1. ウイルス採取チューブの製造について
ウイルス採取チューブは医療機器製品に属し、国内メーカーの多くは第一種製品として登録されており、第二種製品として登録されている企業はごくわずかです。近年、武漢などの緊急ニーズに対応するため、多くの企業が「緊急ルート」を利用して「第一種記録許可を申請」しています。ウイルス採取チューブは、採取綿棒、ウイルス保存液、外装で構成されています。統一された国家規格や業界規格がないため、各メーカーの製品には大きなばらつきがあります。
1. サンプリングスワブ：サンプリングスワブはサンプリング部位に直接接触するため、サンプリングヘッドの材質はその後の検出に密接に関係します。サンプリングスワブヘッドは、ポリエステル（PE）合成繊維またはレーヨン（人造繊維）で作られている必要があります。アルギン酸カルシウムスポンジや木棒スワブ（竹棒を含む）は使用できません。また、スワブヘッドの材質は綿製品は使用できません。綿繊維はタンパク質の吸着力が強いため、後続の保存液に溶出しにくいです。また、アルギン酸カルシウムや木質成分を含む木棒や竹棒が折れた場合、保存液に浸すとタンパク質も吸着され、後続のPCR反応を阻害する可能性があります。スワブヘッドの材質には、PE繊維、ポリエステル繊維、ポリプロピレン繊維などの合成繊維を使用することをお勧めします。綿などの天然繊維は推奨されません。ナイロン繊維も推奨されません。ナイロン繊維（歯ブラシのヘッドに類似）は吸水性が高いためです。不良のため、サンプリング量が不十分になり、検出率に影響します。アルギン酸カルシウムスポンジはサンプリング綿棒の素材として使用しないでください。綿棒の柄には、折れ型と内蔵型の2種類があります。折れた綿棒はサンプリング後に収納チューブに入れ、サンプリングヘッドに近い位置から折ってチューブキャップを破ります。内蔵型綿棒は、サンプリング後にサンプリング綿棒を直接収納チューブに入れ、収納チューブのチューブカバーが内蔵されています。小さな穴を柄の上部に合わせ、チューブカバーを締めます。 2つの方法を比較すると、後者の方が比較的安全です。折れた綿棒を小さいサイズの収納チューブと組み合わせて使用すると、破損時にチューブ内に液体が飛び散る可能性があり、製品の不適切な使用による汚染のリスクに十分注意する必要があります。綿棒の柄の材質には、中空ポリスチレン（PS）押し出しチューブまたはポリプロピレン（PP）射出折り曲げチューブの使用をお勧めします。どのような材質であっても、アルギン酸カルシウムなどの添加剤を加えることはできません。木の棒でも竹の棒でも構いません。つまり、採取綿棒は採取量と放出量を確保し、選択した材質にはその後の検査に影響を与える物質が含まれていてはなりません。
2. ウイルス保存液：市場で広く使用されているウイルス保存液には、輸送媒体に基づいて修正されたウイルス維持液と、核酸抽出溶解液用に修正された液の 2 種類があります。
前者の主成分はイーグル基本培地（MEM）またはハンクスバランス塩で、これにウイルスの生存に必要な塩、アミノ酸、ビタミン、ブドウ糖、タンパク質が添加されています。この保存液は、フェノールレッドナトリウム塩を指示薬および溶液として使用しています。pH値が6.6〜8.0の場合、溶液はピンク色です。必要なブドウ糖、L-グルタミン、タンパク質を保存液に加えます。タンパク質はウシ胎児血清またはウシ血清アルブミンの形で提供され、ウイルスのタンパク質殻を安定化させることができます。保存液は栄養素が豊富であるため、ウイルスの生存を助長するだけでなく、細菌の増殖にも有益です。保存液が細菌に汚染されている場合、細菌は大量に増殖します。その代謝産物中の二酸化炭素は、保存液のpHをピンク色から黄色に変化させます。そのため、ほとんどのメーカーは、処方に抗菌成分を添加しています。推奨される抗菌剤は、ペニシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、ポリミキシンBです。アジ化ナトリウムや2-メチルは推奨されません。4-メチル-4-イソチアゾリン-3-オン（MCI）、5-クロロ-2-メチル-4-イソチアゾリン-3-オン（CMCI）などの阻害剤は、PCR反応に影響を与える成分があるためです。この保存液で得られるサンプルは基本的に生きたウイルスであるため、サンプルの独自性を最大限に保つことができ、ウイルス核酸の抽出・検出だけでなく、ウイルスの培養・分離にも使用できます。ただし、検出に使用する場合は、不活化後に核酸抽出・精製を行う必要があることに注意する必要があります。
核酸抽出溶解液をベースに調製された保存液の一種で、主な成分は平衡塩類、EDTAキレート剤、グアニジン塩（グアニジンイソチオシアネート、グアニジン塩酸塩など）、陰イオン界面活性剤（ドデカン硫酸ナトリウムなど）、陽イオン界面活性剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムシュウ酸塩など）、フェノール、8-ヒドロキシキノリン、ジチオトレイトール（DTT）、プロテイナーゼKなどです。この保存液はウイルスを直接切断して核酸を放出し、RNaseを除去するためのものです。RT-PCRのみに使用する場合は適していますが、溶解液によってウイルスが不活性化される可能性があります。このサンプルはウイルス培養分離には使用できません。
ウイルス保存液に使用する金属イオンキレート剤は、PCR検出に影響を与えないように、EDTA塩（エチレンジアミン四酢酸二カリウム、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムなど）の使用が推奨され、ヘパリン（ヘパリンナトリウム、ヘパリンリチウムなど）の使用は推奨されません。
3. 保存チューブ：保存チューブの材質は慎重に選択する必要があります。ポリプロピレン（Polypropylene）は核酸の吸着に関係しており、特に高イオン濃度下では、ポリプロピレン（Polypropylene）よりもポリエチレン（Polyethylene）の方がDNA/RNAを掴みやすいというデータがあります。ポリエチレンプロピレンポリマー（Polyallomer）プラスチックや、特殊加工されたポリプロピレン（Polypropylene）プラスチック容器は、DNA/RNAの保存に適しています。また、折れやすい綿棒を使用する場合は、綿棒が折れた際に内容物が飛び散って汚染されるのを防ぐため、保存チューブの高さが8cm以上の容器を選ぶようにしてください。
4. 生産保存液用の水：生産保存液に使用する超純水は、分子量13,000の限外濾過膜でろ過し、RNase、DNase、エンドトキシンなどの生物由来のポリマー不純物を確実に除去する必要があります。通常の精製は推奨されません。水または蒸留水を使用してください。
2. ウイルス採取チューブの使用
ウイルス採取チューブを使用した採取は、主に口腔咽頭採取と鼻咽頭採取に分けられます。
1. 口腔咽頭サンプル採取：まず舌圧子で舌を押さえ、次にサンプル採取綿棒の先端を喉に伸ばして両側の咽頭扁桃と咽頭後壁を拭きます。舌部に触れないように注意しながら、軽い力で咽頭後壁を拭きます。
2. 鼻咽頭サンプル採取：綿棒で鼻先から耳たぶまでの距離を測り、指で印を付け、採取綿棒を鼻腔に垂直な鼻（顔）の方向に挿入します。綿棒は耳たぶの長さの少なくとも半分から鼻先まで伸びている必要があります。綿棒を鼻の中に15〜30秒間置いたまま、3〜5回ゆっくりと回転させ、綿棒を引き抜きます。
使用方法から判断するのは難しくありません。口腔咽頭スワブであれ鼻咽頭スワブであれ、サンプル採取は技術的な作業であり、困難で汚染されやすい作業です。採取したサンプルの品質は、その後の検査結果に直接影響します。採取したサンプルのウイルス量が低いと、偽陰性になりやすく、診断の確定が困難になります。
投稿日時: 2020年6月21日
