1. Tentang pembuatan tabung sampel virus
Tabung sampel virus termasuk dalam produk alat kesehatan. Sebagian besar produsen dalam negeri terdaftar sebagai produk kelas satu, dan hanya sedikit perusahaan yang terdaftar sebagai produk kelas dua. Baru-baru ini, untuk memenuhi kebutuhan darurat di Wuhan dan tempat-tempat lain, banyak perusahaan telah menggunakan "jalur darurat" untuk mengajukan izin pencatatan kelas satu. Tabung sampel virus terdiri dari kapas sampel, larutan pengawet virus, dan kemasan luar. Karena tidak ada standar nasional atau standar industri yang seragam, produk dari berbagai produsen sangat bervariasi.
1. Swab sampel: Swab sampel bersentuhan langsung dengan lokasi pengambilan sampel, dan bahan kepala pengambilan sampel sangat erat kaitannya dengan deteksi selanjutnya. Kepala swab sampel harus terbuat dari serat sintetis poliester (PE) atau rayon (serat buatan). Spons kalsium alginat atau swab batang kayu (termasuk batang bambu) tidak dapat digunakan, dan bahan kepala swab tidak boleh dari katun. Karena serat katun memiliki daya serap protein yang kuat, serat tersebut tidak mudah terelusi ke dalam larutan penyimpanan selanjutnya; dan ketika batang kayu atau batang bambu yang mengandung kalsium alginat dan komponen kayu patah, perendaman dalam larutan penyimpanan juga akan menyerap protein, dan bahkan dapat menghambat reaksi PCR selanjutnya. Disarankan untuk menggunakan serat sintetis seperti serat PE, serat poliester, dan serat polipropilena sebagai bahan kepala swab. Serat alami seperti katun tidak disarankan. Serat nilon juga tidak disarankan karena serat nilon (mirip kepala sikat gigi) menyerap air. Kualitasnya buruk, sehingga volume pengambilan sampel tidak mencukupi, sehingga memengaruhi tingkat deteksi. Spons kalsium alginat dilarang untuk bahan swab sampel! Gagang swab memiliki dua jenis: patah dan terpasang. Swab patah ditempatkan di tabung penyimpanan setelah pengambilan sampel, dan tutup tabung akan patah setelah patah dari posisi dekat kepala pengambilan sampel; swab terpasang langsung menempatkan swab sampel ke dalam tabung penyimpanan setelah pengambilan sampel, dan penutup tabung penyimpanan terpasang. Sejajarkan lubang kecil dengan bagian atas gagang dan kencangkan penutup tabung. Membandingkan kedua metode ini, yang terakhir relatif aman. Jika swab patah digunakan bersamaan dengan tabung penyimpanan berukuran lebih kecil, dapat menyebabkan cipratan cairan ke dalam tabung saat patah, dan harus diperhatikan sepenuhnya risiko kontaminasi yang disebabkan oleh penggunaan produk yang tidak tepat. Disarankan untuk menggunakan tabung ekstrusi polistirena (PS) berongga atau tabung lipatan injeksi polipropilena (PP) sebagai bahan gagang swab. Apa pun bahan yang digunakan, aditif kalsium alginat tidak dapat ditambahkan; batang kayu atau batang bambu. Singkatnya, swab sampel harus memastikan jumlah pengambilan sampel dan jumlah pelepasan, dan bahan yang dipilih tidak boleh mengandung zat yang memengaruhi pengujian selanjutnya.
2. Larutan pengawetan virus: Ada dua jenis larutan pengawetan virus yang banyak digunakan di pasaran, satu adalah larutan pemeliharaan virus yang dimodifikasi berdasarkan media pengangkutnya, dan yang lainnya adalah larutan yang dimodifikasi untuk lisat ekstraksi asam nukleat.
Komponen utama yang pertama adalah media kultur dasar Eagle (MEM) atau garam seimbang Hank, yang ditambahkan dengan garam, asam amino, vitamin, glukosa dan protein yang diperlukan untuk kelangsungan hidup virus. Larutan penyimpanan ini menggunakan garam natrium merah fenol sebagai indikator dan larutan. Ketika nilai pH 6,6-8,0, larutan berwarna merah muda. Glukosa, L-glutamin dan protein yang diperlukan ditambahkan ke larutan pengawet. Protein disediakan dalam bentuk serum sapi janin atau albumin serum sapi, yang dapat menstabilkan cangkang protein virus. Karena larutan pengawet kaya akan nutrisi, hal ini kondusif untuk kelangsungan hidup virus tetapi juga bermanfaat bagi pertumbuhan bakteri. Jika larutan pengawet terkontaminasi dengan bakteri, ia akan berkembang biak dalam jumlah besar. Karbon dioksida dalam metabolitnya akan menyebabkan pH larutan pengawet turun dari merah muda menjadi kuning. Oleh karena itu, sebagian besar produsen telah menambahkan bahan antibakteri ke dalam formulasi mereka. Agen antibakteri yang direkomendasikan adalah penisilin, streptomisin, gentamisin, dan polimiksin B. Natrium azida dan 2-metil inhibitor seperti 4-metil-4-isothiazolin-3-on (MCI) dan 5-kloro-2-metil-4-isothiazolin-3-on (CMCI) tidak direkomendasikan karena komponen-komponen ini memengaruhi reaksi PCR. Karena sampel yang dihasilkan oleh larutan pengawet ini pada dasarnya adalah virus hidup, keaslian sampel dapat dipertahankan semaksimal mungkin, dan dapat digunakan tidak hanya untuk ekstraksi dan deteksi asam nukleat virus, tetapi juga untuk budidaya dan isolasi virus. Namun, perlu dicatat bahwa ketika digunakan untuk deteksi, ekstraksi dan pemurnian asam nukleat harus dilakukan setelah inaktivasi.
Larutan pengawet lain yang dibuat berdasarkan lisat ekstraksi asam nukleat. Komponen utamanya adalah garam seimbang, agen pengkelat EDTA, garam guanidin (seperti guanidin isothiocyanate, guanidin hidroklorida, dll.), surfaktan anionik (seperti dodecane Sodium sulfate), surfaktan kationik (seperti tetradecyltrimethylammonium oxalate), fenol, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K, dan komponen lainnya. Larutan pengawet ini digunakan untuk membelah virus secara langsung, melepaskan asam nukleat, dan mengeliminasi RNase. Jika hanya digunakan untuk RT-PCR, larutan ini lebih cocok, tetapi lisat dapat menonaktifkan virus. Sampel seperti ini tidak dapat digunakan untuk pemisahan kultur virus.
Agen khelasi ion logam yang digunakan dalam larutan pengawet virus direkomendasikan untuk menggunakan garam EDTA (seperti asam dipotassium etilendiamintetraasetat, asam dinatrium etilendiamintetraasetat, dll.), dan tidak disarankan untuk menggunakan heparin (seperti natrium heparin, litium heparin), agar tidak mempengaruhi deteksi PCR.
3. Tabung pengawet: Bahan tabung pengawet harus dipilih dengan cermat. Terdapat data yang menunjukkan bahwa polipropilena (Polipropilena) berkaitan dengan adsorpsi asam nukleat, terutama pada konsentrasi ion tegangan tinggi. Polietilena (Polietilena) lebih disukai daripada polipropilena (Polipropilena). DNA/RNA mudah ditangkap. Plastik polimer polietilena-propilena (Poliallomer) dan beberapa wadah plastik polipropilena (Polipropilena) yang diproses secara khusus lebih cocok untuk penyimpanan DNA/RNA. Selain itu, saat menggunakan kapas penyeka yang mudah pecah, sebaiknya pilih wadah dengan tinggi lebih dari 8 cm untuk mencegah isi tabung terciprat dan terkontaminasi saat kapas penyeka pecah.
4. Air untuk larutan pengawet produksi: Air ultramurni yang digunakan untuk larutan pengawet produksi harus disaring melalui membran ultrafiltrasi dengan berat molekul 13.000 untuk memastikan penghilangan pengotor polimer dari sumber biologis, seperti RNase, DNase, dan endotoksin. Pemurnian biasa tidak disarankan. Air atau air suling.
2. Penggunaan tabung pengambilan sampel virus
Pengambilan sampel menggunakan tabung pengambilan sampel virus terutama dibagi menjadi pengambilan sampel orofaring dan pengambilan sampel nasofaring:
1. Pengambilan sampel orofaring: Pertama-tama tekan lidah dengan penekan lidah, kemudian arahkan kepala penyeka sampel ke tenggorokan untuk menyeka amandel faring bilateral dan dinding faring posterior, dan usap dinding faring posterior dengan kekuatan ringan, hindari menyentuh unit lidah.
2. Pengambilan sampel nasofaring: ukur jarak dari ujung hidung ke cuping telinga dengan kapas penyeka dan tandai dengan jari, masukkan kapas penyeka ke dalam rongga hidung searah hidung vertikal (wajah), kapas penyeka harus memanjang setidaknya setengah panjang cuping telinga ke ujung hidung, Biarkan kapas penyeka di hidung selama 15-30 detik, putar perlahan 3-5 kali, dan tarik kapas penyeka.
Tidak sulit untuk melihat dari metode penggunaannya, baik usap orofaring maupun usap nasofaring. Pengambilan sampel merupakan tugas teknis yang sulit dan terkontaminasi. Kualitas sampel yang dikumpulkan berkaitan langsung dengan deteksi selanjutnya. Jika sampel yang dikumpulkan memiliki viral load rendah, mudah menyebabkan hasil negatif palsu, sehingga sulit untuk memastikan diagnosis.
Waktu posting: 21-Jun-2020
