1. 바이러스 채취 튜브 제조에 관하여
바이러스 검체 채취 튜브는 의료기기 제품에 속합니다. 국내 대부분의 제조업체는 1급 제품으로 등록되어 있으며, 2급 제품으로 등록된 업체는 소수에 불과합니다. 최근 우한 등지의 긴급 상황에 대응하기 위해 많은 업체들이 "긴급 절차"를 통해 1급 제품 등록 허가를 신청했습니다. 바이러스 검체 채취 튜브는 검체 채취용 면봉, 바이러스 보존액, 그리고 외부 포장재로 구성됩니다. 통일된 국가 표준이나 산업 표준이 없기 때문에 제조업체별 제품 품질이 매우 다양합니다.
1. 검체 채취용 면봉: 검체 채취용 면봉은 검체 채취 부위에 직접 접촉하며, 면봉 끝 부분의 재질은 후속 검출에 매우 중요한 영향을 미칩니다. 면봉 끝 부분은 폴리에스터(PE) 합성 섬유 또는 레이온(인조 섬유)으로 제작되어야 합니다. 칼슘 알지네이트 스펀지나 나무 막대(대나무 막대 포함) 면봉은 사용할 수 없으며, 면 제품은 면봉 끝 부분의 재질로 사용해서는 안 됩니다. 면 섬유는 단백질 흡착력이 강하여 후속 보관 용액에 용출되기 어렵고, 칼슘 알지네이트와 목재 성분을 함유한 나무 막대나 대나무 막대가 파손될 경우 보관 용액에 담갔을 때 단백질을 흡착하여 후속 PCR 반응을 저해할 수 있기 때문입니다. 따라서 면봉 끝 부분의 재질로는 PE 섬유, 폴리에스터 섬유, 폴리프로필렌 섬유와 같은 합성 섬유를 사용하는 것이 좋습니다. 면과 같은 천연 섬유는 권장하지 않습니다. 나일론 섬유(칫솔모와 유사) 또한 수분 흡수력이 낮아 검체 채취량이 부족해져 검출률에 영향을 미칠 수 있으므로 권장하지 않습니다. 칼슘 알지네이트 스폰지는 검체 채취용 면봉 재질로 사용이 금지되어 있습니다! 면봉 손잡이는 분리형과 일체형 두 가지 종류가 있습니다. 분리형 면봉은 검체 채취 후 보관 튜브에 넣고, 채취 부위 근처에서 튜브 뚜껑을 부러뜨린 후 사용합니다. 일체형 면봉은 검체 채취 후 면봉을 보관 튜브에 직접 넣고, 보관 튜브 뚜껑의 작은 구멍을 손잡이 윗부분과 맞춰 뚜껑을 조입니다. 두 방법을 비교하면 일체형이 상대적으로 안전합니다. 분리형 면봉을 작은 크기의 보관 튜브와 함께 사용할 경우, 부러질 때 튜브 내부로 액체가 튀어 오염될 수 있으므로 제품 오용으로 인한 오염 위험에 각별히 주의해야 합니다. 면봉 손잡이 재질로는 속이 빈 폴리스티렌(PS) 압출 튜브 또는 폴리프로필렌(PP) 사출 성형 튜브 사용을 권장합니다. 어떤 재질을 사용하든 칼슘 알지네이트 첨가제는 절대 사용해서는 안 됩니다. 나무 막대나 대나무 막대도 사용하지 마십시오. 요컨대, 채취용 면봉은 채취량과 방출량을 정확하게 조절해야 하며, 선택된 재료에는 후속 검사에 영향을 미치는 물질이 포함되어서는 안 됩니다.
2. 바이러스 보존 용액: 시중에 널리 사용되는 바이러스 보존 용액에는 두 가지 종류가 있는데, 하나는 운송 배지를 기반으로 변형된 바이러스 유지 용액이고, 다른 하나는 핵산 추출 용해액용으로 변형된 용액입니다.
전자의 주성분은 Eagle's basic culture medium(MEM) 또는 Hank's balanced salt이며, 여기에 바이러스 생존에 필요한 염류, 아미노산, 비타민, 포도당, 단백질이 첨가됩니다. 이 보존액은 페놀 레드 나트륨염을 지시약으로 사용하며, pH가 6.6~8.0일 때 용액은 분홍색을 띕니다. 필요한 포도당, L-글루타민, 단백질이 보존액에 첨가되는데, 단백질은 태아 소 혈청이나 소 혈청 알부민 형태로 제공되어 바이러스의 단백질 껍질을 안정화시킵니다. 보존액은 영양분이 풍부하여 바이러스 생존에 유리하지만, 세균 증식에도 도움이 됩니다. 보존액이 세균에 오염되면 세균이 대량으로 증식하고, 세균 대사산물인 이산화탄소로 인해 보존액의 pH가 분홍색에서 노란색으로 변합니다. 따라서 대부분의 제조업체는 제품에 항균 성분을 첨가합니다. 권장되는 항균제는 페니실린, 스트렙토마이신, 겐타마이신, 폴리믹신 B입니다. 아지드화나트륨과 2-메틸은 권장되지 않습니다. 4-메틸-4-이소티아졸린-3-온(MCI) 및 5-클로로-2-메틸-4-이소티아졸린-3-온(CMCI)과 같은 저해제는 PCR 반응에 영향을 미치므로 사용하지 않는 것이 좋습니다. 이 보존 용액으로 제공되는 시료는 기본적으로 생바이러스이므로 시료의 원형을 최대한 보존할 수 있으며, 바이러스 핵산 추출 및 검출뿐만 아니라 바이러스 배양 및 분리에도 사용할 수 있습니다. 다만, 검출에 사용할 경우 핵산 추출 및 정제는 반드시 불활성화 후에 수행해야 합니다.
핵산 추출 용해액을 기반으로 제조된 또 다른 종류의 보존 용액은 주성분으로 평형염, EDTA 킬레이트제, 구아니딘염(구아니딘 이소티오시아네이트, 구아니딘 염산염 등), 음이온성 계면활성제(도데칸 황산나트륨 등), 양이온성 계면활성제(테트라데실트리메틸암모늄 옥살레이트 등), 페놀, 8-하이드록시퀴놀린, 디티오트레이톨(DTT), 프로테아제 K 등을 포함합니다. 이 보존 용액은 바이러스를 직접 절단하여 핵산을 방출하고 RNase를 제거하는 역할을 합니다. RT-PCR에만 사용하는 경우에는 더 적합하지만, 용해액이 바이러스를 불활성화시킬 수 있습니다. 따라서 이러한 종류의 시료는 바이러스 배양 분리에는 사용할 수 없습니다.
바이러스 보존 용액에 사용되는 금속 이온 킬레이트제는 EDTA 염(예: 디칼륨 에틸렌디아민테트라아세트산, 디나트륨 에틸렌디아민테트라아세트산 등)을 사용하는 것이 좋으며, PCR 검출에 영향을 미치지 않도록 헤파린(예: 나트륨 헤파린, 리튬 헤파린)은 사용하지 않는 것이 좋습니다.
3. 보존용기: 보존용기의 재질은 신중하게 선택해야 합니다. 폴리프로필렌(Polypropylene)은 핵산, 특히 고농도 이온 환경에서 핵산을 흡착하는 경향이 있다는 연구 결과가 있습니다. 따라서 DNA/RNA를 잘 흡착하는 폴리에틸렌(Polyethylene)이 폴리프로필렌보다 더 적합합니다. 폴리에틸렌-프로필렌 중합체(Polyallomer) 플라스틱이나 특수 가공된 폴리프로필렌 플라스틱 용기가 DNA/RNA 보관에 더욱 적합합니다. 또한, 파손되기 쉬운 면봉을 사용하는 경우, 면봉이 파손될 때 내용물이 튀어 오염되는 것을 방지하기 위해 높이가 8cm 이상인 보존용기를 선택하는 것이 좋습니다.
4. 생산 보존 용액용수: 생산 보존 용액에 사용되는 초순수는 RNase, DNase, 내독소 등의 생물학적 유래 고분자 불순물을 제거하기 위해 분자량 13,000의 초여과막을 통과시켜 여과해야 하며, 일반 정수 또는 증류수는 권장하지 않습니다.
2. 바이러스 샘플링 튜브 사용
바이러스 채취 튜브를 이용한 채취는 크게 구강인두 채취와 비인두 채취로 나뉩니다.
1. 구강인두 검체 채취: 먼저 설압자로 혀를 누른 후, 검체 채취용 면봉의 끝부분을 목구멍 안으로 넣어 양측 인두편도와 후인두벽을 닦아냅니다. 후인두벽은 혀에 닿지 않도록 가벼운 힘으로 닦아냅니다.
2. 비인두 검체 채취: 면봉으로 코끝에서 귓불까지의 거리를 측정하고 손가락으로 표시한 후, 면봉을 코의 수직 방향(얼굴 방향)으로 비강에 삽입합니다. 면봉은 귓불 길이의 최소 절반 이상부터 코끝까지 들어가야 합니다. 면봉을 코 안에 15~30초간 둔 후, 3~5회 부드럽게 돌려가며 검체를 채취하고 빼냅니다.
구강인두 면봉이든 비인두 면봉이든 검체 채취는 어렵고 오염될 가능성이 높은 기술적 작업이라는 점은 사용 방법만 보더라도 쉽게 알 수 있습니다. 채취된 검체의 질은 후속 검사 결과에 직접적인 영향을 미칩니다. 검체 내 바이러스 양이 적으면 위음성이 발생하기 쉽고 진단 확정이 어려워집니다.
게시 시간: 2020년 6월 21일
