1. Tentang pembuatan tabung pengambilan sampel virus
Tabung pengambilan sampel virus termasuk dalam produk alat kesehatan. Sebagian besar produsen dalam negeri terdaftar sebagai produk kelas satu, dan hanya sedikit perusahaan yang terdaftar sebagai produk kelas dua. Baru-baru ini, untuk memenuhi kebutuhan darurat Wuhan dan tempat-tempat lain, banyak perusahaan telah menggunakan "jalur darurat" untuk mengajukan izin pendaftaran kelas satu. Tabung pengambilan sampel virus terdiri dari kapas pengambil sampel, larutan pengawet virus, dan kemasan luar. Karena tidak ada standar nasional atau standar industri yang seragam, produk dari berbagai produsen sangat bervariasi.
1. Kapas usap: Kapas usap bersentuhan langsung dengan lokasi pengambilan sampel, dan bahan kepala kapas usap sangat berkaitan dengan deteksi selanjutnya. Kepala kapas usap harus terbuat dari serat sintetis Poliester (PE) atau Rayon (serat buatan). Spons kalsium alginat atau kapas usap bertangkai kayu (termasuk bambu) tidak dapat digunakan, dan bahan kepala kapas usap tidak boleh berupa produk kapas. Karena serat kapas memiliki daya serap protein yang kuat, serat tersebut sulit larut ke dalam larutan penyimpanan selanjutnya; dan ketika tangkai kayu atau bambu yang mengandung kalsium alginat dan komponen kayu patah, perendaman dalam larutan penyimpanan juga akan menyerap protein, dan bahkan dapat menghambat reaksi PCR selanjutnya. Disarankan untuk menggunakan serat sintetis seperti serat PE, serat poliester, dan serat polipropilen untuk bahan kepala kapas usap. Serat alami seperti kapas tidak disarankan. Serat nilon juga tidak disarankan karena serat nilon (mirip dengan kepala sikat gigi) menyerap air dengan buruk, sehingga volume pengambilan sampel tidak mencukupi, yang memengaruhi tingkat deteksi. Spons kalsium alginat dilarang untuk bahan kapas usap! Gagang swab ada dua jenis: patah dan terintegrasi. Swab patah ditempatkan di dalam tabung penyimpanan setelah pengambilan sampel, dan tutup tabung dipatahkan setelah dipatahkan dari posisi dekat kepala pengambilan sampel; swab terintegrasi langsung memasukkan swab pengambilan sampel ke dalam tabung penyimpanan setelah pengambilan sampel, dan penutup tabung penyimpanan terintegrasi. Sejajarkan lubang kecil dengan bagian atas gagang dan kencangkan penutup tabung. Membandingkan kedua metode tersebut, yang terakhir relatif lebih aman. Ketika swab patah digunakan bersamaan dengan tabung penyimpanan berukuran lebih kecil, dapat menyebabkan percikan cairan di dalam tabung saat patah, dan perhatian penuh harus diberikan pada risiko kontaminasi yang disebabkan oleh penggunaan produk yang tidak tepat. Disarankan untuk menggunakan tabung ekstrusi polistirena (PS) berongga atau tabung cetakan injeksi polipropilena (PP) untuk bahan gagang swab. Apa pun bahan yang digunakan, aditif kalsium alginat tidak boleh ditambahkan; batang kayu atau batang bambu. Singkatnya, swab pengambilan sampel harus memastikan jumlah pengambilan sampel dan jumlah pelepasan, dan bahan yang dipilih tidak boleh mengandung zat yang memengaruhi pengujian selanjutnya.
2. Larutan pengawet virus: Ada dua jenis larutan pengawet virus yang banyak digunakan di pasaran, yaitu larutan pemeliharaan virus yang dimodifikasi berdasarkan media transport, dan larutan modifikasi untuk lisat ekstraksi asam nukleat.
Komponen utama dari larutan pengawet adalah media kultur dasar Eagle (MEM) atau garam seimbang Hank, yang ditambahkan dengan garam, asam amino, vitamin, glukosa, dan protein yang diperlukan untuk kelangsungan hidup virus. Larutan pengawet ini menggunakan garam natrium fenol merah sebagai indikator dan pelarut. Ketika nilai pH 6,6-8,0, larutan berwarna merah muda. Glukosa, L-glutamin, dan protein yang diperlukan ditambahkan ke dalam larutan pengawet. Protein diberikan dalam bentuk serum janin sapi atau albumin serum sapi, yang dapat menstabilkan cangkang protein virus. Karena larutan pengawet kaya akan nutrisi, hal ini kondusif untuk kelangsungan hidup virus tetapi juga bermanfaat bagi pertumbuhan bakteri. Jika larutan pengawet terkontaminasi bakteri, bakteri akan berkembang biak dalam jumlah besar. Karbon dioksida dalam metabolitnya akan menyebabkan pH larutan pengawet turun dari merah muda menjadi kuning. Oleh karena itu, sebagian besar produsen telah menambahkan bahan antibakteri ke dalam formulasi mereka. Agen antibakteri yang direkomendasikan adalah penisilin, streptomisin, gentamisin, dan polimiksin B. Natrium azida dan 2-metil tidak direkomendasikan. Inhibitor seperti 4-metil-4-isotiazolin-3-on (MCI) dan 5-kloro-2-metil-4-isotiazolin-3-on (CMCI) juga tidak direkomendasikan karena komponen-komponen ini berpengaruh pada reaksi PCR. Karena sampel yang disediakan oleh larutan pengawet ini pada dasarnya adalah virus hidup, keaslian sampel dapat dipertahankan semaksimal mungkin, dan dapat digunakan tidak hanya untuk ekstraksi dan deteksi asam nukleat virus, tetapi juga untuk kultivasi dan isolasi virus. Namun, perlu diperhatikan bahwa ketika digunakan untuk deteksi, ekstraksi dan pemurnian asam nukleat harus dilakukan setelah inaktivasi.
Jenis larutan pengawet lain yang disiapkan berdasarkan lisat ekstraksi asam nukleat, komponen utamanya adalah garam seimbang, agen pengkelat EDTA, garam guanidin (seperti guanidin isotiosianat, guanidin hidroklorida, dll.), surfaktan anionik (seperti natrium dodekana sulfat), surfaktan kationik (seperti tetradecyltrimethylammonium oksalat), fenol, 8-hidroksikuinolin, ditiotreitol (DTT), proteinase K, dan komponen lainnya. Larutan penyimpanan ini berfungsi untuk memecah virus secara langsung untuk melepaskan asam nukleat dan menghilangkan RNase. Jika hanya digunakan untuk RT-PCR, larutan ini lebih cocok, tetapi lisat dapat menonaktifkan virus. Jenis sampel ini tidak dapat digunakan untuk pemisahan kultur virus.
Agen pengkelat ion logam yang digunakan dalam larutan pengawet virus disarankan menggunakan garam EDTA (seperti dipotassium ethylenediaminetetraacetic acid, disodium ethylenediaminetetraacetic acid, dll.), dan tidak disarankan menggunakan heparin (seperti sodium heparin, lithium heparin), agar tidak memengaruhi deteksi PCR.
3. Tabung pengawet: Bahan tabung pengawet harus dipilih dengan cermat. Terdapat data yang menunjukkan bahwa polipropilen (Polipropilen) berkaitan dengan adsorpsi asam nukleat, terutama pada konsentrasi ion tegangan tinggi, polietilen (Polietilen) lebih disukai daripada polipropilen (Polipropilen) karena mudah menangkap DNA/RNA. Plastik polimer polietilen-propilen (Polialomer) dan beberapa wadah plastik polipropilen (Polipropilen) yang diproses secara khusus lebih cocok untuk penyimpanan DNA/RNA. Selain itu, ketika menggunakan kapas yang mudah patah, tabung penyimpanan sebaiknya dipilih dengan tinggi lebih dari 8 cm untuk mencegah isi tumpah dan terkontaminasi ketika kapas patah.
4. Air untuk larutan pengawet produksi: Air ultra murni yang digunakan untuk larutan pengawet produksi harus disaring melalui membran ultrafiltrasi dengan berat molekul 13.000 untuk memastikan penghilangan pengotor polimer dari sumber biologis, seperti RNase, DNase, dan endotoksin, dan pemurnian biasa atau air suling tidak disarankan.
2. Penggunaan tabung pengambilan sampel virus
Pengambilan sampel menggunakan tabung pengambilan sampel virus terutama dibagi menjadi pengambilan sampel orofaringeal dan pengambilan sampel nasofaringeal:
1. Pengambilan sampel orofaring: Pertama-tama tekan lidah dengan penekan lidah, kemudian masukkan ujung swab ke tenggorokan untuk menyeka tonsil faring bilateral dan dinding faring posterior, dan seka dinding faring posterior dengan tekanan ringan, hindari menyentuh bagian lidah.
2. Pengambilan sampel nasofaring: ukur jarak dari ujung hidung ke cuping telinga dengan kapas dan tandai dengan jari, masukkan kapas ke dalam rongga hidung searah vertikal hidung (wajah), kapas harus memanjang setidaknya setengah panjang cuping telinga hingga ujung hidung, biarkan kapas di dalam hidung selama 15-30 detik, putar perlahan 3-5 kali, dan tarik kapas keluar.
Dari metode penggunaannya, mudah dipahami apakah menggunakan swab orofaring maupun swab nasofaring; pengambilan sampel merupakan tugas teknis yang sulit dan berisiko terkontaminasi. Kualitas sampel yang dikumpulkan berhubungan langsung dengan deteksi selanjutnya. Jika sampel yang dikumpulkan memiliki viral load rendah, mudah menyebabkan hasil negatif palsu, dan sulit untuk memastikan diagnosis.
Waktu posting: 21 Juni 2020
