כמה מחשבות על צינור דגימה של וירוסים

1. אודות ייצור צינורות דגימה של וירוסים
צינורות דגימת וירוסים שייכים למוצרי מכשור רפואי. רוב היצרנים המקומיים רשומים לפי מוצרים מהשורה הראשונה, ומעט חברות רשומות לפי מוצרים מהשורה השנייה. לאחרונה, על מנת לענות על צרכי החירום של ווהאן ומקומות אחרים, חברות רבות נקטו ב"ערוץ החירום" "הגשת בקשה לאישור רישום מהשורה הראשונה". צינור דגימת הווירוסים מורכב ממקלון דגימה, תמיסת שימור וירוסים ואריזה חיצונית. מכיוון שאין תקן לאומי אחיד או תקן תעשייתי, המוצרים של יצרנים שונים משתנים מאוד.

1. מקלון דגימה: מקלון הדגימה בא במגע ישיר עם אתר הדגימה, והחומר של ראש הדגימה קשור קשר הדוק לגילוי שלאחר מכן. ראש מקלון הדגימה צריך להיות עשוי מסיבים סינתטיים מפוליאסטר (PE) או ריון (סיבים סינתטיים). לא ניתן להשתמש בספוג אלגינט סידן או מקלות עץ (כולל מקלות במבוק), והחומר של ראש המקלון לא יכול להיות עשוי ממוצרי כותנה. מכיוון שלסיבי כותנה יש ספיחה חזקה של חלבון, הם לא קלים לשחרור לתמיסת האחסון שלאחר מכן; וכאשר מקל עץ או מקל במבוק המכיל אלגינט סידן ורכיבים מעץ נשבר, השרייה בתמיסת האחסון תספוג גם חלבון, ואף תעכב את תגובת ה-PCR שלאחר מכן. מומלץ להשתמש בסיבים סינתטיים כגון סיבי PE, סיבי פוליאסטר וסיבים מפוליפרופילן כחומר של ראש המקלון. סיבים טבעיים כגון כותנה אינם מומלצים. גם סיבי ניילון אינם מומלצים מכיוון שסיבי ניילון (בדומה לראשי מברשות שיניים) סופגים מים. גרוע, מה שמוביל לנפח דגימה לא מספק, מה שמשפיע על קצב הגילוי. ספוג אלגינט סידן אסור לדגום חומר מקלון! לידית המקלון יש שני סוגים: שבורה ומובנה. המקלון השבור מונח בצינור האחסון לאחר הדגימה, ומכסה הצינור נשבר לאחר שנשבר מהמיקום ליד ראש הדגימה; המקלון המובנה מכניס את מקלון הדגימה ישירות לצינור האחסון לאחר הדגימה, ומכסה צינור האחסון מובנה. יש ליישר את החור הקטן עם החלק העליון של הידית ולהדק את מכסה הצינור. בהשוואה בין שתי השיטות, האחרונה בטוחה יחסית. כאשר משתמשים במקלון השבור בשילוב עם צינור אחסון קטן יותר, הדבר עלול לגרום להתזות נוזלים בצינור כאשר הוא שבור, ויש לשים לב מלא לסיכון לזיהום הנגרם כתוצאה משימוש לא נכון במוצר. מומלץ להשתמש בצינור פוליסטירן חלול (PS) או בצינור קימוט הזרקה מפוליפרופילן (PP) כחומר ידית המקלון. לא משנה באיזה חומר משתמשים, לא ניתן להוסיף תוספי אלגינט סידן; מקלות עץ או מקלות במבוק. בקיצור, מקלון הדגימה צריך להבטיח את כמות הדגימה ואת כמות השחרור, והחומרים שנבחרו אסור שיכילו חומרים המשפיעים על הבדיקות הבאות.

2. תמיסת שימור וירוסים: ישנם שני סוגים של תמיסות שימור וירוסים הנמצאות בשימוש נרחב בשוק, האחד הוא תמיסת שימור וירוסים שעברה שינוי בהתבסס על מצע ההובלה, והשני הוא תמיסה שעברה שינוי עבור ליזט של חומצות גרעין.
המרכיב העיקרי של הראשון הוא מצע תרבית בסיסי של Eagle (MEM) או מלח מאוזן של Hank, אליו מוסיפים מלחים, חומצות אמינו, ויטמינים, גלוקוז וחלבון הדרושים להישרדות הנגיף. תמיסת אחסון זו משתמשת במלח נתרן אדום פנול כאינדיקטור ותמיסה. כאשר ערך ה-pH הוא 6.6-8.0, התמיסה ורודה. גלוקוז, L-גלוטמין וחלבון הדרושים מוסיפים לתמיסת השימור. החלבון מסופק בצורה של סרום בקר עוברי או אלבומין בסרום בקר, שיכול לייצב את קליפת החלבון של הנגיף. מכיוון שתמיסת השימור עשירה בחומרים מזינים, היא תורמת להישרדות הנגיף אך גם מועילה לגדילת חיידקים. אם תמיסת השימור מזוהמת בחיידקים, היא תתרבה בכמויות גדולות. הפחמן הדו-חמצני במטבוליטים שלה יגרום לירידה ב-pH של תמיסת השימור מוורוד לצהוב. לכן, רוב היצרנים הוסיפו מרכיבים אנטיבקטריאליים לניסוחים שלהם. החומרים האנטיבקטריאליים המומלצים הם פניצילין, סטרפטומיצין, גנטמיצין ופולימיקסין B. אזיד נתרן ו-2-מתיל אינם מומלצים. מעכבים כגון 4-מתיל-4-איזותיאזולין-3-און (MCI) ו-5-כלורו-2-מתיל-4-איזותיאזולין-3-און (CMCI) אינם מומלצים, משום שלרכיבים אלה יש השפעה על תגובת ה-PCR. מכיוון שהדגימה המסופקת על ידי תמיסת שימור זו היא בעצם וירוס חי, ניתן לשמור על מקוריות הדגימה במידה הרבה ביותר, וניתן להשתמש בה לא רק לחילוץ וגילוי של חומצות גרעין של הנגיפים, אלא גם לגידול ובידוד של וירוסים. עם זאת, יש לציין שכאשר משתמשים בה לגילוי, יש לבצע חילוץ וניקוי של חומצות גרעין לאחר השבתה.
סוג נוסף של תמיסת שימור המוכנה על בסיס ליזט של מיצוי חומצות גרעין, המרכיבים העיקריים הם מלחים מאוזנים, חומר כלאטינג EDTA, מלח גואנידין (כגון גואנידין איזותיוציאנט, גואנידין הידרוכלוריד וכו'), חומר פעיל שטח אניוני (כגון דודקאן נתרן סולפט), חומרים פעילי שטח קטיוניים (כגון טטראדצילטרימתיל אמוניום אוקסלט), פנול, 8-הידרוקסי-קינולין, דיתיותרייטול (DTT), פרוטאינאז K ורכיבים אחרים. תמיסת אחסון זו נועדה לחתוך ישירות את הנגיף כדי לשחרר את חומצת הגרעין ולסלק את ה-RNase. אם משתמשים בה רק ל-RT-PCR, היא מתאימה יותר, אך הליזט יכול להשבית את הנגיף. לא ניתן להשתמש בדגימה מסוג זה להפרדת תרביות וירוסים.

מומלץ להשתמש במלחי EDTA (כגון חומצה דיפוטסיום אתילן-דיאמין-טטרא-אצטית, חומצה דיסודיום אתילן-דיאמין-טטרא-אצטית וכו') בחומר הקושר של יוני מתכת המשמש בתמיסת שימור הנגיפים, ולא מומלץ להשתמש בהפרין (כגון נתרן הפרין, ליתיום הפרין), כדי לא להשפיע על גילוי ה-PCR.
3. מיכל שימור: יש לבחור בקפידה את חומר מיכל השימור. ישנם נתונים המצביעים על כך שפוליפרופילן (פוליפרופילן) קשור לספיחת חומצות גרעין, במיוחד בריכוז יוני מתח גבוה, פוליאתילן (פוליאתילן) עדיף על פני פוליפרופילן (פוליפרופילן). DNA/RNA קל לאחיזה. פלסטיק פוליאתילן-פרופילן פולימר (פוליאלומר) וכמה מיכלי פלסטיק פוליפרופילן (פוליפרופילן) מעובדים במיוחד מתאימים יותר לאחסון DNA/RNA. בנוסף, בעת שימוש במקלון שביר, יש לנסות לבחור מיכל בגובה של יותר מ-8 ס"מ במיכל האחסון כדי למנוע התזות וזיהום של התכולה כאשר המקלון שבור.

4. מים לתמיסת שימור ייצור: יש לסנן את המים האולטרה-טהורים המשמשים לתמיסת שימור ייצור דרך ממברנת אולטרה-סינון בעלת משקל מולקולרי של 13,000 כדי להבטיח הסרת זיהומים פולימריים ממקורות ביולוגיים, כגון RNase, DNase ואנדוטוקסין, וטיהור רגיל אינו מומלץ. מים או מים מזוקקים.

2. שימוש במבחנות דגימה לנגיף

דגימה באמצעות צינור דגימת הנגיף מחולקת בעיקר לדגימה אורופרינגיאלית ודגימה מהאף והלוע:

1. דגימה מהפה והלוע: ראשית לחצו על הלשון בעזרת מדכא הלשון, לאחר מכן הושטו את ראש מקלון הדגימה לתוך הגרון כדי לנגב את השקדים הלועיים הדו-צדדיים ואת דופן הלוע האחורית, ונגבו את דופן הלוע האחורית בכוח קל, תוך הימנעות ממגע ביחידת הלשון.

2. דגימה מהאף והלוע: מדדו את המרחק מקצה האף לתנוך האוזן בעזרת מקלון וסמנו באצבע, הכניסו את מקלון הדגימה לחלל האף בכיוון האף האנכי (פנים), המקלון צריך להגיע לפחות למחצית מאורך תנוך האוזן עד לקצה האף, השאירו את המקלון באף למשך 15-30 שניות, סובבו בעדינות 3-5 פעמים ומשכו את המקלון.
לא קשה להבין משיטת השימוש, האם מדובר במקלון אורופרינגלי או אף-לוע, שדגימה היא משימה טכנית, שהיא קשה ומזוהמת. איכות הדגימה שנאספה קשורה ישירות לגילוי שלאחר מכן. אם לדגימה שנאספה יש עומס ויראלי נמוך, קל לגרום לתוצאות שליליות שגויות, קשה לאשר את האבחנה.