1. Вирус сынамасын алу түтіктерін өндіру туралы
Вирусты іріктеу түтікшелері медициналық құрылғыларға жатады. Көптеген отандық өндірушілер бірінші класты өнімдер бойынша тіркелген, ал компаниялар екінші класты өнімдер бойынша тіркелгені аз. Жақында Ухань мен басқа да жерлердің төтенше жағдайлардағы қажеттіліктерін қанағаттандыру үшін көптеген компаниялар «төтенше жағдайлар арнасын» «бірінші класты жазба рұқсатына өтініш беру» арқылы қабылдады. Вирусты іріктеу түтігі іріктеу тампонынан, вирусты сақтау ерітіндісінен және сыртқы қаптамадан тұрады. Бірыңғай ұлттық стандарт немесе салалық стандарт болмағандықтан, әртүрлі өндірушілердің өнімдері айтарлықтай ерекшеленеді.
1. Сынама алу тампоны: Сынама алу тампоны сынама алу орнына тікелей тиеді, ал сынама алу басының материалы кейінгі анықтаумен тығыз байланысты. Сынама алу тампоны басы полиэстер (ПЭ) синтетикалық талшықтан немесе Rayon (жасанды талшық) жасалуы керек. Кальций альгинат губкасын немесе ағаш таяқша тампондарын (бамбук таяқшаларын қоса алғанда) пайдалануға болмайды, ал тампон басының материалы мақта өнімдері бола алмайды. Мақта талшығында ақуыздың күшті адсорбциясы болғандықтан, оны кейінгі сақтау ерітіндісіне сіңіру оңай емес; ал кальций альгинаты мен ағаш компоненттері бар ағаш таяқша немесе бамбук таяқшасы сынған кезде, сақтау ерітіндісіне батыру ақуызды да адсорбциялайды, тіпті кейінгі ПТР реакциясын тежеуі мүмкін. Тампон басының материалы үшін ПЭ талшығы, полиэстер талшығы және полипропилен талшығы сияқты синтетикалық талшықтарды пайдалану ұсынылады. Мақта сияқты табиғи талшықтар ұсынылмайды. Нейлон талшықтары да ұсынылмайды, себебі нейлон талшықтары (тіс щеткасының басына ұқсас) суды сіңіреді. Нашар, бұл сынама алу көлемінің жеткіліксіздігіне әкеледі, бұл анықтау жылдамдығына әсер етеді. Сынама алу тампонының материалы үшін кальций альгинат губкасын қолдануға тыйым салынады! Тампон тұтқасының екі түрі бар: сынған және кіріктірілген. Сынған тампон сынама алғаннан кейін сақтау түтігіне салынады, ал түтік қақпағы сынама алу басына жақын жерден сынғаннан кейін сынады; кіріктірілген тампон сынама алғаннан кейін сынама алу тампонын сақтау түтігіне тікелей салады, ал сақтау түтігінің қақпағы ішке қарай орнатылады. Кішкентай тесікті тұтқаның жоғарғы жағымен туралап, түтік қақпағын қатайтыңыз. Екі әдісті салыстыра отырып, соңғысы салыстырмалы түрде қауіпсіз. Сынған тампон кішірек өлшемді сақтау түтігімен бірге қолданылған кезде, сынған кезде түтікке сұйықтық шашырауы мүмкін, сондықтан өнімді дұрыс пайдаланбау салдарынан ластану қаупіне толық назар аудару керек. Тампон тұтқасының материалы үшін қуыс полистирол (PS) экструзияланған түтікті немесе полипропилен (PP) инъекциялық қыртыс түтігін пайдалану ұсынылады. Қандай материал қолданылса да, кальций альгинат қоспаларын қосуға болмайды; ағаш таяқшалар немесе бамбук таяқшалары. Қысқасы, сынама алу тампоны сынама алу мөлшері мен бөліну мөлшерін қамтамасыз етуі керек, ал таңдалған материалдарда кейінгі сынақтарға әсер ететін заттар болмауы керек.
2. Вирусты сақтауға арналған ерітінді: Нарықта кеңінен қолданылатын вирусты сақтауға арналған екі түрлі ерітінді бар, біреуі - тасымалдау ортасына негізделген өзгертілген вирусты сақтауға арналған ерітінді, ал екіншісі - нуклеин қышқылын экстракциялау лизатына арналған өзгертілген ерітінді.
Біріншісінің негізгі компоненті - вирустың тіршілік етуі үшін қажетті тұздар, аминқышқылдары, дәрумендер, глюкоза және ақуызбен қосылатын Иглдің негізгі қоректік ортасы (МЭМ) немесе Хэнктің теңдестірілген тұзы. Бұл сақтау ерітіндісінде индикатор және ерітінді ретінде фенол қызыл натрий тұзы қолданылады. рН мәні 6,6-8,0 болғанда, ерітінді қызғылт болады. Қажетті глюкоза, L-глутамин және ақуыз консервілеу ерітіндісіне қосылады. Ақуыз вирустың ақуыз қабығын тұрақтандыра алатын ұрықтың ірі қара сарысуы немесе ірі қара сарысу альбумині түрінде беріледі. Консервілеу ерітіндісі қоректік заттарға бай болғандықтан, ол вирустың тіршілік етуіне ықпал етеді, сонымен қатар бактериялардың өсуіне де пайдалы. Егер консервілеу ерітіндісі бактериялармен ластанған болса, ол көп мөлшерде көбейеді. Оның метаболиттері құрамындағы көмірқышқыл газы консервілеу ерітіндісінің рН мәнін қызғылт түстен төмендетеді. Сары түске айналады. Сондықтан көптеген өндірушілер өз формулаларына бактерияға қарсы ингредиенттерді қосты. Ұсынылатын бактерияға қарсы агенттер - пенициллин, стрептомицин, гентамицин және полимиксин B. Натрий азиді және 2-метил ұсынылмайды. 4-метил-4-изотиазолин-3-он (MCI) және 5-хлор-2-метил-4-изотиазолин-3-он (CMCI) сияқты ингибиторлар, себебі бұл компоненттер ПТР реакциясына әсер етеді. Бұл консервілеу ерітіндісімен берілген үлгі негізінен тірі вирус болғандықтан, үлгінің түпнұсқалығын барынша сақтауға болады және оны тек вирус нуклеин қышқылдарын алу және анықтау үшін ғана емес, сонымен қатар вирустарды өсіру және оқшаулау үшін де пайдалануға болады. Дегенмен, анықтау үшін қолданылған кезде нуклеин қышқылын алу және тазарту инактивациядан кейін орындалуы керек екенін ескеру қажет.
Нуклеин қышқылын экстракциялау лизатына негізделген тағы бір консервациялау ерітіндісі, негізгі компоненттері теңдестірілген тұздар, ЭДТА хелаттау агенті, гуанидин тұзы (гуанидин изотиоцианаты, гуанидин гидрохлориді және т.б.), аниондық беттік-белсенді зат (мысалы, додекан натрий сульфаты), катиондық беттік-белсенді заттар (мысалы, тетрадецилтриметиламмоний оксалат), фенол, 8-гидроксихинолин, дитиотреитол (ДТТ), протеиназа К және басқа компоненттер. Бұл сақтау ерітіндісі вирусты тікелей бөліп, нуклеин қышқылын босатып, РНҚ-ны жоюға арналған. Егер тек RT-ПТР үшін қолданылса, ол қолайлырақ, бірақ лизат вирусты белсенді ете алмайды. Бұл үлгіні вирус дақылын бөлу үшін пайдалануға болмайды.
Вирусты сақтау ерітіндісінде қолданылатын металл иондарын хелаттаушы агент ретінде ЭДТА тұздарын (мысалы, дипалий этилендиаминтетрауксус қышқылы, динатрий этилендиаминтетрауксус қышқылы және т.б.) пайдалану ұсынылады, ал ПТР анықтауға әсер етпеу үшін гепаринді (мысалы, натрий гепарині, литий гепарині) қолдану ұсынылмайды.
3. Консервілеу түтігі: Консервілеу түтігінің материалын мұқият таңдау керек. Полипропиленнің (полипропилен) нуклеин қышқылының адсорбциясымен, әсіресе жоғары кернеулі ион концентрациясында байланысты екендігі туралы деректер бар, полиэтилен (полиэтилен) полипропиленге (полипропилен) қарағанда артықшылықты. ДНҚ/РНҚ ұстау оңай. Полиэтилен-пропилен полимері (полиалломер) пластикасы және кейбір арнайы өңделген полипропилен (полипропилен) пластикалық контейнерлер ДНҚ/РНҚ сақтауға қолайлырақ. Сонымен қатар, сынғыш тампонды қолданған кезде, сақтау түтігі тампон сынған кезде ішіндегісінің шашырап, ластануына жол бермеу үшін биіктігі 8 см-ден асатын контейнерді таңдауға тырысуы керек.
4. Өндірістік консервациялау ерітіндісіне арналған су: Өндірістік консервациялау ерітіндісіне қолданылатын аса таза суды RNase, DNase және эндотоксин сияқты биологиялық көздерден полимер қоспаларын кетіру үшін молекулалық салмағы 13000 болатын ультрафильтрациялық мембрана арқылы сүзу керек, ал қарапайым тазарту ұсынылмайды. Су немесе дистилденген су.
2. Вирус үлгілерін алу түтіктерін пайдалану
Вирустық үлгі алу түтігін пайдаланып сынама алу негізінен орофарингеальды және мұрын-жұтқыншақтан сынама алу болып бөлінеді:
1. Ауыз-жұтқыншақтан сынама алу: Алдымен тілді тілді басатын құралмен басыңыз, содан кейін сынама алу тампонының басын тамаққа созып, екі жақты жұтқыншақ бадамша бездерін және жұтқыншақтың артқы қабырғасын сүртіңіз, содан кейін жұтқыншақтың артқы қабырғасын жеңіл күшпен сүртіңіз, тіл бөлігіне тигізбеңіз.
2. Мұрын-жұтқыншақтан сынама алу: мұрынның ұшынан құлақ қалқанына дейінгі қашықтықты тампонмен өлшеп, саусақпен белгілеңіз, сынама алу қалқанын мұрын қуысына тік мұрын (бет) бағытында енгізіңіз, тампон құлақ қалқанының ұзындығының кем дегенде жартысына дейін мұрынның ұшына дейін созылуы керек, тампонды мұрынға 15-30 секундқа қалдырыңыз, 3-5 рет ақырын айналдырыңыз және тампонды алыңыз.
Қолдану әдісінен ауыз-жұтқыншақ жағындысы ма, әлде мұрын-жұтқыншақ жағындысы ма екенін анықтау қиын емес, сынама алу қиын және ластанған техникалық тапсырма болып табылады. Жиналған үлгінің сапасы кейінгі анықтауға тікелей байланысты. Егер жиналған үлгіде вирустық жүктеме төмен болса, жалған теріс нәтижелер беру оңай, диагнозды растау қиын.
Жарияланған уақыты: 2020 жылғы 21 маусым
