1. Mengenai pembuatan tiub pensampelan virus
Tiub pensampelan virus tergolong dalam produk peranti perubatan. Kebanyakan pengeluar domestik berdaftar mengikut produk kelas pertama, dan hanya sedikit syarikat yang berdaftar mengikut produk kelas kedua. Baru-baru ini, untuk memenuhi keperluan kecemasan Wuhan dan tempat-tempat lain, banyak syarikat telah mengambil "saluran kecemasan" "Memohon kebenaran rekod kelas pertama". Tiub pensampelan virus terdiri daripada swab pensampelan, larutan pemeliharaan virus dan pembungkusan luar. Memandangkan tiada piawaian kebangsaan atau piawaian industri yang bersatu, produk pelbagai pengeluar sangat berbeza.
1. Swab persampelan: Swab persampelan bersentuhan terus dengan tapak persampelan, dan bahan kepala persampelan berkait rapat dengan pengesanan berikutnya. Kepala swab persampelan hendaklah diperbuat daripada gentian sintetik Poliester (PE) atau Rayon (gentian buatan manusia). Span kalsium alginat atau swab kayu (termasuk batang buluh) tidak boleh digunakan, dan bahan kepala swab tidak boleh daripada produk kapas. Oleh kerana gentian kapas mempunyai penjerapan protein yang kuat, ia tidak mudah dielusi ke dalam larutan penyimpanan berikutnya; dan apabila batang kayu atau batang buluh yang mengandungi kalsium alginat dan komponen kayu patah, merendam dalam larutan penyimpanan juga akan menjerap protein, dan ia juga boleh menghalang tindak balas PCR berikutnya. Adalah disyorkan untuk menggunakan gentian sintetik seperti gentian PE, gentian poliester dan gentian polipropilena untuk bahan kepala swab. Gentian semula jadi seperti kapas tidak disyorkan. Gentian nilon juga tidak disyorkan kerana gentian nilon (serupa dengan kepala berus gigi) menyerap air. Lemah, mengakibatkan isipadu persampelan yang tidak mencukupi, yang menjejaskan kadar pengesanan. Span kalsium alginat dilarang untuk bahan swab persampelan! Pemegang swab mempunyai dua jenis: patah dan terbina dalam. Swab yang patah diletakkan di dalam tiub simpanan selepas pensampelan, dan penutup tiub dipecahkan selepas dipecahkan dari kedudukan berhampiran kepala pensampelan; swab terbina dalam terus memasukkan swab pensampelan ke dalam tiub simpanan selepas pensampelan, dan penutup tiub tiub simpanan dibina. Sejajarkan lubang kecil dengan bahagian atas pemegang dan ketatkan penutup tiub. Membandingkan kedua-dua kaedah, yang terakhir agak selamat. Apabila swab yang patah digunakan bersama-sama dengan tiub simpanan bersaiz lebih kecil, ia boleh menyebabkan percikan cecair di dalam tiub apabila dipecahkan, dan perhatian penuh harus diberikan kepada risiko pencemaran yang disebabkan oleh penggunaan produk yang tidak betul. Adalah disyorkan untuk menggunakan tiub tersemperit polistirena (PS) berongga atau tiub lipatan suntikan polipropilena (PP) untuk bahan pemegang swab. Tidak kira apa bahan yang digunakan, bahan tambahan kalsium alginat tidak boleh ditambah; batang kayu atau batang buluh. Pendek kata, swab pensampelan harus memastikan jumlah pensampelan dan jumlah pelepasan, dan bahan yang dipilih tidak boleh mempunyai bahan yang menjejaskan ujian berikutnya.
2. Penyelesaian pemeliharaan virus: Terdapat dua jenis penyelesaian pemeliharaan virus yang digunakan secara meluas di pasaran, satu ialah penyelesaian penyelenggaraan virus yang diubah suai berdasarkan medium pengangkutan, dan satu lagi ialah penyelesaian yang diubah suai untuk lisat pengekstrakan asid nukleik.
Komponen utama medium kultur asas Eagle (MEM) atau garam seimbang Hank, yang ditambah dengan garam, asid amino, vitamin, glukosa dan protein yang diperlukan untuk kelangsungan hidup virus. Larutan penyimpanan ini menggunakan garam natrium fenol merah sebagai penunjuk dan larutan. Apabila nilai pH ialah 6.6-8.0, larutan tersebut berwarna merah jambu. Glukosa, L-glutamin dan protein yang diperlukan ditambah kepada larutan pengawetan. Protein disediakan dalam bentuk serum lembu janin atau albumin serum lembu, yang boleh menstabilkan cangkerang protein virus. Oleh kerana larutan pengawetan kaya dengan nutrien, ia kondusif untuk kelangsungan hidup virus tetapi juga bermanfaat untuk pertumbuhan bakteria. Jika larutan pengawetan tercemar dengan bakteria, ia akan membiak dalam kuantiti yang banyak. Karbon dioksida dalam metabolitnya akan menyebabkan pH larutan pengawetan jatuh daripada merah jambu bertukar menjadi kuning. Oleh itu, kebanyakan pengeluar telah menambah bahan antibakteria pada formulasi mereka. Agen antibakteria yang disyorkan ialah penisilin, streptomisin, gentamisin dan polimiksin B. Natrium azida dan 2-metil tidak disyorkan. Perencat seperti 4-metil-4-isotiazolin-3-one (MCI) dan 5-kloro-2-metil-4-isotiazolin-3-one (CMCI) tidak disyorkan kerana komponen ini mempunyai kesan terhadap tindak balas PCR. Memandangkan sampel yang disediakan oleh larutan pengawetan ini pada asasnya adalah virus hidup, keaslian sampel boleh dikekalkan pada tahap yang terbaik, dan ia boleh digunakan bukan sahaja untuk pengekstrakan dan pengesanan asid nukleik virus, tetapi juga untuk penanaman dan pengasingan virus. Walau bagaimanapun, perlu diingatkan bahawa apabila digunakan untuk pengesanan, pengekstrakan dan penulenan asid nukleik mesti dilakukan selepas penyahaktifan.
Satu lagi jenis larutan pengawetan yang disediakan berdasarkan lisat pengekstrakan asid nukleik, komponen utamanya ialah garam seimbang, agen pengkelat EDTA, garam guanidin (seperti guanidin isotiosianat, guanidin hidroklorida, dll.), surfaktan anionik (seperti dodekana Natrium sulfat), surfaktan kationik (seperti tetradesiltrimetilamonium oksalat), fenol, 8-hidroksikuinolin, ditiotreitol (DTT), proteinase K dan komponen lain. Larutan penyimpanan ini adalah untuk membelah virus secara langsung untuk melepaskan asid nukleik dan menghapuskan RNase. Jika hanya digunakan untuk RT-PCR, ia lebih sesuai, tetapi lisat boleh menyahaktifkan virus. Sampel jenis ini tidak boleh digunakan untuk pemisahan kultur virus.
Agen pengkelat ion logam yang digunakan dalam larutan pengawetan virus disyorkan untuk menggunakan garam EDTA (seperti asid dipotassium etilenadiaminatetraasetik, asid dinatrium etilenadiaminatetraasetik, dll.), dan tidak disyorkan untuk menggunakan heparin (seperti natrium heparin, litium heparin), supaya tidak menjejaskan pengesanan PCR.
3. Tiub pengawetan: Bahan tiub pengawetan perlu dipilih dengan teliti. Terdapat data yang menunjukkan bahawa polipropilena (Polipropilena) berkaitan dengan penjerapan asid nukleik, terutamanya pada kepekatan ion tegangan tinggi, polietilena (Polietilena) lebih diutamakan daripada polipropilena (Polipropilena). DNA/RNA yang mudah difahami. Plastik polimer polietilena-propilena (Polyalomer) dan beberapa bekas plastik polipropilena (Polipropilena) yang diproses khas lebih sesuai untuk penyimpanan DNA/RNA. Di samping itu, apabila menggunakan swab mudah pecah, tiub penyimpanan harus cuba memilih bekas dengan ketinggian lebih daripada 8 cm untuk mengelakkan kandungan daripada terpercik dan tercemar apabila swab pecah.
4. Air untuk larutan pengawetan pengeluaran: Air ultratulen yang digunakan untuk larutan pengawetan pengeluaran hendaklah ditapis melalui membran ultrapenapisan dengan berat molekul 13,000 untuk memastikan penyingkiran bendasing polimer daripada sumber biologi, seperti RNase, DNase dan endotoksin, dan penulenan biasa tidak digalakkan. Air atau air suling.
2. Penggunaan tiub pensampelan virus
Pensampelan menggunakan tiub pensampelan virus terbahagi kepada pensampelan orofarinks dan pensampelan nasofaringks:
1. Pensampelan orofarinks: Mula-mula tekan lidah dengan penekan lidah, kemudian hulurkan kepala swab pensampelan ke dalam tekak untuk mengelap tonsil farinks bilateral dan dinding farinks posterior, dan lap dinding farinks posterior dengan daya ringan, elakkan menyentuh unit lidah.
2. Pensampelan nasofarinks: ukur jarak dari hujung hidung ke cuping telinga dengan swab dan tandakan dengan jari, masukkan swab pensampelan ke dalam rongga hidung mengikut arah hidung menegak (muka), swab hendaklah memanjang sekurang-kurangnya separuh panjang cuping telinga ke hujung hidung. Biarkan swab di dalam hidung selama 15-30 saat, putar perlahan-lahan 3-5 kali, dan tarik swab.
Tidak sukar untuk dilihat daripada kaedah penggunaannya, sama ada swab orofarinks atau swab nasofarinks, pensampelan adalah tugas teknikal yang sukar dan tercemar. Kualiti sampel yang dikumpul berkait rapat dengan pengesanan seterusnya. Jika sampel yang dikumpul mempunyai beban virus yang rendah, mudah menyebabkan negatif palsu, dan sukar untuk mengesahkan diagnosis.
Masa siaran: 21 Jun 2020
