वायरस सैंपलिंग ट्यूब पर कुछ विचार

1. वायरस के नमूने लेने वाली ट्यूबों के निर्माण के बारे में
वायरस सैंपलिंग ट्यूब चिकित्सा उपकरण श्रेणी में आते हैं। अधिकांश घरेलू निर्माता प्रथम श्रेणी के उत्पादों के रूप में पंजीकृत हैं, जबकि कुछ ही कंपनियां द्वितीय श्रेणी के उत्पादों के रूप में पंजीकृत हैं। हाल ही में, वुहान और अन्य स्थानों की आपातकालीन आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए, कई कंपनियों ने "आपातकालीन चैनल" के माध्यम से प्रथम श्रेणी के रिकॉर्ड की अनुमति के लिए आवेदन किया है। वायरस सैंपलिंग ट्यूब में एक सैंपलिंग स्वैब, वायरस संरक्षण घोल और बाहरी पैकेजिंग शामिल होती है। चूंकि कोई एकीकृत राष्ट्रीय मानक या उद्योग मानक नहीं है, इसलिए विभिन्न निर्माताओं के उत्पादों में काफी भिन्नता पाई जाती है।

1. नमूना लेने वाला स्वैब: नमूना लेने वाला स्वैब सीधे नमूना स्थल के संपर्क में आता है, और नमूना लेने वाले सिरे की सामग्री का बाद में होने वाली जांच से सीधा संबंध होता है। नमूना लेने वाले स्वैब का सिरा पॉलिएस्टर (PE) सिंथेटिक फाइबर या रेयॉन (मानव निर्मित फाइबर) से बना होना चाहिए। कैल्शियम एल्जिनेट स्पंज या लकड़ी की छड़ी (बांस की छड़ी सहित) का उपयोग नहीं किया जा सकता है, और स्वैब के सिरे की सामग्री कपास से बनी नहीं होनी चाहिए। क्योंकि कपास फाइबर प्रोटीन को बहुत अधिक सोख लेता है, इसलिए यह बाद में भंडारण घोल में आसानी से घुलता नहीं है; और जब कैल्शियम एल्जिनेट और लकड़ी के घटकों से युक्त लकड़ी या बांस की छड़ी टूट जाती है, तो भंडारण घोल में भीगने पर वह प्रोटीन को सोख लेती है, और यहां तक ​​कि बाद में होने वाली PCR प्रतिक्रिया को भी बाधित कर सकती है। स्वैब के सिरे की सामग्री के लिए PE फाइबर, पॉलिएस्टर फाइबर और पॉलीप्रोपाइलीन फाइबर जैसे सिंथेटिक फाइबर का उपयोग करने की सलाह दी जाती है। कपास जैसे प्राकृतिक फाइबर की सलाह नहीं दी जाती है। नायलॉन फाइबर की भी सलाह नहीं दी जाती है क्योंकि नायलॉन फाइबर (टूथब्रश के सिरे के समान) पानी को कम सोखते हैं, जिससे नमूना लेने की मात्रा अपर्याप्त हो जाती है और जांच दर प्रभावित होती है। कैल्शियम एल्जिनेट स्पंज का उपयोग स्वैब सामग्री के नमूने लेने के लिए वर्जित है! स्वैब हैंडल दो प्रकार के होते हैं: टूटा हुआ और अंतर्निर्मित। टूटे हुए स्वैब को नमूना लेने के बाद भंडारण ट्यूब में रखा जाता है, और नमूना लेने वाले सिरे के पास से तोड़कर ट्यूब का ढक्कन बंद कर दिया जाता है; अंतर्निर्मित स्वैब में नमूना लेने के बाद स्वैब को सीधे भंडारण ट्यूब में रखा जाता है, और भंडारण ट्यूब के ढक्कन के छोटे छेद को हैंडल के ऊपरी भाग से मिलाकर ढक्कन को कस दिया जाता है। दोनों विधियों की तुलना में, अंतर्निर्मित स्वैब अपेक्षाकृत सुरक्षित है। जब टूटे हुए स्वैब का उपयोग छोटे आकार की भंडारण ट्यूब के साथ किया जाता है, तो टूटने पर ट्यूब में तरल पदार्थ के छींटे पड़ सकते हैं, और उत्पाद के अनुचित उपयोग से होने वाले संदूषण के जोखिम पर पूरा ध्यान दिया जाना चाहिए। स्वैब हैंडल की सामग्री के लिए खोखले पॉलीस्टायरीन (पीएस) एक्सट्रूडेड ट्यूब या पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) इंजेक्शन क्रीजिंग ट्यूब का उपयोग करने की सलाह दी जाती है। चाहे कोई भी सामग्री उपयोग की जाए, कैल्शियम एल्जिनेट योजक नहीं मिलाए जा सकते; लकड़ी या बांस की छड़ें भी उपयुक्त नहीं हैं। संक्षेप में, नमूना लेने वाले स्वाब से नमूने की मात्रा और रिसाव की मात्रा सुनिश्चित होनी चाहिए, और चयनित सामग्रियों में ऐसे पदार्थ नहीं होने चाहिए जो बाद के परीक्षण को प्रभावित करें।

2. वायरस संरक्षण समाधान: बाजार में व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले वायरस संरक्षण समाधानों के दो प्रकार हैं, एक परिवहन माध्यम के आधार पर संशोधित वायरस रखरखाव समाधान है, और दूसरा न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण लाइसैट के लिए एक संशोधित समाधान है।
पहले प्रकार के घोल का मुख्य घटक ईगल्स बेसिक कल्चर मीडियम (एमईएम) या हैंक्स बैलेंस्ड सॉल्ट है, जिसमें वायरस के जीवित रहने के लिए आवश्यक लवण, अमीनो एसिड, विटामिन, ग्लूकोज और प्रोटीन मिलाए जाते हैं। इस भंडारण घोल में फिनोल रेड सोडियम सॉल्ट का उपयोग संकेतक के रूप में किया जाता है। जब pH मान 6.6-8.0 होता है, तो घोल गुलाबी रंग का होता है। संरक्षण घोल में आवश्यक ग्लूकोज, एल-ग्लूटामाइन और प्रोटीन मिलाए जाते हैं। प्रोटीन भ्रूण बोवाइन सीरम या बोवाइन सीरम एल्ब्यूमिन के रूप में प्रदान किया जाता है, जो वायरस के प्रोटीन आवरण को स्थिर कर सकता है। चूंकि संरक्षण घोल पोषक तत्वों से भरपूर होता है, इसलिए यह वायरस के जीवित रहने के लिए अनुकूल होता है, लेकिन बैक्टीरिया के विकास के लिए भी लाभकारी होता है। यदि संरक्षण घोल बैक्टीरिया से दूषित हो जाता है, तो वे बड़ी मात्रा में बढ़ेंगे। उनके मेटाबोलाइट्स में मौजूद कार्बन डाइऑक्साइड के कारण संरक्षण घोल का pH मान गुलाबी से पीला हो जाएगा। इसलिए, अधिकांश निर्माता अपने फॉर्मूलेशन में जीवाणुरोधी तत्व मिलाते हैं। अनुशंसित जीवाणुरोधी एजेंट पेनिसिलिन, स्ट्रेप्टोमाइसिन, जेंटामाइसिन और पॉलीमिक्सिन बी हैं। सोडियम एजाइड और 2-मिथाइल अवरोधक जैसे 4-मिथाइल-4-आइसोथियाज़ोलिन-3-वन (MCI) और 5-क्लोरो-2-मिथाइल-4-आइसोथियाज़ोलिन-3-वन (CMCI) अनुशंसित नहीं हैं क्योंकि ये घटक पीसीआर प्रतिक्रिया को प्रभावित करते हैं। चूंकि इस संरक्षण घोल द्वारा प्रदान किया गया नमूना मूल रूप से एक जीवित वायरस है, इसलिए नमूने की मौलिकता को अधिकतम सीमा तक बनाए रखा जा सकता है, और इसका उपयोग न केवल वायरस न्यूक्लिक एसिड के निष्कर्षण और पहचान के लिए किया जा सकता है, बल्कि वायरस के संवर्धन और पृथक्करण के लिए भी किया जा सकता है। हालांकि, यह ध्यान रखना चाहिए कि पहचान के लिए उपयोग किए जाने पर, निष्क्रियकरण के बाद न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण किया जाना चाहिए।
न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण लाइसैट पर आधारित एक अन्य प्रकार का संरक्षण विलयन, जिसके मुख्य घटक संतुलित लवण, EDTA चेलेटिंग एजेंट, गुआनिडीन लवण (जैसे गुआनिडीन आइसोथियोसाइनेट, गुआनिडीन हाइड्रोक्लोराइड आदि), एनायनिक सर्फेक्टेंट (जैसे डोडेकेन सोडियम सल्फेट), कैटायनिक सर्फेक्टेंट (जैसे टेट्राडेसिलट्राइमिथाइलअमोनियम ऑक्सालेट), फिनोल, 8-हाइड्रॉक्सीक्विनोलिन, डाइथियोथ्रिटोल (DTT), प्रोटीनएज़ K और अन्य घटक हैं। यह भंडारण विलयन वायरस को सीधे तोड़कर न्यूक्लिक एसिड मुक्त करता है और RNase को निष्क्रिय कर देता है। यदि इसका उपयोग केवल RT-PCR के लिए किया जाए, तो यह अधिक उपयुक्त है, लेकिन लाइसैट वायरस को निष्क्रिय कर सकता है। इस प्रकार के नमूने का उपयोग वायरस कल्चर पृथक्करण के लिए नहीं किया जा सकता है।

वायरस संरक्षण घोल में प्रयुक्त धातु आयन चेलेटिंग एजेंट के रूप में ईडीटीए लवणों (जैसे कि डाइपोटेशियम एथिलीनडायमाइनटेट्राएसिटिक एसिड, डिसोडियम एथिलीनडायमाइनटेट्राएसिटिक एसिड, आदि) का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है, और हेपरिन (जैसे कि सोडियम हेपरिन, लिथियम हेपरिन) का उपयोग करने की अनुशंसा नहीं की जाती है, ताकि पीसीआर पहचान प्रभावित न हो।
3. संरक्षण नली: संरक्षण नली की सामग्री का चयन सावधानीपूर्वक किया जाना चाहिए। कुछ आंकड़ों से पता चलता है कि पॉलीप्रोपाइलीन (पॉलीप्रोपाइलीन) न्यूक्लिक एसिड के अधिशोषण से संबंधित है, विशेष रूप से उच्च तनाव आयन सांद्रता पर। पॉलीइथाइलीन (पॉलीइथाइलीन) डीएनए/आरएनए को आसानी से ग्रहण करने के लिए पॉलीप्रोपाइलीन (पॉलीप्रोपाइलीन) से अधिक उपयुक्त है। पॉलीइथाइलीन-प्रोपाइलीन बहुलक (पॉलीएलोमर) प्लास्टिक और कुछ विशेष रूप से संसाधित पॉलीप्रोपाइलीन (पॉलीप्रोपाइलीन) प्लास्टिक कंटेनर डीएनए/आरएनए भंडारण के लिए अधिक उपयुक्त हैं। इसके अलावा, टूटने योग्य स्वाब का उपयोग करते समय, भंडारण नली की ऊंचाई 8 सेमी से अधिक होनी चाहिए ताकि स्वाब के टूटने पर सामग्री के छलकने और दूषित होने से बचा जा सके।

4. उत्पादन संरक्षण घोल के लिए जल: उत्पादन संरक्षण घोल में उपयोग किए जाने वाले अतिशुद्ध जल को 13,000 के आणविक भार वाली अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली से छानना चाहिए ताकि RNase, DNase और एंडोटॉक्सिन जैसे जैविक स्रोतों से प्राप्त बहुलक अशुद्धियों को हटाया जा सके। सामान्य शुद्धिकरण की अनुशंसा नहीं की जाती है। इसके लिए जल या आसुत जल का उपयोग किया जा सकता है।

2. वायरस के नमूने लेने वाली ट्यूबों का उपयोग

वायरस सैंपलिंग ट्यूब का उपयोग करके सैंपलिंग को मुख्य रूप से ऑरोफैरिंगियल सैंपलिंग और नेसोफैरिंगियल सैंपलिंग में विभाजित किया गया है:

1. मुखग्रसनी से नमूना लेना: सबसे पहले जीभ को जीभ दबाने वाले यंत्र से दबाएं, फिर नमूना लेने वाले स्वाब के सिरे को गले में डालकर दोनों तरफ के ग्रसनी टॉन्सिल और पीछे की ग्रसनी की दीवार को पोंछें, और पीछे की ग्रसनी की दीवार को हल्के बल से पोंछें, जीभ को छूने से बचें।

2. नासोफेरिंजियल सैंपलिंग: नाक की नोक से कान के निचले भाग तक की दूरी को एक रुई से मापें और उंगली से निशान लगाएँ। सैंपलिंग रुई को नाक की दिशा (चेहरे) में डालें। रुई कान के निचले भाग से नाक की नोक तक की आधी लंबाई तक पहुँचनी चाहिए। रुई को नाक में 15-30 सेकंड के लिए छोड़ दें, धीरे से 3-5 बार घुमाएँ और रुई को बाहर निकाल लें।
उपयोग विधि से यह स्पष्ट है कि चाहे वह मुख-गले का स्वाब हो या नासिका-गले का स्वाब, नमूना लेना एक तकनीकी प्रक्रिया है, जो कठिन और संदूषणकारी हो सकती है। एकत्रित नमूने की गुणवत्ता सीधे तौर पर आगे की जांच से संबंधित होती है। यदि एकत्रित नमूने में वायरल लोड कम है, तो इससे गलत नकारात्मक परिणाम आने की संभावना रहती है, जिससे निदान की पुष्टि करना मुश्किल हो जाता है।