1. O proizvodnji epruveta za uzorkovanje virusa
Epruvete za uzorkovanje virusa pripadaju proizvodima medicinskih proizvoda. Većina domaćih proizvođača registrirana je prema proizvodima prve klase, a malo tvrtki registrirano je prema proizvodima druge klase. Nedavno su, kako bi zadovoljile hitne potrebe Wuhana i drugih mjesta, mnoge tvrtke poduzele „hitni kanal“ „Podnesite zahtjev za dozvolu za prvoklasnu evidenciju“. Epruveta za uzorkovanje virusa sastoji se od štapića za uzorkovanje, otopine za konzerviranje virusa i vanjskog pakiranja. Budući da ne postoji jedinstveni nacionalni standard ili industrijski standard, proizvodi različitih proizvođača uvelike se razlikuju.
1. Štapić za uzorkovanje: Štapić za uzorkovanje izravno dodiruje mjesto uzorkovanja, a materijal glave za uzorkovanje usko je povezan s naknadnom detekcijom. Glava štapića za uzorkovanje treba biti izrađena od sintetičkih vlakana od poliestera (PE) ili rajona (umjetnih vlakana). Ne mogu se koristiti spužva od kalcijevog alginata ili drveni štapići (uključujući bambusove štapiće), a materijal glave štapića ne smije biti pamučni proizvodi. Budući da pamučna vlakna imaju snažnu adsorpciju proteina, nije ih lako eluirati u otopinu za naknadno pohranjivanje; a kada se drveni štapić ili bambusov štapić koji sadrži kalcijev alginat i drvene komponente slomi, namakanje u otopini za pohranjivanje također će adsorbirati proteine, pa čak i može inhibirati naknadnu PCR reakciju. Preporučuje se korištenje sintetičkih vlakana poput PE vlakana, poliesterskih vlakana i polipropilenskih vlakana za materijal glave štapića. Prirodna vlakna poput pamuka se ne preporučuju. Najlonska vlakna se također ne preporučuju jer najlonska vlakna (slično glavama četkica za zube) loše upijaju vodu, što rezultira nedovoljnim volumenom uzorkovanja, što utječe na stopu detekcije. Spužva od kalcijevog alginata zabranjena je za uzorkovanje materijala štapića! Drška štapića ima dvije vrste: slomljena i ugrađena. Slomljeni štapić se nakon uzorkovanja stavlja u epruvetu za pohranu, a čep epruvete se lomi nakon što se slomi s položaja blizu glave za uzorkovanje; ugrađeni štapić izravno stavlja štapić za uzorkovanje u epruvetu za pohranu nakon uzorkovanja, a poklopac cijevi za pohranu se ugrađuje. Poravnajte malu rupu s vrhom ručke i zategnite poklopac epruvete. Uspoređujući dvije metode, potonja je relativno sigurna. Kada se slomljeni štapić koristi zajedno s manjom epruvetom za pohranu, može uzrokovati prskanje tekućine u epruveti kada se slomi, te treba obratiti punu pozornost na rizik od kontaminacije uzrokovane nepravilnom upotrebom proizvoda. Preporučuje se korištenje šuplje ekstrudirane polistirenske (PS) cijevi ili cijevi za injekcijsko nabiranje od polipropilena (PP) za materijal drške štapića. Bez obzira na materijal koji se koristi, ne smiju se dodavati aditivi kalcijevog alginata; drveni štapići ili bambusovi štapići. Ukratko, štapić za uzorkovanje trebao bi osigurati količinu uzorkovanja i količinu oslobađanja, a odabrani materijali ne smiju sadržavati tvari koje utječu na naknadno testiranje.
2. Otopina za očuvanje virusa: Na tržištu se široko koriste dvije vrste otopina za očuvanje virusa, jedna je otopina za održavanje virusa modificirana na temelju transportnog medija, a druga je modificirana otopina za ekstrakciju lizata nukleinskih kiselina.
Glavna komponenta prvog je Eagleov osnovni medij za kulturu (MEM) ili Hankova uravnotežena sol, kojoj se dodaju soli, aminokiseline, vitamini, glukoza i proteini potrebni za preživljavanje virusa. Ova otopina za pohranu koristi natrijevu sol fenol crvenog kao indikator i otopinu. Kada je pH vrijednost 6,6-8,0, otopina je ružičasta. Potrebna glukoza, L-glutamin i proteini dodaju se u otopinu za konzerviranje. Protein se osigurava u obliku fetalnog goveđeg seruma ili goveđeg serumskog albumina, koji može stabilizirati proteinsku ovojnicu virusa. Budući da je otopina za konzerviranje bogata hranjivim tvarima, pogodna je za preživljavanje virusa, ali i korisna za rast bakterija. Ako je otopina za konzerviranje kontaminirana bakterijama, one će se razmnožavati u velikim količinama. Ugljikov dioksid u njegovim metabolitima uzrokovat će pad pH vrijednosti otopine za konzerviranje iz ružičaste u žutu. Stoga je većina proizvođača svojim formulacijama dodala antibakterijske sastojke. Preporučena antibakterijska sredstva su penicilin, streptomicin, gentamicin i polimiksin B. Natrijev azid i 2-metil se ne preporučuju. Inhibitori poput 4-metil-4-izotiazolin-3-ona (MCI) i 5-kloro-2-metil-4-izotiazolin-3-ona (CMCI) jer te komponente utječu na PCR reakciju. Budući da je uzorak dobiven ovom otopinom za očuvanje u osnovi živi virus, originalnost uzorka može se u najvećoj mjeri sačuvati i može se koristiti ne samo za ekstrakciju i detekciju virusnih nukleinskih kiselina, već i za uzgoj i izolaciju virusa. Međutim, treba napomenuti da se prilikom detekcije ekstrakcija i pročišćavanje nukleinskih kiselina moraju provesti nakon inaktivacije.
Druga vrsta otopine za konzerviranje pripremljena je na bazi lizata za ekstrakciju nukleinskih kiselina, a glavne komponente su uravnotežene soli, EDTA kelatni agens, gvanidinska sol (kao što je gvanidin izotiocijanat, gvanidin hidroklorid itd.), anionski surfaktant (kao što je dodekan natrijev sulfat), kationski surfaktanti (kao što je tetradeciltrimetilamonijev oksalat), fenol, 8-hidroksikinolin, ditiotreitol (DTT), proteinaza K i druge komponente. Ova otopina za skladištenje služi za izravno cijepanje virusa kako bi se oslobodila nukleinska kiselina i eliminirala RNaza. Ako se koristi samo za RT-PCR, prikladnija je, ali lizat može inaktivirati virus. Ova vrsta uzorka ne može se koristiti za odvajanje virusne kulture.
Kao kelatni agens metalnih iona koji se koristi u otopini za očuvanje virusa preporučuje se korištenje EDTA soli (kao što su dikalijeva etilendiamintetraoctena kiselina, dinatrijeva etilendiamintetraoctena kiselina itd.), a ne preporučuje se korištenje heparina (kao što je natrijev heparin, litijev heparin) kako ne bi utjecao na PCR detekciju.
3. Epruveta za konzerviranje: Materijal epruvete za konzerviranje treba pažljivo odabrati. Postoje podaci koji upućuju na to da je polipropilen (polipropilen) povezan s adsorpcijom nukleinske kiseline, posebno pri visokoj koncentraciji iona, polietilen (polietilen) je poželjniji od polipropilena (polipropilena). DNK/RNA se lako hvata. Za pohranu DNK/RNA prikladnije su posude od polietilen-propilenskog polimera (polialomera) i neke posebno obrađene plastične posude od polipropilena (polipropilena). Osim toga, pri korištenju lomljivog štapića za vatu, treba odabrati posudu visine veće od 8 cm kako bi se spriječilo prskanje i kontaminacija sadržaja kada se štapić slomi.
4. Voda za otopinu za konzerviranje u proizvodnji: Ultračista voda koja se koristi za otopinu za konzerviranje u proizvodnji treba se filtrirati kroz ultrafiltracijsku membranu molekularne težine 13 000 kako bi se osiguralo uklanjanje polimernih nečistoća iz bioloških izvora, poput RNaze, DNaze i endotoksina, a obično pročišćavanje se ne preporučuje. Voda ili destilirana voda.
2. Korištenje epruveta za uzorkovanje virusa
Uzorkovanje pomoću epruvete za uzorkovanje virusa uglavnom se dijeli na orofaringealno i nazofaringealno uzorkovanje:
1. Uzimanje uzorka iz orofarinksa: Prvo pritisnite jezik depresorom za jezik, zatim produžite glavu štapića za uzorkovanje u grlo kako biste obrisali bilateralne faringealne tonzile i stražnju stijenku ždrijela te lagano obrišite stražnju stijenku ždrijela, izbjegavajući dodirivanje jezične jedinice.
2. Uzimanje uzorka iz nazofarinksa: štapićem izmjerite udaljenost od vrha nosa do ušne resice i označite prstom, umetnite štapić za uzimanje uzorka u nosnu šupljinu u smjeru okomitog nosa (lica), štapić treba dosezati barem polovicu duljine ušne resice do vrha nosa, ostavite štapić u nosu 15-30 sekundi, lagano rotirajte 3-5 puta i izvucite štapić.
Nije teško vidjeti iz načina upotrebe, bilo da se radi o orofaringealnom ili nazofaringealnom brisu, uzorkovanje je tehnički zadatak, koji je težak i kontaminiran. Kvaliteta prikupljenog uzorka izravno je povezana s naknadnim otkrivanjem. Ako prikupljeni uzorak ima nisko virusno opterećenje, lako je uzrokovati lažno negativne rezultate, teško je potvrditi dijagnozu.
Vrijeme objave: 21. lipnja 2020.
