1. De fabricatione tuborum ad virus colligendos
Tubi ad virus colligendos ad instrumenta medica pertinent. Plerique fabri domestici secundum producta primae classis inscribuntur, paucae autem societates secundum producta secundae classis. Nuper, ut necessitatibus urgentibus Wuhan aliorumque locorum occurrerent, multae societates "via urgenti" ingressi sunt, "licentiam primae classis inscribendi pete". Tubus ad virus colligendos constat ex peniculo, solutione ad virus conservandum, et involucro externo. Cum nulla norma nationalis vel norma industrialis una exstet, producta variorum fabrorum valde variant.
1. Peniculus excerptionis: Peniculus excerptionis directe locum excerptionis tangit, et materia capitis excerptionis arcte coniuncta est cum detectione subsequenti. Caput peniculi ex fibra synthetica Polyester (PE) vel Rayon (fibra artificialis) fieri debet. Spongia alginata calcii vel peniculi lignei (inclusa bambusa) non adhiberi possunt, nec materia capitis peniculi ex bombacio esse potest. Quia fibra bombacia fortem adsorptionem proteinorum habet, non facile est in subsequentem solutionem conservationis eluere; et cum baculus ligneus vel bambusa alginatum calcii et componentes ligneos continens fractus est, maceratio in solutione conservationis etiam proteinum adsorbet, et etiam subsequentem reactionem PCR inhibere potest. Commendatur ut fibrae syntheticae, ut fibrae PE, fibrae polyester et fibrae polypropylene, pro materia capitis peniculi adhibeantur. Fibrae naturales, ut bombacium, non commendantur. Fibrae nylon etiam non commendantur, quia fibrae nylon (similes capitibus penicillorum dentium) aquam absorbent. Malae sunt, quae volumen excerptionis insufficiens efficiunt, et ratem detectionis afficiunt. Spongia alginata calcii ad materiam peniculi excerptionis prohibetur! Manubrium peniculi duo genera sunt: fractum et inclusum. Post exempli gratia, peniculus fractus in tubum repositionis ponitur, operculum autem tubi, postquam prope caput exempli ruptum est, frangitur; peniculus inclusus peniculum directe in tubum repositionis post exempli gratia inserit, operculumque tubi repositionis includitur. Foramen parvum cum summitate manubrii compone et operculum tubi stringe. Comparatis his duabus methodis, posterior satis tuta est. Cum peniculus fractus una cum tubo repositionis minoris magnitudinis adhibetur, liquor in tubo, cum fractus est, effluere potest, et plena attentio periculo contaminationis, quae ex usu improprio producti oritur, adhibenda est. Commendatur ut tubus cavus polystyreni (PS) extrusus vel tubus polypropyleni (PP) iniectus plicans pro materia manubrii peniculi adhibeatur. Quacumque materia adhibita, additiva calcii alginatis addi non possunt; baculi lignei vel baculi bambusi. Breviter, peniculus exempli gratia quantitatem exempli et quantitatem emissionis curare debet, et materiae selectae substantias, quae probationes posteriores afficiunt, non habere debent.
2. Solutio ad virus conservandum: Duo genera solutionum ad virus conservandum late in foro adhibentur, una est solutio ad virus conservandum modificata secundum medium translationis, altera est solutio modificata ad lysatum extractionis acidi nucleici.
Prima pars principalis prioris est medium culturae basicum Eagle (MEM) vel sal aequilibratum Hank, cui additur salibus, aminoacidis, vitaminis, glucoso et proteino necessariis ad superviventiam virus. Haec solutio conservandi utitur sale natrii rubro phenolico ut indicatore et solutione. Cum valor pH 6.6-8.0 est, solutio rosea est. Glucosum, L-glutaminum et proteinum necessarii solutioni conservandi adduntur. Proteinum in forma seri bovini fetalis vel albuminis seri bovini praebetur, quae membranam proteinicam virus stabilire potest. Quia solutio conservandi nutrimentis dives est, superviventiae virus conducit, sed etiam incremento bacteriorum prodest. Si solutio conservandi bacteriis contaminata est, magna copia multiplicabitur. Dioxidum carbonis in metabolitis eius pH solutionis conservandi a roseo ad flavum descendere faciet. Quapropter plerique fabri ingredientia antibacterialia suis formulis addiderunt. Inter medicamenta antibacterialia commendata sunt penicillinum, streptomycinum, gentamicinum et polymyxinum B. Natrii azidum et 2-methyl non commendantur. Inhibitores ut 4-methyl-4-isothiazolin-3-onum (MCI) et 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-onum (CMCI) non sunt, quia hae partes effectum in reactionem PCR habent. Cum exemplum ab hac solutione conservativa praebitum essentialiter virus vivum sit, originalitas exempli quam maxime servari potest, et non solum ad extractionem et detectionem acidorum nucleicorum viralium, sed etiam ad culturam et isolationem virorum adhiberi potest. Tamen, notandum est, cum ad detectionem adhibentur, extractionem et purificationem acidorum nucleicorum post inactivationem fieri debere.
Aliud genus solutionis conservativae, ex lysato extractionis acidi nucleici praeparatum, cuius partes principales sunt sales aequilibrati, agens chelans EDTA, sal guanidini (ut guanidini isothiocyanas, guanidini hydrochloridum, etc.), surfactans anionicus (ut dodecanum natrii sulfatum), surfactantes cationici (ut tetradecyltrimethylammonii oxalas), phenolum, 8-hydroxyquinolinum, dithiothreitolum (DTT), proteinasum K, et aliae partes. Haec solutio conservativa virus directe findit ut acidum nucleicum liberet et RNasem eliminet. Si solum ad RT-PCR adhibeatur, aptior est, sed lysatus virus inactivare potest. Hoc genus exempli ad separationem culturae viralis adhiberi non potest.
In solutione conservationis virus adhibita, chelatio ionum metallicorum cum salibus EDTA (velut acidum ethylenediaminetetraaceticum dipotassicum, acidum ethylenediaminetetraaceticum disodicum, etc.) commendatur, et heparinum (velut heparinum natricum, heparinum lithium) non commendatur, ne detectionem PCR afficiat.
3. Tubus conservationis: Materia tubi conservationis diligenter eligenda est. Sunt data quae suggerunt polypropylenum (polypropylenum) adsorptionem acidi nucleici coniunctum esse, praesertim sub alta concentratione ionum tensionis; polyethylene (polyethylene) magis praefertur quam polypropylenum (polypropylenum). DNA/RNA facile prehenditur. Materia polyethylene-propylene polymer (polyallomerum) et quaedam vasa plastica polypropylene (polypropylenum) specialiter tractata aptiora sunt ad DNA/RNA conservandum. Praeterea, cum penicillo fragili uteris, tubum conservationis vase altiore quam 8 cm eligendum est, ne contenta aspergantur et contaminentur cum penicillo fracto.
4. Aqua ad solutionem conservationis productionis: Aqua purissima ad solutionem conservationis productionis adhibita per membranam ultrafiltrationis cum pondere moleculari 13,000 filtranda est ad remotionem impuritatum polymericarum ex fontibus biologicis, ut RNase, DNase, et endotoxinum, curandam, et purificatio ordinaria non commendatur. Aqua vel aqua destillata.
2. Usus tuborum ad virus colligendos
Examen per tubum ad virus colligendum praecipue in oropharyngea et nasopharyngea dividitur:
1. Examen oropharyngeum: Primum linguam depressore linguae preme, deinde caput penicilli examinandi in guttur extende ut tonsillae pharyngeae bilaterales et parietem pharyngeum posteriorem detergeas, et parietem pharyngeum posteriorem levi vi deterge, vitando tangere unitatem linguae.
2. Exemplar nasopharyngeum: distantiam ab apicem nasi ad lobulum auris penicillo metire et digito notare, penicillum exemplarium in cavitatem nasi in directionem nasi verticalis (faciei) inserere; penicillum saltem dimidiam longitudinem lobi auris ad apicem nasi extendere debet. Penicillum in naso per 15-30 secunda relinquere, leniter 3-5 vicibus rotare, et penicillum extrahere.
Ex methodo usus, sive penicillum oropharyngeum sive nasopharyngeum sit, non difficile est videre; extractio enim speciminis est negotium technicum, difficile et contaminatum. Qualitas speciminis collecti directe ad detectionem subsequentem pertinet. Si onus virale in specimine collecto humile est, facile falsos negativos efficit, difficile est diagnosim confirmare.
Tempus publicationis: XXI Iunii MMXX
