1. Apie virusų mėginių ėmimo mėgintuvėlių gamybą
Virusų mėginių ėmimo mėgintuvėliai priklauso medicinos prietaisų gaminiams. Dauguma vietinių gamintojų yra registruoti pagal pirmos klasės gaminius, o nedaug įmonių – pagal antros klasės gaminius. Pastaruoju metu, siekdamos patenkinti Uhano ir kitų vietų skubius poreikius, daugelis įmonių pasirinko „skubios pagalbos kanalą“ – „Prašykite pirmos klasės registracijos leidimo“. Virusų mėginių ėmimo mėgintuvėlį sudaro mėginių ėmimo tamponas, virusų konservavimo tirpalas ir išorinė pakuotė. Kadangi nėra vieningo nacionalinio ar pramonės standarto, įvairių gamintojų produktai labai skiriasi.
1. Mėginio ėmimo tamponas: Mėginio ėmimo tamponas tiesiogiai liečiasi su mėginių ėmimo vieta, o mėginių ėmimo galvutės medžiaga yra glaudžiai susijusi su vėlesniu aptikimu. Mėginio ėmimo tampono galvutė turi būti pagaminta iš poliesterio (PE) sintetinio pluošto arba viskozės (dirbtinio pluošto). Negalima naudoti kalcio alginato kempinės arba medinių pagaliukų (įskaitant bambuko pagaliukus), o tampono galvutės medžiaga negali būti medvilnės gaminiai. Kadangi medvilnės pluoštas stipriai adsorbuoja baltymus, jį sunku išplauti į vėlesnį laikymo tirpalą; o sulūžus mediniam arba bambuko pagaliukui, kuriame yra kalcio alginato ir medinių komponentų, mirkymas laikymo tirpale taip pat adsorbuoja baltymus ir netgi gali slopinti vėlesnę PGR reakciją. Tampono galvutės medžiagai rekomenduojama naudoti sintetinius pluoštus, tokius kaip PE, poliesterio ir polipropileno pluoštai. Nerekomenduojami natūralūs pluoštai, tokie kaip medvilnė. Taip pat nerekomenduojami nailono pluoštai, nes nailono pluoštai (panašūs į dantų šepetėlių galvutes) sugeria vandenį. Dėl prastos kokybės mėginio tūris yra nepakankamas, o tai turi įtakos aptikimo greičiui. Kalcio alginato kempinė draudžiama naudoti mėginių ėmimo tampono medžiagai! Tampono rankena yra dviejų tipų: sulaužyta ir įmontuota. Sulaužytas tamponas po mėginio paėmimo įdedamas į laikymo mėgintuvėlį, o nulaužus mėgintuvėlio dangtelį, jis nulaužiamas; įmontuotas tamponas po mėginio paėmimo tiesiogiai įdeda mėginių laikymo mėgintuvėlį, o laikymo mėgintuvėlio dangtelis yra įmontuotas. Sulygiuokite mažą skylutę su rankenos viršumi ir užsukite mėgintuvėlio dangtelį. Lyginant du metodus, pastarasis yra gana saugus. Kai sulaužytas tamponas naudojamas kartu su mažesnio dydžio laikymo mėgintuvėliu, jį sulaužius, mėgintuvėlyje gali išsilieti skystis, todėl reikia atkreipti ypatingą dėmesį į užteršimo riziką, kurią sukelia netinkamas produkto naudojimas. Tampono rankenai rekomenduojama naudoti tuščiavidurį polistireno (PS) ekstruzinį vamzdelį arba polipropileno (PP) įpurškimo lankstymo vamzdelį. Nepriklausomai nuo naudojamos medžiagos, negalima dėti kalcio alginato priedų; medinių ar bambuko lazdelių. Trumpai tariant, mėginių ėmimo tamponas turi užtikrinti mėginių ėmimo ir išleidimo kiekį, o pasirinktose medžiagose neturi būti medžiagų, kurios turėtų įtakos vėlesniems tyrimams.
2. Virusų konservavimo tirpalas: rinkoje plačiai naudojami dviejų rūšių virusų konservavimo tirpalai: vienas yra virusų palaikymo tirpalas, modifikuotas pagal transportavimo terpę, o kitas yra modifikuotas tirpalas nukleorūgščių ekstrakcijos lizatui.
Pagrindinis pirmojo komponentas yra Eagle'o bazinė kultūros terpė (MEM) arba Hank'o subalansuota druska, į kurią įdedamos druskos, aminorūgštys, vitaminai, gliukozė ir baltymai, būtini viruso išgyvenimui. Šiame laikymo tirpale kaip indikatorius ir tirpalas naudojama fenolio raudonoji natrio druska. Kai pH vertė yra 6,6–8,0, tirpalas yra rausvos spalvos. Į konservavimo tirpalą pridedama reikiamos gliukozės, L-glutamino ir baltymų. Baltymai pateikiami vaisiaus galvijų serumo arba galvijų serumo albumino pavidalu, kurie gali stabilizuoti viruso baltymų apvalkalą. Kadangi konservavimo tirpale gausu maistinių medžiagų, jis yra palankus viruso išgyvenimui, bet taip pat naudingas bakterijų augimui. Jei konservavimo tirpalas užterštas bakterijomis, jos dauginasi dideliais kiekiais. Dėl anglies dioksido jo metabolituose konservavimo tirpalo pH sumažėja nuo rausvos iki geltonos. Todėl dauguma gamintojų į savo formules įdeda antibakterinių ingredientų. Rekomenduojami antibakteriniai vaistai yra penicilinas, streptomicinas, gentamicinas ir polimiksinas B. Nerekomenduojami natrio azidas ir 2-metilas. Inhibitoriai, tokie kaip 4-metil-4-izotiazolin-3-onas (MCI) ir 5-chloro-2-metil-4-izotiazolin-3-onas (CMCI), nes šie komponentai turi įtakos PGR reakcijai. Kadangi šiame konservavimo tirpale esantis mėginys iš esmės yra gyvas virusas, mėginio originalumas išsaugomas maksimaliai, ir jį galima naudoti ne tik virusų nukleorūgštims išgauti ir aptikti, bet ir virusams kultivuoti bei izoliuoti. Tačiau reikia atkreipti dėmesį, kad naudojant aptikimui, nukleorūgštys turi būti išgaunamos ir išgryninamos po inaktyvavimo.
Kitas konservavimo tirpalo tipas, paruoštas remiantis nukleorūgščių ekstrakcijos lizatu, kurio pagrindiniai komponentai yra subalansuotos druskos, EDTA chelatinis agentas, guanidino druska (pvz., guanidino izotiocianatas, guanidino hidrochloridas ir kt.), anijoninės paviršinio aktyvumo medžiagos (pvz., dodekanas, natrio sulfatas), katijoninės paviršinio aktyvumo medžiagos (pvz., tetradeciltrimetilamonio oksalatas), fenolis, 8-hidroksichinolinas, ditiotreitolis (DTT), proteinazė K ir kiti komponentai. Šis saugojimo tirpalas skirtas tiesiogiai skaidyti virusą, kad būtų išskirta nukleorūgštis ir pašalinta RNazė. Jei naudojamas tik RT-PGR, jis yra tinkamesnis, tačiau lizatas gali inaktyvuoti virusą. Šio tipo mėginys negali būti naudojamas virusų kultūrų atskyrimui.
Viruso konservavimo tirpale naudojamam metalo jonų chelatuojančiam agentui rekomenduojama naudoti EDTA druskas (pvz., dikalio etilendiamintetraacto rūgštį, dinatrio etilendiamintetraacto rūgštį ir kt.), ir nerekomenduojama naudoti heparino (pvz., natrio heparino, ličio heparino), kad nebūtų paveiktas PGR aptikimas.
3. Konservavimo mėgintuvėlis: Konservavimo mėgintuvėlio medžiagą reikia pasirinkti atidžiai. Yra duomenų, rodančių, kad polipropilenas (polipropilenas) yra susijęs su nukleorūgščių adsorbcija, ypač esant didelei įtampos jonų koncentracijai, polietilenas (polietilenas) yra labiau pageidautinas nei polipropilenas (polipropilenas). Lengva suimti DNR/RNR. Polietileno-propileno polimero (polialomero) plastikas ir kai kurie specialiai apdoroti polipropileno (polipropileno) plastikiniai indai yra tinkamesni DNR/RNR laikymui. Be to, naudojant lūžtantį tamponą, laikymo mėgintuvėliui reikėtų rinktis didesnį nei 8 cm aukštį, kad tamponui sudužus, turinys nebūtų aptaškytas ir neužterštas.
4. Vanduo gamybos konservavimo tirpalui: Itin grynas vanduo, naudojamas gamybos konservavimo tirpalui, turėtų būti filtruojamas per ultrafiltracijos membraną, kurios molekulinė masė yra 13 000, siekiant pašalinti polimerų priemaišas iš biologinių šaltinių, pvz., RNazę, DNazę ir endotoksiną, ir įprastas valymas nerekomenduojamas. Vanduo arba distiliuotas vanduo.
2. Virusų mėginių ėmimo mėgintuvėlių naudojimas
Mėginių ėmimas naudojant viruso mėginių ėmimo vamzdelį daugiausia skirstomas į burnos ir ryklės mėginių ėmimą ir nosiaryklės mėginių ėmimą:
1. Mėginių ėmimas iš burnos ir ryklės: pirmiausia paspauskite liežuvį liežuvio slopintuvu, tada ištieskite mėginių ėmimo tampono galvutę į gerklę, kad nuvalytumėte abipuses ryklės tonziles ir užpakalinę ryklės sienelę, ir lengvai nuvalykite užpakalinę ryklės sienelę, vengdami liežuvio.
2. Nosiaryklės mėginių ėmimas: tamponėliu išmatuokite atstumą nuo nosies galiuko iki ausies spenelio ir pažymėkite pirštu, įkiškite mėginio ėmimo tamponėlį į nosies ertmę vertikalios nosies (veido) kryptimi, tamponėlis turėtų siekti bent pusę ausies spenelio ilgio iki nosies galiuko. Palikite tamponėlį nosyje 15–30 sekundžių, švelniai pasukiokite 3–5 kartus ir ištraukite tamponėlį.
Iš naudojimo būdo nesunku suprasti, ar tai burnos, ryklės, ar nosiaryklės tepinėlis, kad mėginių ėmimas yra techninė užduotis, sudėtinga ir užteršta. Surinkto mėginio kokybė tiesiogiai susijusi su vėlesniu nustatymu. Jei surinktame mėginyje virusinė apkrova maža, lengva gauti klaidingai neigiamus rezultatus, sunku patvirtinti diagnozę.
Įrašo laikas: 2020 m. birželio 21 d.
