1. Sobre a fabricación de tubos de mostraxe de virus
Os tubos de mostraxe de virus pertencen aos produtos de dispositivos médicos. A maioría dos fabricantes nacionais están rexistrados segundo os produtos de primeira clase e poucas empresas están rexistradas segundo os produtos de segunda clase. Recentemente, para satisfacer as necesidades de emerxencia de Wuhan e outros lugares, moitas empresas adoptaron a "canle de emerxencia" "Solicitar o permiso de rexistro de primeira clase". O tubo de mostraxe de virus está composto por un hisopo de mostraxe, unha solución de conservación de virus e unha embalaxe exterior. Dado que non existe unha norma nacional ou unha norma industrial unificada, os produtos dos distintos fabricantes varían moito.
1. Hisopo de mostraxe: O hisopo de mostraxe está en contacto directo co lugar de mostraxe e o material do cabezal de mostraxe está estreitamente relacionado coa detección posterior. O cabezal do hisopo de mostraxe debe estar feito de fibra sintética de poliéster (PE) ou raión (fibra artificial). Non se poden usar esponxas de alxinato de calcio nin hisopos de madeira (incluídos os paus de bambú), nin o material do cabezal do hisopo pode ser de algodón. Debido a que a fibra de algodón ten unha forte adsorción de proteínas, non é doado eluír na solución de almacenamento posterior; e cando un pau de madeira ou un pau de bambú que conteña alxinato de calcio e compoñentes de madeira está roto, mergullarse na solución de almacenamento tamén adsorberá proteínas e mesmo pode inhibir a reacción PCR posterior. Recoméndase usar fibras sintéticas como fibra de PE, fibra de poliéster e fibra de polipropileno para o material do cabezal do hisopo. Non se recomendan fibras naturais como o algodón. Tampouco se recomendan fibras de nailon porque as fibras de nailon (semellantes ás cabezas dos cepillos de dentes) absorben auga. Deficiente, o que resulta nun volume de mostraxe insuficiente, o que afecta á taxa de detección. A esponxa de alxinato de calcio está prohibida para o material do hisopo de mostraxe! O mango do hisopo ten dous tipos: roto e incorporado. O hisopo roto colócase no tubo de almacenamento despois da mostraxe e a tapa do tubo rómpese despois de romperse desde a posición preto do cabezal de mostraxe; o hisopo incorporado coloca directamente o hisopo de mostraxe no tubo de almacenamento despois da mostraxe e a tapa do tubo de almacenamento está integrada. Aliña o pequeno burato coa parte superior da asa e aperte a tapa do tubo. Comparando os dous métodos, o último é relativamente seguro. Cando o hisopo roto se usa xunto cun tubo de almacenamento de menor tamaño, pode causar salpicaduras de líquido no tubo cando se rompe e débese prestar moita atención ao risco de contaminación causado polo uso inadecuado do produto. Recoméndase usar tubo extruído de poliestireno oco (PS) ou tubo de pregamento por inxección de polipropileno (PP) para o material da asa do hisopo. Independentemente do material que se use, non se poden engadir aditivos de alxinato de calcio; paus de madeira ou paus de bambú. En resumo, o hisopo de mostraxe debe garantir a cantidade de mostraxe e a cantidade de liberación, e os materiais seleccionados non deben conter substancias que afecten as probas posteriores.
2. Solución de preservación de virus: existen dous tipos de solucións de preservación de virus amplamente utilizadas no mercado, unha é unha solución de mantemento de virus modificada en función do medio de transporte e a outra é unha solución modificada para o lisado de extracción de ácidos nucleicos.
O compoñente principal do primeiro é o medio de cultivo básico de Eagle (MEM) ou o sal equilibrado de Hank, ao que se lle engaden os sales, aminoácidos, vitaminas, glicosa e proteínas necesarios para a supervivencia do virus. Esta solución de almacenamento usa sal sódica vermella de fenol como indicador e solución. Cando o valor de pH é de 6,6-8,0, a solución é rosa. A glicosa, a L-glutamina e as proteínas necesarias engádense á solución de conservación. A proteína proporciónase en forma de soro fetal bovino ou albumina de soro bovino, que poden estabilizar a cuberta proteica do virus. Debido a que a solución de conservación é rica en nutrientes, favorece a supervivencia do virus pero tamén é beneficiosa para o crecemento das bacterias. Se a solución de conservación está contaminada con bacterias, multiplicarase en grandes cantidades. O dióxido de carbono dos seus metabolitos fará que o pH da solución de conservación caia de rosa a amarelo. Polo tanto, a maioría dos fabricantes engadiron ingredientes antibacterianos ás súas formulacións. Os axentes antibacterianos recomendados son a penicilina, a estreptomicina, a gentamicina e a polimixina B. Non se recomendan a azida sódica nin o 2-metilo. Inhibidores como a 4-metil-4-isotiazolin-3-ona (MCI) e a 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona (CMCI) porque estes compoñentes teñen un efecto na reacción de PCR. Dado que a mostra proporcionada por esta solución de conservación é basicamente un virus vivo, a orixinalidade da mostra pódese manter na maior medida posible e pódese usar non só para a extracción e detección de ácidos nucleicos de virus, senón tamén para o cultivo e illamento de virus. Non obstante, débese ter en conta que, cando se usa para a detección, a extracción e purificación de ácidos nucleicos debe realizarse despois da inactivación.
Outro tipo de solución de conservación preparada a base de lisado de extracción de ácidos nucleicos, os compoñentes principais son sales equilibradas, axente quelante EDTA, sal de guanidina (como isotiocianato de guanidina, clorhidrato de guanidina, etc.), surfactante aniónico (como dodecano sulfato de sodio), surfactantes catiónicos (como oxalato de tetradeciltrimetilamonio), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteinase K e outros compoñentes. Esta solución de almacenamento serve para clivar directamente o virus para liberar o ácido nucleico e eliminar a RNase. Se só se usa para RT-PCR, é máis axeitada, pero o lisado pode inactivar o virus. Este tipo de mostra non se pode usar para a separación de cultivos de virus.
Recoméndase o uso de sales de EDTA como axente quelante de ións metálicos na solución de preservación de virus (como ácido etilendiaminotetraacético dipotásico, ácido etilendiaminotetraacético disódico, etc.) e non se recomenda o uso de heparina (como heparina sódica ou heparina de litio) para non afectar á detección da PCR.
3. Tubo de conservación: O material do tubo de conservación debe seleccionarse coidadosamente. Hai datos que suxiren que o polipropileno (polipropileno) está relacionado coa adsorción de ácidos nucleicos, especialmente a altas concentracións de ións de tensión. Prefírese máis o polietileno (polietileno) que o polipropileno (polipropileno). ADN/ARN é doado de agarrar. Os plásticos de polímero de polietileno-propileno (polialómero) e algúns recipientes de plástico de polipropileno (polipropileno) especialmente procesados son máis axeitados para o almacenamento de ADN/ARN. Ademais, ao usar un hisopo fráxil, o tubo de almacenamento debe tentar seleccionar un recipiente cunha altura superior a 8 cm para evitar que o contido sexa salpicado e contaminado cando o hisopo se rompa.
4. Auga para a solución de conservación da produción: a auga ultrapura utilizada para a solución de conservación da produción debe filtrarse a través dunha membrana de ultrafiltración cun peso molecular de 13.000 para garantir a eliminación de impurezas poliméricas de fontes biolóxicas, como RNase, DNase e endotoxinas, e non se recomenda a purificación ordinaria. Auga ou auga destilada.
2. Uso de tubos de mostraxe de virus
A mostraxe mediante o tubo de mostraxe de virus divídese principalmente en mostraxe orofarínxea e mostraxe nasofarínxea:
1. Mostraxe orofarínxea: primeiro prema a lingua co abafador lingual, despois estenda a cabeza do hisopo de mostraxe cara á gorxa para limpar as amígdalas farínxeas bilaterais e a parede farínxea posterior, e limpe a parede farínxea posterior cunha forza lixeira, evitando tocar a unidade lingual.
2. Mostraxe nasofarínxea: mida a distancia desde a punta do nariz ata o lóbulo da orella cun hisopo e márqueo cun dedo, insira o hisopo de mostraxe na cavidade nasal na dirección do nariz vertical (cara), o hisopo debe estenderse polo menos a metade da lonxitude do lóbulo da orella ata a punta do nariz. Deixe o hisopo no nariz durante 15-30 segundos, xire suavemente 3-5 veces e retire o hisopo.
Non é difícil de ver polo método de uso, se se trata dun hisopo orofarínxeo ou nasofarínxeo, a mostraxe é unha tarefa técnica, que está contaminada e está difícil. A calidade da mostra recollida está directamente relacionada coa detección posterior. Se a mostra recollida ten unha carga viral baixa, é fácil causar falsos negativos, o que dificulta a confirmación do diagnóstico.
Data de publicación: 21 de xuño de 2020
