1. Um framleiðslu á sýnatökurörum fyrir veirur
Sýnatökurör fyrir veirur tilheyra lækningatækjavörum. Flestir innlendir framleiðendur eru skráðir samkvæmt fyrsta flokks vörum, en fá fyrirtæki eru skráð samkvæmt annars flokks vörum. Nýlega, til að mæta neyðarþörfum Wuhan og annarra staða, hafa mörg fyrirtæki farið í „neyðarleiðina“ og sótt um leyfi til að skrá fyrsta flokks. Sýnatökurörið fyrir veirur samanstendur af sýnatökuþurrku, veiruvarnalausn og ytri umbúðum. Þar sem enginn sameinaður landsstaðall eða iðnaðarstaðall er til staðar, eru vörur frá ýmsum framleiðendum mjög mismunandi.
1. Sýnatökuprufa: Sýnatökuprufan snertir sýnatökustaðinn beint og efni sýnatökuhaussins er nátengt síðari greiningunni. Sýnatökuhausinn ætti að vera úr pólýester (PE) tilbúnum trefjum eða rayon (gervitrefjum). Ekki er hægt að nota kalsíumalginat svampa eða trépinna (þar með talið bambuspinna) og efni sýnatökuhaussins má ekki vera úr bómullarvörum. Þar sem bómullartrefjar hafa sterka próteinsog er ekki auðvelt að skilja þær út í síðari geymslulausnina; og þegar trépinnar eða bambuspinnar sem innihalda kalsíumalginat og tréhluta brotna, mun bleyti í geymslulausninni einnig aðsogast prótein og jafnvel hindra síðari PCR viðbrögð. Mælt er með að nota tilbúnar trefjar eins og PE trefjar, pólýester trefjar og pólýprópýlen trefjar sem efni í sýnatökuhausinn. Náttúrulegir trefjar eins og bómull eru ekki ráðlagðir. Nylon trefjar eru heldur ekki ráðlagðar vegna þess að nylon trefjar (svipað og tannburstahausar) taka í sig vatn. Léleg, sem leiðir til ófullnægjandi sýnatökumagns, sem hefur áhrif á greiningartíðnina. Kalsíumalginat svampur er bannaður fyrir sýnatöku úr sýnisprautum! Prufuhandföng eru af tveimur gerðum: brotið og innbyggt. Brotinn pinna er settur í geymslurörið eftir sýnatöku og lok rörsins er brotið eftir að það hefur verið brotið frá staðsetningu sýnatökuhaussins; innbyggði pinninn setur sýnatökupinna beint í geymslurörið eftir sýnatöku og lok geymslurörsins er sett inn. Stilltu litla gatið upp við efri hluta handfangsins og hertu lok rörsins. Sé þessi tvö aðferð borin saman er sú síðarnefnda tiltölulega örugg. Þegar brotinn pinna er notaður ásamt minni geymsluröri getur það valdið vökvaskvettum í rörinu ef það brotnar og skal gæta að mengunarhættu af völdum óviðeigandi notkunar vörunnar. Mælt er með að nota holt pólýstýren (PS) útpressað rör eða pólýprópýlen (PP) sprautubrotsrör sem efni í handfangi pinnans. Óháð því hvaða efni er notað má ekki bæta við kalsíumalginati; tréstöngum eða bambusstöngum. Í stuttu máli ætti sýnatökupinninn að tryggja magn sýnatökunnar og magn losunar og valin efni mega ekki innihalda efni sem hafa áhrif á síðari prófanir.
2. Veiruvarðveislulausn: Tvær gerðir af veiruvarðveislulausnum eru mikið notaðar á markaðnum, önnur er veiruvarðveislulausn sem er breytt út frá flutningsmiðlinum og hin er breytt lausn fyrir kjarnsýruútdráttarlýsat.
Aðalþáttur þess fyrrnefnda er Eagle's basic ræktunarmiðill (MEM) eða Hank's balanced salt, sem er bætt við söltum, amínósýrum, vítamínum, glúkósa og próteini sem nauðsynleg eru fyrir lifun veirunnar. Þessi geymslulausn notar fenólrautt natríumsalt sem vísi og lausn. Þegar pH gildið er 6,6-8,0 er lausnin bleik. Nauðsynlegur glúkósi, L-glútamíni og próteini er bætt við varðveislulausnina. Próteinið er í formi fósturs nautgripasermis eða nautgripasermisalbúmíns, sem getur stöðugað próteinhjúp veirunnar. Vegna þess að varðveislulausnin er rík af næringarefnum er hún stuðlandi fyrir lifun veirunnar en einnig gagnleg fyrir vöxt baktería. Ef varðveislulausnin er menguð af bakteríum mun hún fjölga sér í miklu magni. Koltvísýringurinn í umbrotsefnum hennar veldur því að pH varðveislulausnarinnar lækkar úr bleiku í gult. Þess vegna hafa flestir framleiðendur bætt bakteríudrepandi innihaldsefnum við samsetningar sínar. Ráðlögð sýklalyf eru penisillín, streptómýsín, gentamísín og pólýmýxín B. Natríumazíð og 2-metýl eru ekki ráðlögð. Hemlar eins og 4-metýl-4-ísótíasólín-3-ón (MCI) og 5-klór-2-metýl-4-ísótíasólín-3-ón (CMCI) þar sem þessir þættir hafa áhrif á PCR viðbrögðin. Þar sem sýnið sem fæst með þessari varðveislulausn er í grundvallaratriðum lifandi veira, er hægt að varðveita upprunaleika sýnisins að mestu leyti og það er ekki aðeins hægt að nota það til að draga út og greina kjarnsýrur veirunnar, heldur einnig til að rækta og einangra veirur. Hins vegar skal tekið fram að þegar kjarnsýrur eru notaðar til greiningar verður að framkvæma útdrátt og hreinsun kjarnsýru eftir óvirkjun.
Önnur tegund varðveislulausnar sem er búin til úr kjarnsýruútdráttarlýsati, þar sem helstu innihaldsefnin eru jafnvægissölt, EDTA klóbindiefni, gúanidínsalt (eins og gúanidínísóþíósýanat, gúanidínhýdróklóríð o.s.frv.), anjónísk yfirborðsefni (eins og dódekan natríumsúlfat), katjónísk yfirborðsefni (eins og tetradecýltrímetýlammoníum oxalat), fenól, 8-hýdroxýkínólín, díþíóþreitól (DTT), próteinasi K og önnur innihaldsefni. Þessi geymslulausn er notuð til að kljúfa veiruna beint til að losa kjarnsýruna og útrýma RNasa. Ef hún er eingöngu notuð fyrir RT-PCR er hún hentugri, en lýsatið getur gert veiruna óvirka. Þessi tegund sýnis er ekki hægt að nota til aðskilnaðar veiruræktunar.
Mælt er með að nota EDTA sölt (eins og tvíkalíum etýlendíamíntetraediksýru, tvínatríum etýlendíamíntetraediksýru o.s.frv.) fyrir málmjóna-kelabindiefnið sem notað er í veiruvarnalausninni og ekki er mælt með notkun heparíns (eins og natríumheparíns, litíumheparíns) til að hafa ekki áhrif á PCR greiningu.
3. Geymslurör: Efni geymslurörsins skal vandlega valið. Gögn benda til þess að pólýprópýlen (Polypropylene) tengist aðsogi kjarnsýra, sérstaklega við mikla spennujónaþéttni. Pólýetýlen (Polyethylene) er æskilegra en pólýprópýlen (Polypropylene). Auðvelt að grípa til DNA/RNA. Pólýetýlen-própýlen fjölliða (Polyallomer) plast og sum sérunnin pólýprópýlen (Polypropylene) plastílát henta betur til geymslu á DNA/RNA. Að auki, þegar notaður er brotinn pinna, ætti að reyna að velja ílát sem er hærra en 8 cm í geymslurörinu til að koma í veg fyrir að innihaldið skvettist og mengist þegar pinninn er brotinn.
4. Vatn til varðveislulausnar í framleiðslu: Sía skal útfjólublátt vatn sem notað er í varðveislulausn í framleiðslu í gegnum útfjólublátt vatn með mólþunga 13.000 til að tryggja að óhreinindi í fjölliðum úr líffræðilegum uppruna, svo sem RNasa, DNasa og innri eiturefni, séu fjarlægð og venjuleg hreinsun er ekki ráðlögð. Vatn eða eimað vatn.
2. Notkun sýnatökuröra fyrir veirur
Sýnataka með veirusýnatökuröri skiptist aðallega í munnkokksýnatöku og nefkoksýnatöku:
1. Sýnataka úr munni og koki: Ýttu fyrst á tunguna með tungutappanum, réttu síðan odd sýnatökupinnasins út í hálsinn til að þurrka báða kokhálskörtlana og aftari kokvegginn og þurrkaðu aftari kokvegginn með léttum krafti, forðastu að snerta tunguna.
2. Nefkokssýnataka: Mælið fjarlægðina frá nefoddinum að eyrnasneplinum með pinna og merkið með fingri, stingið pinnanum inn í nefholið í átt að lóðréttu nefinu (andlitinu). Pinninn ætti að ná að minnsta kosti hálfan lengd eyrnasneplisins að nefoddinum. Látið pinnann vera í nefinu í 15-30 sekúndur, snúið honum varlega 3-5 sinnum og dragið hann síðan út.
Það er ekki erfitt að sjá út frá notkunaraðferðinni hvort um er að ræða munnkokks- eða nefkoksstrok, því sýnataka er tæknilegt verkefni sem er erfitt og mengað. Gæði sýnisins sem safnað er tengjast beint síðari greiningu. Ef veirumagnið í sýninu er lágt er auðvelt að valda fölskum neikvæðum niðurstöðum og erfitt að staðfesta greiningu.
Birtingartími: 21. júní 2020
