1. 바이러스 채취관 제조에 관하여
바이러스 검체 채취 튜브는 의료기기 제품에 속합니다. 대부분의 국내 제조업체는 1급 제품으로 등록되어 있으며, 2급 제품으로 등록된 회사는 거의 없습니다. 최근 우한을 비롯한 여러 지역의 긴급 수요를 충족하기 위해 많은 회사가 "긴급 경로"를 통해 1급 기록 허가를 신청하고 있습니다. 바이러스 검체 채취 튜브는 검체 채취 면봉, 바이러스 보존액, 외부 포장으로 구성됩니다. 통일된 국가 표준이나 산업 표준이 없기 때문에 제조업체마다 제품 구성이 매우 다양합니다.
1. 샘플링 스왑: 샘플링 스왑은 샘플링 부위에 직접 접촉하며, 샘플링 헤드의 재질은 후속 검출과 밀접한 관련이 있습니다. 샘플링 스왑 헤드는 폴리에스테르(PE) 합성 섬유 또는 레이온(인조 섬유)으로 제작해야 합니다. 칼슘 알긴산염 스펀지나 나무 막대 스왑(대나무 막대 포함)은 사용할 수 없으며, 스왑 헤드 재질은 면 제품일 수 없습니다. 면 섬유는 단백질 흡착력이 강하기 때문에 후속 보관 용액으로 용출되기 어렵습니다. 칼슘 알긴산염과 나무 성분이 함유된 나무 막대나 대나무 막대가 파손된 경우, 보관 용액에 담가두면 단백질이 흡착되어 후속 PCR 반응을 저해할 수 있습니다. 스왑 헤드 재질로는 PE 섬유, 폴리에스테르 섬유, 폴리프로필렌 섬유와 같은 합성 섬유를 사용하는 것이 좋습니다. 면과 같은 천연 섬유는 권장하지 않습니다. 나일론 섬유(칫솔 헤드와 유사)는 물을 흡수하기 때문에 권장하지 않습니다. 흡수율이 좋지 않아 샘플링 양이 부족해져 검출률에 영향을 미칩니다. 칼슘 알지네이트 스펀지는 면봉 재질의 샘플링에 사용할 수 없습니다! 면봉 손잡이는 부러진 면봉과 내장형 두 가지 유형이 있습니다. 부러진 면봉은 샘플링 후 보관 튜브에 넣고, 튜브 뚜껑은 샘플링 헤드 근처에서 부러진 후 파손됩니다. 내장형 면봉은 샘플링 후 샘플링 면봉을 보관 튜브에 직접 넣고, 보관 튜브 뚜껑은 내장형입니다. 작은 구멍을 손잡이 위쪽에 맞추고 튜브 뚜껑을 조입니다. 두 가지 방법을 비교했을 때, 후자가 비교적 안전합니다. 부러진 면봉을 작은 크기의 보관 튜브와 함께 사용할 경우, 파손 시 튜브 내부로 액체가 튈 수 있으므로 제품의 부적절한 사용으로 인한 오염 위험에 각별히 주의해야 합니다. 면봉 손잡이 재질로는 중공 폴리스티렌(PS) 압출 튜브 또는 폴리프로필렌(PP) 주입 주름 튜브를 사용하는 것이 좋습니다. 어떤 재질을 사용하든 칼슘 알지네이트 첨가제(나무 막대 또는 대나무 막대)는 첨가할 수 없습니다. 간단히 말해, 샘플링 스왑은 샘플링 양과 방출 양을 보장해야 하며, 선택된 재료에는 후속 검사에 영향을 미치는 물질이 포함되어서는 안 됩니다.
2. 바이러스 보존 용액: 시중에서 널리 사용되는 바이러스 보존 용액은 두 가지 종류가 있습니다. 하나는 수송 매체에 따라 개량된 바이러스 유지 용액이고, 다른 하나는 핵산 추출 용해물에 맞게 개량된 용액입니다.
전자의 주요 구성 요소는 바이러스 생존에 필요한 염, 아미노산, 비타민, 포도당 및 단백질이 첨가된 Eagle's basic culture medium(MEM) 또는 Hank's balanced salt입니다. 이 저장 용액은 페놀 레드 나트륨 염을 지시약 및 용액으로 사용합니다. pH 값이 6.6-8.0일 때 용액은 분홍색입니다. 필요한 포도당, L-글루타민 및 단백질이 보존 용액에 첨가됩니다. 단백질은 바이러스의 단백질 껍질을 안정화할 수 있는 태아 소 혈청 또는 소 혈청 알부민 형태로 제공됩니다. 보존 용액은 영양소가 풍부하기 때문에 바이러스의 생존에 도움이 될 뿐만 아니라 박테리아의 성장에도 유익합니다. 보존 용액이 박테리아로 오염되면 대량으로 증식합니다. 대사 산물에 있는 이산화탄소는 보존 용액의 pH를 분홍색에서 노란색으로 떨어뜨립니다. 따라서 대부분의 제조업체는 제형에 항균 성분을 첨가했습니다. 권장되는 항균제는 페니실린, 스트렙토마이신, 겐타마이신, 폴리믹신 B입니다. 아지드화나트륨과 2-메틸은 권장하지 않습니다. 4-메틸-4-이소티아졸린-3-온(MCI)과 5-클로로-2-메틸-4-이소티아졸린-3-온(CMCI)과 같은 저해제는 PCR 반응에 영향을 미치므로 사용하지 마십시오. 본 보존 용액으로 제공되는 검체는 기본적으로 생 바이러스이므로 검체의 독창성을 최대한 유지할 수 있으며, 바이러스 핵산 추출 및 검출뿐만 아니라 바이러스 배양 및 분리에도 사용할 수 있습니다. 단, 검출용으로 사용할 경우 핵산 추출 및 정제는 반드시 불활성화 후 수행해야 합니다.
핵산 추출 용해물을 기반으로 제조된 또 다른 종류의 보존 용액으로, 주요 성분은 평형염, EDTA 킬레이트제, 구아니딘염(예: 구아니딘 이소티오시아네이트, 구아니딘 염산염 등), 음이온성 계면활성제(예: 도데칸나트륨 황산염), 양이온성 계면활성제(예: 테트라데실트리메틸암모늄 옥살레이트), 페놀, 8-하이드록시퀴놀린, 디티오트레이톨(DTT), 프로테이나제 K 및 기타 성분입니다. 이 보관 용액은 바이러스를 직접 절단하여 핵산을 방출하고 RNase를 제거합니다. RT-PCR에만 사용하는 것이 더 적합하지만, 용해물이 바이러스를 불활성화시킬 수 있습니다. 이러한 종류의 샘플은 바이러스 배양 분리에는 사용할 수 없습니다.
바이러스 보존액에 사용되는 금속이온 킬레이트제로는 EDTA염(에틸렌디아민테트라아세트산이칼륨, 에틸렌디아민테트라아세트산이나트륨 등)을 사용하는 것이 권장되며, 헤파린(헤파린나트륨, 헤파린리튬 등)은 PCR 검출에 영향을 미치지 않도록 사용하지 않는 것이 좋습니다.
3. 보존 튜브: 보존 튜브의 재질은 신중하게 선택해야 합니다. 폴리프로필렌(Polypropylene)은 핵산 흡착, 특히 고전압 이온 농도에서 더 우수하다는 연구 결과가 있습니다. 폴리에틸렌(Polyethylene)은 폴리프로필렌(Polypropylene)보다 DNA/RNA를 쉽게 흡착할 수 있습니다. 폴리에틸렌-프로필렌 폴리머(Polyallomer) 플라스틱과 특수 가공된 폴리프로필렌(Polypropylene) 플라스틱 용기는 DNA/RNA 보관에 더 적합합니다. 또한, 깨지기 쉬운 면봉을 사용할 경우, 면봉이 깨졌을 때 내용물이 튀거나 오염되는 것을 방지하기 위해 보관 튜브의 높이가 8cm 이상인 용기를 선택해야 합니다.
4. 생산 보존액용 정제수: 생산 보존액에 사용되는 초순수는 RNase, DNase, 엔도톡신과 같은 생물학적 유래의 고분자 불순물을 제거하기 위해 분자량 13,000의 초순수 여과막을 통해 여과해야 하며, 일반적인 정제는 권장하지 않습니다. 정제수 또는 증류수를 사용하십시오.
2. 바이러스 샘플링 튜브 사용
바이러스 샘플링 튜브를 이용한 샘플링은 크게 구인두 샘플링과 비인두 샘플링으로 구분된다.
1. 인두 채취: 먼저 혀압자로 혀를 누른 다음 채취 면봉의 머리를 목구멍으로 뻗어 양쪽 인두 편도선과 후방 인두벽을 닦고 후방 인두벽을 가벼운 힘으로 닦으며 혀 부분에 닿지 않도록 합니다.
2. 비인두 채취: 면봉으로 코끝에서 귓볼까지의 거리를 측정하고 손가락으로 표시한 후, 채취 면봉을 수직 코(얼굴) 방향으로 비강에 삽입합니다. 면봉은 귓볼 길이의 절반 이상이 코끝까지 닿도록 합니다. 면봉을 코에 15~30초간 넣어둔 후 3~5회 가볍게 회전시킨 후 면봉을 빼냅니다.
구인두 면봉이든 비인두 면봉이든 사용 방법만 봐도 쉽게 알 수 있듯이, 검체 채취는 어렵고 오염된 기술적인 작업입니다. 채취한 검체의 품질은 후속 검출에 직접적인 영향을 미칩니다. 채취한 검체의 바이러스 농도가 낮으면 위음성이 발생하기 쉽고 진단을 확정하기 어렵습니다.
게시 시간: 2020년 6월 21일
