetetra-azijnzuur, dinatriumethyleendiaminetetra-azijnzuur, enz.). Het wordt afgeraden om heparine te gebruiken (zoals natriumheparine, lithiumheparine) om de PCR-detectie niet te beïnvloeden.
3. Conserveringsbuis: Het materiaal van de conserveringsbuis moet zorgvuldig worden gekozen. Er zijn gegevens die suggereren dat polypropyleen (Polypropyleen) verband houdt met de adsorptie van nucleïnezuur, vooral bij hoge spanningsconcentraties. Polyethyleen (Polyethyleen) heeft de voorkeur boven polypropyleen (Polypropyleen). Gemakkelijk te grijpen DNA/RNA. Polyethyleen-propyleenpolymeer (Polyallomeer) en sommige speciaal bewerkte polypropyleen (Polypropyleen) plastic containers zijn geschikter voor DNA/RNA-opslag. Bij gebruik van een breekbaar wattenstaafje moet u bovendien een container kiezen met een hoogte van meer dan 8 cm om te voorkomen dat de inhoud spat en besmet raakt wanneer het wattenstaafje breekt.
4. Water voor de productieconserveeroplossing: Het ultrazuivere water dat voor de productieconserveeroplossing wordt gebruikt, moet worden gefilterd door een ultrafiltratiemembraan met een moleculair gewicht van 13.000 om de verwijdering van polymeerverontreinigingen uit biologische bronnen, zoals RNase, DNase en endotoxine, te garanderen. Normale zuivering wordt niet aanbevolen. Water of gedestilleerd water.
2. Gebruik van virusmonsterbuizen
De monsterafname met behulp van de virusmonsterbuis wordt hoofdzakelijk onderverdeeld in orofaryngeale monsterafname en nasofaryngeale monsterafname:
1. Orofaryngeale monsterafname: Druk eerst met de tongspatel op de tong en steek vervolgens de kop van het monsterafnamestaafje in de keel om de bilaterale faryngeale amandelen en de achterste faryngeale wand schoon te vegen. Veeg de achterste faryngeale wand met lichte kracht schoon. Vermijd contact met de tongeenheid.
2. Neus-keelholtemonstername: meet de afstand van de punt van de neus tot de oorlel met een wattenstaafje en markeer dit met uw vinger. Breng het wattenstaafje in de neusholte in de richting van de verticale neus (gezicht). Het wattenstaafje moet zich uitstrekken over ten minste de halve lengte van de oorlel tot de punt van de neus. Laat het wattenstaafje 15-30 seconden in de neus zitten, draai het voorzichtig 3-5 keer rond en haal het wattenstaafje er weer uit.
Het is niet moeilijk om aan de hand van de gebruiksmethode te zien of het om een orofaryngeale of nasofaryngeale swab gaat. De monsterafname is een technische, complexe en besmette taak. De kwaliteit van het afgenomen monster is direct gerelateerd aan de daaropvolgende detectie. Als het afgenomen monster een lage viral load heeft, is de kans op vals-negatieve uitslagen groot en is het moeilijk om de diagnose te bevestigen.
Plaatsingstijd: 21-06-2020
