1. Par vīrusu paraugu ņemšanas mēģenu ražošanu
Vīrusu paraugu ņemšanas mēģenes pieder medicīnas ierīču produktiem. Lielākā daļa vietējo ražotāju ir reģistrēti kā pirmās klases produkti, un tikai daži uzņēmumi ir reģistrēti kā otrās klases produkti. Nesen, lai apmierinātu Uhaņas un citu vietu ārkārtas vajadzības, daudzi uzņēmumi ir izmantojuši “ārkārtas kanālu” – “Pieteikties pirmās klases reģistrācijas atļaujai”. Vīrusu paraugu ņemšanas mēģene sastāv no paraugu ņemšanas tampona, vīrusa konservēšanas šķīduma un ārējā iepakojuma. Tā kā nav vienota valsts standarta vai nozares standarta, dažādu ražotāju produkti ir ļoti atšķirīgi.
1. Paraugu ņemšanas kociņš: paraugu ņemšanas kociņš tieši saskaras ar paraugu ņemšanas vietu, un paraugu ņemšanas galviņas materiāls ir cieši saistīts ar turpmāko noteikšanu. Paraugu kociņa galviņai jābūt izgatavotai no poliestera (PE) sintētiskās šķiedras vai viskozes (mākslīgās šķiedras). Nevar izmantot kalcija algināta sūkli vai koka irbulīšus (tostarp bambusa irbulīšus), un kociņa galviņas materiāls nedrīkst būt kokvilnas izstrādājumi. Tā kā kokvilnas šķiedrai piemīt spēcīga olbaltumvielu adsorbcija, to nav viegli eluēt turpmākajā uzglabāšanas šķīdumā; un, ja koka vai bambusa irbulītis, kas satur kalcija alginātu un koka detaļas, ir salauzts, mērcēšana uzglabāšanas šķīdumā arī adsorbēs olbaltumvielas un pat var kavēt turpmāko PCR reakciju. Kociņa galviņas materiālam ieteicams izmantot sintētiskās šķiedras, piemēram, PE šķiedru, poliestera šķiedru un polipropilēna šķiedru. Nav ieteicams izmantot dabīgās šķiedras, piemēram, kokvilnu. Arī neilona šķiedras nav ieteicamas, jo neilona šķiedras (līdzīgas zobu birstes galviņām) absorbē ūdeni. Sliktas kvalitātes rezultātā paraugu ņemšanas apjoms ir nepietiekams, kas ietekmē noteikšanas ātrumu. Kalcija algināta sūklis ir aizliegts paraugu ņemšanas kociņa materiālam! Ir divu veidu rokturi: salauzts un iebūvēts. Pēc parauga ņemšanas salauzto irbulīti ievieto uzglabāšanas mēģenē, un pēc tam, kad tas ir salauzts no vietas paraugu ņemšanas galviņas tuvumā, mēģenes vāciņš tiek salauzts; iebūvētais irbulītis pēc parauga ņemšanas tieši ievieto parauga ņemšanas irbulīti uzglabāšanas mēģenē, un uzglabāšanas mēģenes vāciņš ir iebūvēts. Izlīdziniet mazo caurumu ar roktura augšdaļu un pievelciet mēģenes vāciņu. Salīdzinot abas metodes, pēdējā ir relatīvi droša. Lietojot salauztu irbulīti kopā ar mazāka izmēra uzglabāšanas mēģeni, saplēšot to, mēģenē var rasties šķidruma šļakatas, un pilnībā jāpievērš uzmanība piesārņojuma riskam, ko rada produkta nepareiza lietošana. Irbulīša roktura materiālam ieteicams izmantot dobu polistirola (PS) ekstrudētu cauruli vai polipropilēna (PP) iesmidzināšanas krokojuma cauruli. Neatkarīgi no izmantotā materiāla nedrīkst pievienot kalcija algināta piedevas; koka irbulīšus vai bambusa irbulīšus. Īsāk sakot, paraugu ņemšanas irbulītim jānodrošina parauga daudzums un izdalīto vielu daudzums, un izvēlētajos materiālos nedrīkst būt vielas, kas ietekmē turpmāko testēšanu.
2. Vīrusu konservēšanas šķīdums: Tirgū plaši tiek izmantoti divu veidu vīrusu konservēšanas šķīdumi: viens ir vīrusa uzturēšanas šķīdums, kas modificēts, pamatojoties uz transporta barotni, un otrs ir modificēts šķīdums nukleīnskābju ekstrakcijas lizātam.
Pirmā galvenā sastāvdaļa ir Īgla bāzes barotne (MEM) vai Hanka līdzsvarotais sāls, kam pievienoti vīrusa izdzīvošanai nepieciešamie sāļi, aminoskābes, vitamīni, glikoze un olbaltumvielas. Šajā uzglabāšanas šķīdumā kā indikators un šķīdums tiek izmantots fenola sarkanais nātrija sāls. Kad pH vērtība ir 6,6–8,0, šķīdums ir rozā. Nepieciešamo glikozi, L-glutamīnu un olbaltumvielas pievieno konservēšanas šķīdumam. Olbaltumvielas tiek nodrošinātas liellopu fetāla seruma vai liellopu seruma albumīna veidā, kas var stabilizēt vīrusa olbaltumvielu apvalku. Tā kā konservēšanas šķīdums ir bagāts ar barības vielām, tas veicina vīrusa izdzīvošanu, bet arī labvēlīgi ietekmē baktēriju augšanu. Ja konservēšanas šķīdums ir piesārņots ar baktērijām, tās lielā daudzumā vairosies. Oglekļa dioksīds tā metabolītos izraisīs konservēšanas šķīduma pH pazemināšanos no rozā līdz dzeltenam. Tāpēc lielākā daļa ražotāju saviem preparātiem ir pievienojuši antibakteriālas sastāvdaļas. Ieteicamie antibakteriālie līdzekļi ir penicilīns, streptomicīns, gentamicīns un polimiksīns B. Nātrija azīds un 2-metils nav ieteicami. Inhibitori, piemēram, 4-metil-4-izotiazolīn-3-ons (MCI) un 5-hlor-2-metil-4-izotiazolīn-3-ons (CMCI), nav ieteicami, jo šīs sastāvdaļas ietekmē PCR reakciju. Tā kā šajā konservēšanas šķīdumā esošais paraugs būtībā ir dzīvs vīruss, parauga oriģinalitāte var tikt saglabāta maksimāli, un to var izmantot ne tikai vīrusu nukleīnskābju ekstrakcijai un noteikšanai, bet arī vīrusu kultivēšanai un izolēšanai. Tomēr jāatzīmē, ka, lietojot noteikšanai, nukleīnskābju ekstrakcija un attīrīšana jāveic pēc inaktivācijas.
Cits konservēšanas šķīduma veids, kas pagatavots, pamatojoties uz nukleīnskābju ekstrakcijas lizātu, galvenās sastāvdaļas ir sabalansēti sāļi, EDTA helātu veidotājs, guanidīna sāls (piemēram, guanidīna izotiocianāts, guanidīna hidrohlorīds utt.), anjonu virsmaktīvās vielas (piemēram, dodekāna nātrija sulfāts), katjonu virsmaktīvās vielas (piemēram, tetradeciltrimetilamonija oksalāts), fenols, 8-hidroksihinolīns, ditiotreitols (DTT), proteināze K un citas sastāvdaļas. Šis uzglabāšanas šķīdums ir paredzēts vīrusa tiešai šķelšanai, lai atbrīvotu nukleīnskābi un eliminētu RNāzi. Ja to izmanto tikai RT-PCR, tas ir piemērotāks, bet lizāts var inaktivēt vīrusu. Šāda veida paraugu nevar izmantot vīrusu kultūru atdalīšanai.
Vīrusu konservēšanas šķīdumā izmantotajam metāla jonu helātu veidojošajam aģentam ieteicams izmantot EDTA sāļus (piemēram, dikālija etilēndiamīntetraetiķskābi, dinātrija etilēndiamīntetraetiķskābi utt.), un nav ieteicams lietot heparīnu (piemēram, nātrija heparīnu, litija heparīnu), lai neietekmētu PCR noteikšanu.
3. Saglabāšanas mēģene: Saglabāšanas mēģenes materiāls jāizvēlas rūpīgi. Ir dati, kas liecina, ka polipropilēns (polipropilēns) ir saistīts ar nukleīnskābju adsorbciju, īpaši augstas sprieguma jonu koncentrācijas gadījumā, polietilēns (polietilēns) ir labāks par polipropilēnu (polipropilēnu). Viegli satverama DNS/RNS. Polietilēna-propilēna polimēra (polialomēra) plastmasa un daži speciāli apstrādāti polipropilēna (polipropilēna) plastmasas konteineri ir piemērotāki DNS/RNS uzglabāšanai. Turklāt, lietojot plīstošu vates tamponu, uzglabāšanas mēģenei jācenšas izvēlēties trauku, kura augstums ir lielāks par 8 cm, lai novērstu satura izšļakstīšanos un piesārņojumu, kad vates tampons tiek saplēsts.
4. Ūdens ražošanas konservēšanas šķīdumam: Ražošanas konservēšanas šķīdumam izmantotais īpaši attīrītais ūdens jāfiltrē caur ultrafiltrācijas membrānu ar molekulmasu 13 000, lai nodrošinātu polimēru piemaisījumu, piemēram, RNāzes, DNāzes un endotoksīna, atdalīšanu no bioloģiskiem avotiem, un parasta attīrīšana nav ieteicama. Ūdens vai destilēts ūdens.
2. Vīrusu paraugu ņemšanas mēģenu izmantošana
Paraugu ņemšana, izmantojot vīrusa paraugu ņemšanas mēģeni, galvenokārt tiek iedalīta orofaringālajā paraugu ņemšanā un nazofaringālajā paraugu ņemšanā:
1. Orofaringāla paraugu ņemšana: Vispirms piespiediet mēli ar mēles nomācošo instrumentu, pēc tam izstiepiet parauga ņemšanas tampona galviņu rīklē, lai noslaucītu abpusējās rīkles mandeles un rīkles aizmugurējo sienu, un ar vieglu spēku noslaukiet rīkles aizmugurējo sienu, izvairoties pieskarties mēles vienībai.
2. Nazofaringāla paraugu ņemšana: ar vates tamponu izmēriet attālumu no deguna gala līdz auss ļipiņai un atzīmējiet ar pirkstu, ievietojiet parauga ņemšanas tamponu deguna dobumā vertikālā deguna (sejas) virzienā, tamponam jāsniedzas vismaz pusi no auss ļipiņas garuma līdz deguna galam. Atstājiet tamponu degunā 15–30 sekundes, viegli pagrieziet 3–5 reizes un izņemiet tamponu.
Pēc lietošanas metodes nav grūti saprast, vai tā ir orofaringāla vai nazofaringāla uztriepe, paraugu ņemšana ir tehnisks uzdevums, kas ir sarežģīts un piesārņots. Savāktā parauga kvalitāte ir tieši saistīta ar turpmāko noteikšanu. Ja savāktajam paraugam ir zema vīrusu slodze, viegli izraisīt viltus negatīvus rezultātus, grūti apstiprināt diagnozi.
Publicēšanas laiks: 2020. gada 21. jūnijs
