១. អំពីការផលិតបំពង់យកសំណាកមេរោគ
បំពង់យកសំណាកមេរោគជារបស់ផលិតផលឧបករណ៍វេជ្ជសាស្ត្រ។ ក្រុមហ៊ុនផលិតក្នុងស្រុកភាគច្រើនត្រូវបានចុះបញ្ជីតាមផលិតផលលំដាប់ថ្នាក់ទីមួយ ហើយមានក្រុមហ៊ុនតិចតួចប៉ុណ្ណោះដែលត្រូវបានចុះបញ្ជីតាមផលិតផលលំដាប់ទីពីរ។ ថ្មីៗនេះ ដើម្បីបំពេញតម្រូវការបន្ទាន់របស់ទីក្រុងវូហាន និងកន្លែងផ្សេងៗទៀត ក្រុមហ៊ុនជាច្រើនបានប្រើប្រាស់ «បណ្តាញសង្គ្រោះបន្ទាន់» «ដាក់ពាក្យសុំការអនុញ្ញាតកត់ត្រាថ្នាក់ទីមួយ»។ បំពង់យកសំណាកមេរោគត្រូវបានផ្សំឡើងដោយសំណាកសម្រាប់យកសំណាក ដំណោះស្រាយរក្សាទុកមេរោគ និងការវេចខ្ចប់ខាងក្រៅ។ ដោយសារតែមិនមានស្តង់ដារជាតិ ឬស្តង់ដារឧស្សាហកម្មរួម ផលិតផលរបស់ក្រុមហ៊ុនផលិតផ្សេងៗគ្នាមានភាពខុសគ្នាយ៉ាងខ្លាំង។
១. សំណាកសម្រាប់យកសំណាក៖ សំណាកនេះប៉ះដោយផ្ទាល់ទៅនឹងកន្លែងយកសំណាក ហើយសម្ភារៈនៃក្បាលសំណាកមានទំនាក់ទំនងយ៉ាងជិតស្និទ្ធជាមួយនឹងការរកឃើញបន្ទាប់។ ក្បាលសំណាកគួរតែធ្វើពីសរសៃសំយោគ Polyester (PE) ឬ Rayon (សរសៃសិប្បនិម្មិត)។ អេប៉ុងកាល់ស្យូម alginate ឬដំបងឈើ (រួមទាំងដំបងឫស្សី) មិនអាចប្រើបានទេ ហើយសម្ភារៈនៃក្បាលសំណាកក៏មិនអាចជាផលិតផលកប្បាសបានដែរ។ ដោយសារសរសៃកប្បាសមានការស្រូបយកប្រូតេអ៊ីនខ្លាំង វាមិនងាយនឹងរលាយចូលទៅក្នុងដំណោះស្រាយផ្ទុកបន្ទាប់ទេ។ ហើយនៅពេលដែលដំបងឈើ ឬដំបងឫស្សីដែលមានកាល់ស្យូម alginate និងសមាសធាតុឈើត្រូវបានបំបែក ការត្រាំក្នុងដំណោះស្រាយផ្ទុកក៏នឹងស្រូបយកប្រូតេអ៊ីនដែរ ហើយថែមទាំងអាចរារាំងប្រតិកម្ម PCR បន្ទាប់ទៀតទៀតផង។ វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើសរសៃសំយោគដូចជាសរសៃ PE សរសៃ polyester និងសរសៃ polypropylene សម្រាប់សម្ភារៈនៃក្បាលសំណាក។ សរសៃធម្មជាតិដូចជាកប្បាសមិនត្រូវបានណែនាំទេ។ សរសៃ nylon ក៏មិនត្រូវបានណែនាំដែរ ព្រោះសរសៃ nylon (ស្រដៀងនឹងក្បាលច្រាសដុសធ្មេញ) ស្រូបយកទឹក។ មិនល្អ ដែលបណ្តាលឱ្យមានបរិមាណសំណាកមិនគ្រប់គ្រាន់ ដែលប៉ះពាល់ដល់អត្រារកឃើញ។ អេប៉ុងកាល់ស្យូម alginate ត្រូវបានហាមឃាត់សម្រាប់សម្ភារៈសំណាក! ចំណុចទាញសំណាកមានពីរប្រភេទ៖ ខូច និងភ្ជាប់ជាមួយ។ សំណាកដែលបាក់ត្រូវបានដាក់ក្នុងបំពង់ផ្ទុកបន្ទាប់ពីយកសំណាក ហើយគម្របបំពង់ត្រូវបានបំបែកបន្ទាប់ពីត្រូវបានបំបែកពីទីតាំងជិតក្បាលយកសំណាក។ សំណាកដែលភ្ជាប់មកជាមួយដាក់សំណាកដោយផ្ទាល់ចូលទៅក្នុងបំពង់ផ្ទុកបន្ទាប់ពីយកសំណាក ហើយគម្របបំពង់បំពង់ផ្ទុកត្រូវបានសាងសង់ឡើងនៅក្នុង។ តម្រឹមរន្ធតូចជាមួយនឹងផ្នែកខាងលើនៃចំណុចទាញ ហើយរឹតគម្របបំពង់។ បើប្រៀបធៀបវិធីសាស្ត្រទាំងពីរ វិធីចុងក្រោយនេះមានសុវត្ថិភាពគួរសម។ នៅពេលដែលសំណាកដែលបាក់ត្រូវបានប្រើរួមជាមួយបំពង់ផ្ទុកទំហំតូចជាង វាអាចបណ្តាលឱ្យសារធាតុរាវហៀរចូលក្នុងបំពង់នៅពេលខូច ហើយគួរយកចិត្តទុកដាក់យ៉ាងពេញលេញចំពោះហានិភ័យនៃការបំពុលដែលបណ្តាលមកពីការប្រើប្រាស់ផលិតផលមិនត្រឹមត្រូវ។ វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើបំពង់បង្ហាប់ប៉ូលីស្ទីរីនប្រហោង (PS) ឬបំពង់ចាក់ផ្នត់ប៉ូលីប៉ូលីប្រូពីលីន (PP) សម្រាប់សម្ភារៈនៃចំណុចទាញសំណាក។ មិនថាសម្ភារៈអ្វីត្រូវបានប្រើទេ សារធាតុបន្ថែមកាល់ស្យូមអាល់ជីណេតមិនអាចបន្ថែមបានទេ។ ដំបងឈើ ឬដំបងឫស្សី។ សរុបមក សំណាកគួរតែធានាបាននូវបរិមាណនៃការយកសំណាក និងបរិមាណនៃការបញ្ចេញ ហើយសម្ភារៈដែលបានជ្រើសរើសមិនត្រូវមានសារធាតុដែលប៉ះពាល់ដល់ការធ្វើតេស្តបន្តបន្ទាប់ឡើយ។
២. ដំណោះស្រាយអភិរក្សមេរោគ៖ មានដំណោះស្រាយអភិរក្សមេរោគពីរប្រភេទដែលត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយនៅលើទីផ្សារ មួយគឺជាដំណោះស្រាយថែរក្សាមេរោគដែលត្រូវបានកែប្រែដោយផ្អែកលើឧបករណ៍ដឹកជញ្ជូន និងមួយទៀតគឺជាដំណោះស្រាយដែលបានកែប្រែសម្រាប់ lysate ទាញយកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក។
សមាសធាតុសំខាន់នៃសារធាតុមុនគឺ Eagle's basic culture medium (MEM) ឬអំបិលមានតុល្យភាពរបស់ Hank ដែលត្រូវបានបន្ថែមជាមួយអំបិល អាស៊ីតអាមីណូ វីតាមីន គ្លុយកូស និងប្រូតេអ៊ីនចាំបាច់សម្រាប់ការរស់រានមានជីវិតរបស់វីរុស។ ដំណោះស្រាយផ្ទុកនេះប្រើអំបិល phenol red sodium ជាសូចនាករ និងជាដំណោះស្រាយ។ នៅពេលដែលតម្លៃ pH គឺ 6.6-8.0 ដំណោះស្រាយមានពណ៌ផ្កាឈូក។ គ្លុយកូស L-glutamine និងប្រូតេអ៊ីនចាំបាច់ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងដំណោះស្រាយអភិរក្ស។ ប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានផ្តល់ជាទម្រង់សេរ៉ូមគោគភ៌ ឬអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមគោ ដែលអាចធ្វើឱ្យសំបកប្រូតេអ៊ីនរបស់វីរុសមានស្ថេរភាព។ ដោយសារតែដំណោះស្រាយអភិរក្សសម្បូរទៅដោយសារធាតុចិញ្ចឹម វាអំណោយផលដល់ការរស់រានមានជីវិតរបស់វីរុស ប៉ុន្តែក៏មានប្រយោជន៍ដល់ការលូតលាស់របស់បាក់តេរីផងដែរ។ ប្រសិនបើដំណោះស្រាយអភិរក្សត្រូវបានបំពុលដោយបាក់តេរី វានឹងកើនឡើងក្នុងបរិមាណច្រើន។ កាបូនឌីអុកស៊ីតនៅក្នុងសារធាតុរំលាយអាហាររបស់វានឹងធ្វើឱ្យ pH នៃដំណោះស្រាយអភិរក្សធ្លាក់ចុះពីពណ៌ផ្កាឈូកទៅជាពណ៌លឿង។ ដូច្នេះ ក្រុមហ៊ុនផលិតភាគច្រើនបានបន្ថែមគ្រឿងផ្សំប្រឆាំងនឹងបាក់តេរីទៅក្នុងរូបមន្តរបស់ពួកគេ។ ភ្នាក់ងារប្រឆាំងបាក់តេរីដែលបានណែនាំគឺ ប៉េនីស៊ីលីន ស្ទ្រីបតូម៉ៃស៊ីន ហ្សង់តាមីស៊ីន និងប៉ូលីម៉ិចស៊ីនប៊ី។ សូដ្យូមអាហ្សីត និង 2-មេទីល មិនត្រូវបានណែនាំទេ។ ថ្នាំទប់ស្កាត់ដូចជា 4-មេទីល-4-អ៊ីសូធីអាហ្សូលីន-3-អូន (MCI) និង 5-ក្លរ៉ូ-2-មេទីល-4-អ៊ីសូធីអាហ្សូលីន-3-អូន (CMCI) ទេ ពីព្រោះសមាសធាតុទាំងនេះមានឥទ្ធិពលលើប្រតិកម្ម PCR។ ដោយសារគំរូដែលផ្តល់ដោយដំណោះស្រាយអភិរក្សនេះគឺជាមេរោគរស់ជាមូលដ្ឋាន ភាពដើមនៃគំរូអាចត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងកម្រិតអតិបរមា ហើយវាអាចត្រូវបានប្រើមិនត្រឹមតែសម្រាប់ការស្រង់ចេញ និងការរកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកមេរោគប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែក៏សម្រាប់ការដាំដុះ និងការញែកមេរោគផងដែរ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ គួរកត់សម្គាល់ថា នៅពេលប្រើសម្រាប់ការរកឃើញ ការស្រង់ចេញ និងការបន្សុទ្ធអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកត្រូវតែអនុវត្តបន្ទាប់ពីការធ្វើឱ្យអសកម្ម។
ដំណោះស្រាយអភិរក្សមួយប្រភេទទៀតដែលរៀបចំដោយផ្អែកលើ lysate ស្រង់ចេញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក ដែលមានសមាសធាតុសំខាន់ៗគឺអំបិលមានតុល្យភាព សារធាតុ chelating EDTA អំបិល guanidine (ដូចជា guanidine isothiocyanate, guanidine hydrochloride ជាដើម) សារធាតុ surfactant anionic (ដូចជា dodecane Sodium sulfate) សារធាតុ surfactant cationic (ដូចជា tetradecyltrimethylammonium oxalate) phenol, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT) proteinase K និងសមាសធាតុផ្សេងៗទៀត។ ដំណោះស្រាយរក្សាទុកនេះគឺដើម្បីកាត់មេរោគដោយផ្ទាល់ដើម្បីបញ្ចេញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក និងលុបបំបាត់ RNase។ ប្រសិនបើប្រើសម្រាប់តែ RT-PCR វាសមស្របជាង ប៉ុន្តែ lysate អាចធ្វើឱ្យមេរោគអសកម្ម។ គំរូប្រភេទនេះមិនអាចប្រើសម្រាប់ការបំបែកវប្បធម៌មេរោគបានទេ។
សារធាតុគីមីឆេឡាទីងអ៊ីយ៉ុងលោហៈដែលប្រើក្នុងដំណោះស្រាយរក្សាមេរោគត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើអំបិល EDTA (ដូចជាអាស៊ីតឌីប៉ូតាស្យូមអេទីឡែនឌីអាមីនតេត្រាអាសេទិក អាស៊ីតឌីសូដ្យូមអេទីឡែនឌីអាមីនតេត្រាអាសេទិក ជាដើម) ហើយមិនត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើថ្នាំហេប៉ារីនទេ (ដូចជាសូដ្យូមហេប៉ារីន លីចូមហេប៉ារីន) ដើម្បីកុំឱ្យប៉ះពាល់ដល់ការរកឃើញ PCR។
៣. បំពង់សម្រាប់រក្សាទុក៖ សម្ភារៈនៃបំពង់សម្រាប់រក្សាទុកគួរតែត្រូវបានជ្រើសរើសយ៉ាងប្រុងប្រយ័ត្ន។ មានទិន្នន័យបង្ហាញថា ប៉ូលីភីលីន (Polypropylene) មានទំនាក់ទំនងទៅនឹងការស្រូបយកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក ជាពិសេសនៅកំហាប់អ៊ីយ៉ុងតង់ស្យុងខ្ពស់ ប៉ូលីអេទីឡែន (Polyethylene) ត្រូវបានគេពេញនិយមជាងប៉ូលីភីលីន (Polypropylene)។ ងាយស្រួលចាប់ DNA/RNA។ ផ្លាស្ទិចប៉ូលីអេទីឡែន-ប៉ូលីភីលីន (Polyallomer) និងធុងប្លាស្ទិកប៉ូលីភីលីន (Polypropylene) ដែលបានកែច្នៃពិសេសមួយចំនួនគឺស័ក្តិសមជាងសម្រាប់ការរក្សាទុក DNA/RNA។ លើសពីនេះ នៅពេលប្រើសំឡីជូតដែលអាចបាក់បាន បំពង់សម្រាប់រក្សាទុកគួរព្យាយាមជ្រើសរើសធុងដែលមានកម្ពស់លើសពី 8 សង់ទីម៉ែត្រ ដើម្បីការពារកុំឲ្យមាតិកាប្រឡាក់ និងបំពុលនៅពេលសំឡីជូតត្រូវបានបាក់។
៤. ទឹកសម្រាប់ដំណោះស្រាយអភិរក្សផលិតកម្ម៖ ទឹកបរិសុទ្ធខ្លាំងបំផុតដែលប្រើសម្រាប់ដំណោះស្រាយអភិរក្សផលិតកម្មគួរតែត្រូវបានត្រងតាមរយៈភ្នាសចម្រោះដែលមានទម្ងន់ម៉ូលេគុល 13,000 ដើម្បីធានាបាននូវការដកយកភាពមិនបរិសុទ្ធនៃប៉ូលីមែរចេញពីប្រភពជីវសាស្រ្ត ដូចជា RNase, DNase និង endotoxin ហើយការបន្សុទ្ធធម្មតាមិនត្រូវបានណែនាំទេ។ ទឹក ឬទឹកចម្រោះ។
២. ការប្រើប្រាស់បំពង់យកសំណាកមេរោគ
ការយកសំណាកដោយប្រើបំពង់យកសំណាកមេរោគត្រូវបានបែងចែកជាចម្បងទៅជាការយកសំណាកតាមមាត់ និងសំណាកតាមច្រមុះ៖
១. ការយកសំណាកមាត់ និងបំពង់ក៖ ដំបូងចុចអណ្តាតដោយប្រើឧបករណ៍សង្កត់អណ្តាត បន្ទាប់មកលាតក្បាលនៃសំណាកចូលទៅក្នុងបំពង់ក ដើម្បីជូតបំពង់កទាំងសងខាង និងជញ្ជាំងបំពង់កខាងក្រោយ រួចជូតជញ្ជាំងបំពង់កខាងក្រោយដោយកម្លាំងស្រាលៗ ជៀសវាងការប៉ះឯកតាអណ្តាត។
២. ការយកសំណាកច្រមុះ និងបំពង់ក៖ វាស់ចម្ងាយពីចុងច្រមុះទៅត្រចៀកដោយប្រើសំណាក ហើយសម្គាល់ដោយម្រាមដៃ បញ្ចូលសំណាកចូលទៅក្នុងប្រហោងច្រមុះក្នុងទិសដៅនៃច្រមុះបញ្ឈរ (មុខ) សំណាកគួរតែលាតសន្ធឹងយ៉ាងហោចណាស់ពាក់កណ្តាលនៃប្រវែងនៃត្រចៀកដល់ចុងច្រមុះ។ ទុកសំណាកនៅក្នុងច្រមុះរយៈពេល ១៥-៣០ វិនាទី បង្វិលថ្នមៗ ៣-៥ ដង រួចដកសំណាកចេញ។
វាមិនពិបាកក្នុងការមើលឃើញពីវិធីសាស្ត្រប្រើប្រាស់ទេ មិនថាវាជាសំណាកសម្រាប់យកសំណាកតាមមាត់ ឬសំណាកសម្រាប់យកសំណាកតាមច្រមុះនោះទេ ការយកសំណាកគឺជាកិច្ចការបច្ចេកទេស ដែលពិបាក និងមានមេរោគ។ គុណភាពនៃសំណាកដែលប្រមូលបានគឺទាក់ទងដោយផ្ទាល់ទៅនឹងការរកឃើញជាបន្តបន្ទាប់។ ប្រសិនបើសំណាកដែលប្រមូលបានមានបន្ទុកមេរោគទាប ងាយនឹងបង្កជាលទ្ធផលអវិជ្ជមានមិនពិត ពិបាកក្នុងការបញ្ជាក់ពីការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ២១ ខែមិថុនា ឆ្នាំ ២០២០
