ဗိုင်းရပ်စ်နမူနာယူသည့်ပြွန်နှင့်ပတ်သက်သည့် အတွေးအမြင်အချို့

၁။ ဗိုင်းရပ်စ်နမူနာယူသည့်ပြွန်များ ထုတ်လုပ်ခြင်းအကြောင်း
ဗိုင်းရပ်စ်နမူနာယူသည့်ပြွန်များသည် ဆေးဘက်ဆိုင်ရာပစ္စည်းကိရိယာများနှင့်သက်ဆိုင်သည်။ ပြည်တွင်းထုတ်လုပ်သူအများစုကို ပထမတန်းစားထုတ်ကုန်များအလိုက် မှတ်ပုံတင်ထားပြီး ဒုတိယတန်းစားထုတ်ကုန်များအလိုက် မှတ်ပုံတင်ထားသော ကုမ္ပဏီအနည်းငယ်သာရှိသည်။ မကြာသေးမီက ဝူဟန်နှင့် အခြားနေရာများ၏ အရေးပေါ်လိုအပ်ချက်များကို ဖြည့်ဆည်းရန်အတွက် ကုမ္ပဏီများစွာသည် “အရေးပေါ်လမ်းကြောင်း” “ပထမတန်းစား မှတ်တမ်းတင်ခွင့်ပြုချက်အတွက် လျှောက်ထားပါ” ကို အသုံးပြုခဲ့ကြသည်။ ဗိုင်းရပ်စ်နမူနာယူသည့်ပြွန်တွင် နမူနာယူသည့်တို့ဖတ်၊ ဗိုင်းရပ်စ်ထိန်းသိမ်းသည့်အရည်နှင့် အပြင်ဘက်ထုပ်ပိုးမှုများ ပါဝင်သည်။ ပေါင်းစည်းထားသော အမျိုးသားစံနှုန်း သို့မဟုတ် စက်မှုလုပ်ငန်းစံနှုန်းမရှိသောကြောင့် ထုတ်လုပ်သူအမျိုးမျိုး၏ ထုတ်ကုန်များသည် အလွန်ကွဲပြားသည်။

၁။ နမူနာယူတံ- နမူနာယူတံသည် နမူနာယူသည့်နေရာနှင့် တိုက်ရိုက်ထိတွေ့ပြီး နမူနာယူခေါင်း၏ပစ္စည်းသည် နောက်ဆက်တွဲ ထောက်လှမ်းမှုနှင့် နီးကပ်စွာ ဆက်စပ်နေသည်။ နမူနာယူတံခေါင်းကို Polyester (PE) ဓာတုအမျှင် သို့မဟုတ် Rayon (လူလုပ်အမျှင်) ဖြင့် ပြုလုပ်သင့်သည်။ ကယ်လ်စီယမ် အယ်လ်ဂျီနိတ် ရေမြှုပ် သို့မဟုတ် သစ်သားတုတ်တံများ (ဝါးချောင်းများအပါအဝင်) ကို အသုံးမပြုရ၊ ရေမြှုပ်ခေါင်း၏ပစ္စည်းသည် ချည်မျှင်ထုတ်ကုန်များ မဖြစ်ရပါ။ ချည်မျှင်သည် ပရိုတင်းစုပ်ယူမှုအားကောင်းသောကြောင့် နောက်ဆက်တွဲသိုလှောင်မှုအရည်ထဲသို့ ပျော်ဝင်ရန် မလွယ်ကူပါ။ ကယ်လ်စီယမ် အယ်လ်ဂျီနိတ်နှင့် သစ်သားအစိတ်အပိုင်းများပါရှိသော သစ်သားတုတ် သို့မဟုတ် ဝါးချောင်းကို ချိုးလိုက်သောအခါ သိုလှောင်မှုအရည်တွင် စိမ်ခြင်းသည် ပရိုတင်းကိုလည်း စုပ်ယူမည်ဖြစ်ပြီး နောက်ဆက်တွဲ PCR ဓာတ်ပြုမှုကိုပင် ဟန့်တားနိုင်သည်။ ရေမြှုပ်ခေါင်း၏ပစ္စည်းအတွက် PE အမျှင်၊ polyester အမျှင်နှင့် polypropylene အမျှင်ကဲ့သို့သော ဓာတုအမျှင်များကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။ ချည်မျှင်ကဲ့သို့သော သဘာဝအမျှင်များကို မထောက်ခံပါ။ နိုင်လွန်အမျှင်များ (သွားပွတ်တံခေါင်းများနှင့်ဆင်တူသည်) သည် ရေစုပ်ယူသောကြောင့် နိုင်လွန်အမျှင်များကိုလည်း မထောက်ခံပါ။ ညံ့ဖျင်းသောကြောင့် နမူနာယူမှုပမာဏ မလုံလောက်ဘဲ ထောက်လှမ်းမှုနှုန်းကို ထိခိုက်စေပါသည်။ ကယ်လ်စီယမ် အယ်လ်ဂျီနိတ် ရေမြှုပ်ကို နမူနာယူတံပစ္စည်းအတွက် တားမြစ်ထားသည်။ ရေမြှုပ်လက်ကိုင်တွင် အမျိုးအစားနှစ်မျိုးရှိသည်- ကျိုးနေသောနှင့် ထည့်သွင်းထားသော။ နမူနာယူပြီးနောက် ကွဲနေသော ဂွမ်းစကို သိုလှောင်ပြွန်ထဲတွင်ထည့်ကာ နမူနာယူခေါင်းအနီးရှိ အနေအထားမှ ကွဲသွားပြီးနောက် ပြွန်အဖုံးကို ချိုးလိုက်သည်။ တပ်ဆင်ထားသော ဂွမ်းစသည် နမူနာယူပြီးနောက် နမူနာယူဂွမ်းစကို သိုလှောင်ပြွန်ထဲသို့ တိုက်ရိုက်ထည့်ကာ သိုလှောင်ပြွန်ပြွန်အဖုံးကို တပ်ဆင်ထားသည်။ အပေါက်ငယ်ကို လက်ကိုင်၏ထိပ်နှင့် ညှိပြီး ပြွန်အဖုံးကို တင်းကျပ်ပါ။ နည်းလမ်းနှစ်ခုကို နှိုင်းယှဉ်ကြည့်လျှင် နောက်ဆုံးနည်းလမ်းသည် အတော်လေး ဘေးကင်းပါသည်။ ကွဲနေသော ဂွမ်းစကို သိုလှောင်ပြွန်ငယ်နှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုသောအခါ၊ ကွဲသွားသောအခါ ပြွန်ထဲသို့ အရည်များ ပက်ဖျန်းနိုင်ပြီး ထုတ်ကုန်ကို မသင့်လျော်စွာအသုံးပြုခြင်းကြောင့် ညစ်ညမ်းမှုအန္တရာယ်ကို အပြည့်အဝအာရုံစိုက်သင့်သည်။ ဂွမ်းစလက်ကိုင်၏ပစ္စည်းအတွက် အခေါင်းပါ polystyrene (PS) extruded ပြွန် သို့မဟုတ် polypropylene (PP) injection creasing ပြွန်ကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။ မည်သည့်ပစ္စည်းကို အသုံးပြုပါစေ ကယ်လ်စီယမ် အယ်လ်ဂျီနိတ် ဖြည့်စွက်ပစ္စည်းများကို မထည့်ရပါ။ သစ်သားတုတ်များ သို့မဟုတ် ဝါးတုတ်များ။ အတိုချုပ်ပြောရလျှင် နမူနာယူဂွမ်းစသည် နမူနာယူမှုပမာဏနှင့် ထုတ်လွှတ်မှုပမာဏကို သေချာစေရမည်ဖြစ်ပြီး ရွေးချယ်ထားသောပစ္စည်းများတွင် နောက်ဆက်တွဲစမ်းသပ်မှုကို ထိခိုက်စေသော ပစ္စည်းများ မပါဝင်ရပါ။

၂။ ဗိုင်းရပ်စ်ထိန်းသိမ်းခြင်းဖြေရှင်းချက်- ဈေးကွက်တွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုနေသော ဗိုင်းရပ်စ်ထိန်းသိမ်းခြင်းဖြေရှင်းချက် နှစ်မျိုးရှိပြီး တစ်ခုမှာ သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးမီဒီယာအပေါ်အခြေခံ၍ ပြုပြင်ထားသော ဗိုင်းရပ်စ်ထိန်းသိမ်းခြင်းဖြေရှင်းချက်ဖြစ်ပြီး နောက်တစ်ခုမှာ နျူကလစ်အက်ဆစ်ထုတ်ယူခြင်း lysate အတွက် ပြုပြင်ထားသောဖြေရှင်းချက်ဖြစ်သည်။
အရင်တစ်ခုရဲ့ အဓိကအစိတ်အပိုင်းကတော့ Eagle's basic culture medium (MEM) ဒါမှမဟုတ် Hank's balanced salt ဖြစ်ပြီး ဗိုင်းရပ်စ်ရှင်သန်ဖို့အတွက် လိုအပ်တဲ့ ဆား၊ အမိုင်နိုအက်ဆစ်၊ ဗီတာမင်၊ ဂလူးကို့စ်နဲ့ ပရိုတင်းတွေ ပေါင်းထည့်ထားတာပါ။ ဒီသိုလှောင်မှုအရည်မှာ ဖီနောနီဆိုဒီယမ်ဆားကို အညွှန်းကိန်းနဲ့ အရည်အဖြစ် အသုံးပြုပါတယ်။ pH တန်ဖိုး 6.6-8.0 ဖြစ်တဲ့အခါ အရည်က ပန်းရောင်ဖြစ်ပါတယ်။ လိုအပ်တဲ့ ဂလူးကို့စ်၊ L-glutamine နဲ့ ပရိုတင်းတွေကို ထိန်းသိမ်းထားနိုင်တဲ့အရည်ထဲကို ထည့်ထားပါတယ်။ ပရိုတင်းကို fetal bovine serum ဒါမှမဟုတ် bovine serum albumin ပုံစံနဲ့ ထောက်ပံ့ပေးထားပြီး ဗိုင်းရပ်စ်ရဲ့ ပရိုတင်းအခွံကို တည်ငြိမ်စေပါတယ်။ ထိန်းသိမ်းထားနိုင်တဲ့အရည်မှာ အာဟာရဓာတ်တွေ ကြွယ်ဝတာကြောင့် ဗိုင်းရပ်စ်ရှင်သန်ဖို့ အထောက်အကူပြုရုံသာမက ဘက်တီးရီးယားတွေ ကြီးထွားမှုအတွက်လည်း အကျိုးပြုပါတယ်။ ထိန်းသိမ်းထားနိုင်တဲ့အရည်မှာ ဘက်တီးရီးယားတွေ ညစ်ညမ်းနေရင် အမြောက်အမြား ပွားများလာပါလိမ့်မယ်။ ဇီဝဖြစ်စဉ်ထုတ်ကုန်တွေမှာ ပါဝင်တဲ့ ကာဗွန်ဒိုင်အောက်ဆိုဒ်က ထိန်းသိမ်းထားနိုင်တဲ့အရည် pH ကို ပန်းရောင်ကနေ အဝါရောင်ကို ကျဆင်းစေပါတယ်။ ဒါကြောင့် ထုတ်လုပ်သူအများစုက သူတို့ရဲ့ ဖော်မြူလာတွေမှာ ဘက်တီးရီးယားဆန့်ကျင်ပစ္စည်းတွေကို ထည့်သွင်းထားပါတယ်။ အကြံပြုထားသော ဘက်တီးရီးယားပိုးသတ်ဆေးများမှာ ပင်နီဆီလင်၊ စထရပ်တိုမိုင်စင်၊ ဂျန်တမီဆင် နှင့် ပိုလီမစ်ဇင် ဘီ တို့ဖြစ်သည်။ ဆိုဒီယမ်ဇိုက် နှင့် ၂-မီသိုင်းတို့ကို 4-မီသိုင်း-၄-အိုင်ဆိုသီယာဇိုလင်-၃-ဝမ်း (MCI) နှင့် 5-ကလိုရို-၂-မီသိုင်း-၄-အိုင်ဆိုသီယာဇိုလင်-၃-ဝမ်း (CMCI) ကဲ့သို့သော တားဆီးပစ္စည်းများအဖြစ် မအသုံးပြုရန် အကြံပြုထားပါသည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် ဤအစိတ်အပိုင်းများသည် PCR တုံ့ပြန်မှုအပေါ် သက်ရောက်မှုရှိသောကြောင့်ဖြစ်သည်။ ဤထိန်းသိမ်းမှုအရည်မှ ပေးထားသော နမူနာသည် အခြေခံအားဖြင့် အသက်ရှင်နေသော ဗိုင်းရပ်စ်တစ်ခုဖြစ်သောကြောင့် နမူနာ၏ မူရင်းအရည်အသွေးကို အမြင့်ဆုံးအတိုင်းအတာအထိ ထိန်းသိမ်းထားနိုင်ပြီး ဗိုင်းရပ်စ် နျူကလစ်အက်ဆစ်များကို ထုတ်ယူခြင်းနှင့် ထောက်လှမ်းခြင်းအတွက်သာမက ဗိုင်းရပ်စ်များကို ပြုစုပျိုးထောင်ခြင်းနှင့် ခွဲထုတ်ခြင်းအတွက်ပါ အသုံးပြုနိုင်သည်။ သို့သော် ထောက်လှမ်းရန်အတွက် အသုံးပြုသည့်အခါ နျူကလစ်အက်ဆစ် ထုတ်ယူခြင်းနှင့် သန့်စင်ခြင်းကို အသက်မဝင်စေပြီးနောက် လုပ်ဆောင်ရမည်ကို သတိပြုသင့်သည်။
နျူကလစ်အက်ဆစ်ထုတ်ယူမှု လိုင်ဆိတ်ကို အခြေခံ၍ ပြင်ဆင်ထားသော အခြားထိန်းသိမ်းသည့် အရည်တစ်မျိုးဖြစ်ပြီး အဓိကပါဝင်ပစ္စည်းများမှာ ဟန်ချက်ညီသောဆားများ၊ EDTA chelating agent၊ ဂွမ်နီဒင်းဆား (ဂွမ်နီဒင်း isothiocyanate၊ ဂွမ်နီဒင်း hydrochloride စသည်)၊ အန်နီယွန် surfactant (ဒိုဒီကိန်း ဆိုဒီယမ် ဆာလဖိတ် ကဲ့သို့)၊ ကာရှင်းအိုင်းယွန်း surfactants (တက်ထရာဒက်ဆီလ်ထရီမီသိုင်းအမ်မိုနီယမ် အောက်ဆာလိတ် ကဲ့သို့)၊ ဖီနော၊ 8-hydroxyquinoline၊ dithiothreitol (DTT)၊ ပရိုတင်းနေ့စ် K နှင့် အခြားပါဝင်ပစ္စည်းများဖြစ်သည်။ ဤသိုလှောင်သည့် အရည်သည် နျူကလစ်အက်ဆစ်ကို ထုတ်လွှတ်ပြီး RNase ကို ဖယ်ရှားရန် ဗိုင်းရပ်စ်ကို တိုက်ရိုက်ခွဲထုတ်ရန်ဖြစ်သည်။ RT-PCR အတွက်သာ အသုံးပြုပါက ပိုမိုသင့်လျော်သော်လည်း လိုင်ဆိတ်သည် ဗိုင်းရပ်စ်ကို အသက်မဝင်စေနိုင်သည်။ ဤနမူနာမျိုးကို ဗိုင်းရပ်စ်ပိုးမွှားခွဲထုတ်ရန်အတွက် အသုံးမပြုနိုင်ပါ။

ဗိုင်းရပ်စ်ထိန်းသိမ်းမှုအရည်တွင်အသုံးပြုသော သတ္တုအိုင်းယွန်း chelating agent သည် EDTA ဆားများ (dipotassium ethylenediaminetetraacetic acid၊ disodium ethylenediaminetetraacetic acid စသည်) ကိုအသုံးပြုရန် အကြံပြုထားပြီး PCR ထောက်လှမ်းမှုကို မထိခိုက်စေရန်အတွက် heparin (sodium heparin၊ lithium heparin ကဲ့သို့) ကိုအသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။
၃။ ထိန်းသိမ်းထားသောပြွန်- ထိန်းသိမ်းထားသောပြွန်၏ပစ္စည်းကို ဂရုတစိုက်ရွေးချယ်သင့်သည်။ polypropylene (Polypropylene) သည် nucleic acid စုပ်ယူမှုနှင့် ဆက်စပ်နေကြောင်း၊ အထူးသဖြင့် မြင့်မားသောတင်းမာမှုအိုင်းယွန်းအာရုံစူးစိုက်မှုတွင် polyethylene (Polyethylene) သည် polypropylene (Polypropylene) ထက် ပိုမိုနှစ်သက်ကြသည်။ DNA/RNA ကို ဆုပ်ကိုင်ရလွယ်ကူသည်။ Polyethylene-propylene polymer (Polyallomer) ပလတ်စတစ်နှင့် အထူးပြုပြင်ထားသော polypropylene (Polypropylene) ပလတ်စတစ်ကွန်တိန်နာအချို့သည် DNA/RNA သိုလှောင်မှုအတွက် ပိုမိုသင့်လျော်သည်။ ထို့အပြင်၊ ကွဲလွယ်သော swab ကိုအသုံးပြုသောအခါ၊ swab ကွဲသွားသောအခါ အရာများ ပက်ဖျန်းခြင်းနှင့် ညစ်ညမ်းခြင်းမှ ကာကွယ်ရန် သိုလှောင်ပြွန်သည် အမြင့် ၈ စင်တီမီတာထက်ပိုသော ကွန်တိန်နာကို ရွေးချယ်ရန် ကြိုးစားသင့်သည်။

၄။ ထုတ်လုပ်မှုထိန်းသိမ်းခြင်း ဖျော်ရည်အတွက် ရေ- ထုတ်လုပ်မှုထိန်းသိမ်းခြင်း ဖျော်ရည်အတွက် အသုံးပြုသော အလွန်သန့်စင်သောရေကို RNase၊ DNase နှင့် endotoxin ကဲ့သို့သော ဇီဝဗေဒရင်းမြစ်များမှ ပိုလီမာမသန့်စင်မှုများကို ဖယ်ရှားပေးရန်အတွက် မော်လီကျူးအလေးချိန် ၁၃၀၀၀ ရှိသော ultrafiltration membrane မှတစ်ဆင့် စစ်ထုတ်သင့်ပြီး သာမန်သန့်စင်ခြင်းကို အကြံပြုထားခြင်းမရှိပါ။ ရေ သို့မဟုတ် ပေါင်းခံရေ။

၂။ ဗိုင်းရပ်စ်နမူနာယူသည့်ပြွန်များ အသုံးပြုခြင်း

ဗိုင်းရပ်စ်နမူနာယူသည့်ပြွန်ကို အသုံးပြု၍ နမူနာယူခြင်းကို အဓိကအားဖြင့် ပါးစပ်နှင့် လည်ချောင်းနှင့်နှာခေါင်းနှင့်လည်ချောင်း နမူနာယူခြင်းဟူ၍ ခွဲခြားထားသည်။

၁။ ပါးစပ်နှင့် အာခေါင်ဆိုင်ရာ နမူနာယူခြင်း- ဦးစွာ လျှာကို လျှာဖိကိရိယာဖြင့် ဖိပြီးနောက် နမူနာယူသည့် ဂွမ်းစ၏ ဦးခေါင်းကို လည်ချောင်းထဲသို့ ဆန့်ထုတ်ကာ နှစ်ဖက်စလုံး၏ အာခေါင်နှင့် လည်ချောင်းနောက်ဘက်နံရံကို သုတ်ပါ၊ ထို့နောက် လည်ချောင်းနောက်ဘက်နံရံကို အသာအယာ သုတ်ပါ၊ လျှာယူနစ်ကို မထိပါနှင့်။

၂။ နှာခေါင်းနှင့် လည်ချောင်းနမူနာယူခြင်း- နှာခေါင်းထိပ်မှ နားရွက်အထိ အကွာအဝေးကို တို့ဖတ်ဖြင့် တိုင်းတာပြီး လက်ချောင်းဖြင့် မှတ်သားပါ၊ နမူနာတို့ဖတ်ကို ဒေါင်လိုက်နှာခေါင်း (မျက်နှာ) ၏ ဦးတည်ရာအတိုင်း နှာခေါင်းအခေါင်းပေါက်ထဲသို့ ထိုးသွင်းပါ၊ တို့ဖတ်သည် နားရွက်ထိပ်အထိ အနည်းဆုံး အရှည်၏ ထက်ဝက်ရှိရမည်။ တို့ဖတ်ကို နှာခေါင်းထဲတွင် ၁၅-၃၀ စက္ကန့်ထားပြီး ၃-၅ ကြိမ် ညင်သာစွာလှည့်ကာ တို့ဖတ်ကို ထုတ်ယူပါ။
ပါးစပ်နှင့် လည်ချောင်းတို့ဖတ် သို့မဟုတ် နှာခေါင်းနှင့် လည်ချောင်းတို့ဖတ်ကို အသုံးပြုသည့် နည်းလမ်းမှ မြင်သာရန် မခက်ခဲပါ၊ နမူနာယူခြင်းသည် နည်းပညာဆိုင်ရာ အလုပ်တစ်ခုဖြစ်ပြီး ခက်ခဲပြီး ညစ်ညမ်းနေပါသည်။ စုဆောင်းထားသော နမူနာ၏ အရည်အသွေးသည် နောက်ဆက်တွဲ ရှာဖွေတွေ့ရှိမှုနှင့် တိုက်ရိုက် ဆက်စပ်နေပါသည်။ စုဆောင်းထားသော နမူနာတွင် ဗိုင်းရပ်စ်ပမာဏ နည်းပါးပါက၊ မှားယွင်းသော အနုတ်လက္ခဏာ ဖြစ်ပေါ်စေလွယ်ပြီး ရောဂါရှာဖွေမှုကို အတည်ပြုရန် ခက်ခဲပါသည်။