1. Tietoja virusnäytteenottoputkien valmistuksesta
Virusnäytteenottoputket kuuluvat lääkinnällisten laitteiden tuotteisiin. Useimmat kotimaiset valmistajat on rekisteröity ensiluokkaisiksi tuotteiksi, ja harvat yritykset on rekisteröity toisen luokan tuotteiksi. Viime aikoina monet yritykset ovat Wuhanin ja muiden paikkojen hätätilanteiden tarpeisiin turvautuneet hätäkanavaan "Hae ensiluokkaista rekisterilupaa". Virusnäytteenottoputki koostuu näytepuikosta, viruksen säilöntäliuoksesta ja ulkopakkauksesta. Koska yhtenäistä kansallista tai teollisuusstandardia ei ole, eri valmistajien tuotteet vaihtelevat suuresti.
1. Näytteenottotikku: Näytteenottotikku koskettaa suoraan näytteenottokohtaa, ja näytteenottopään materiaali on läheisesti yhteydessä myöhempään havaitsemiseen. Näytteenottotikun pään tulee olla valmistettu polyesterikuidusta (PE) tai tekokuidusta (rayon). Kalsiumalginaattisientä tai puutikkuja (mukaan lukien bambutikut) ei saa käyttää, eikä tikun pään materiaali saa olla puuvillaa. Koska puuvillakuitu imee proteiinia voimakkaasti, sitä ei ole helppo liuottaa säilytysliuokseen. Ja kun kalsiumalginaattia ja puuosia sisältävä puutikku tai bambutikku rikkoutuu, säilytysliuokseen liottaminen adsorboi myös proteiinia ja voi jopa estää myöhemmän PCR-reaktion. Tikun pään materiaalina on suositeltavaa käyttää synteettisiä kuituja, kuten PE-kuitua, polyesterikuitua ja polypropeenikuitua. Luonnonkuituja, kuten puuvillaa, ei suositella. Nailonkuitujakaan ei suositella, koska ne (samanlaiset kuin hammasharjan päät) imevät vettä. Ne ovat huonolaatuisia, mikä johtaa riittämättömään näytemäärään ja vaikuttaa havaitsemisasteeseen. Kalsiumalginaattisientä ei saa käyttää näytteenottotikun materiaalina! Tikun kahvoja on kahta tyyppiä: rikkinäisiä ja sisäänrakennettuja. Rikkoutunut tikku asetetaan näytteenoton jälkeen säilytysputkeen, ja putken korkki rikkotaan näytteenottopään läheltä. Näytteenottopuikko asettaa näytepuikon suoraan säilytysputkeen näytteenoton jälkeen, ja säilytysputken suojus on sisäänrakennettu. Kohdista pieni reikä kahvan yläosaan ja kiristä putken kansi. Näitä kahta menetelmää verrattaessa jälkimmäinen on suhteellisen turvallinen. Kun rikkoutunutta tikkua käytetään yhdessä pienemmän säilytysputken kanssa, se voi aiheuttaa nesteen roiskumista putkeen rikkoutuessaan, ja on kiinnitettävä erityistä huomiota tuotteen virheellisestä käytöstä johtuvaan kontaminaatioriskiin. Tikun kahvan materiaalina on suositeltavaa käyttää onttoa polystyreenistä (PS) valmistettua pursotettua putkea tai polypropeenista (PP) valmistettua ruiskupuristettua putkea. Käytetystä materiaalista riippumatta kalsiumalginaattilisäaineita ei saa lisätä; puutikkuja tai bambutikkuja. Lyhyesti sanottuna näytepuikon on varmistettava näytteenoton ja vapautumisen määrä, eikä valituissa materiaaleissa saa olla aineita, jotka vaikuttavat myöhempään testaukseen.
2. Viruksen säilytysliuos: Markkinoilla on laajalti käytössä kahdenlaisia virusten säilytysliuoksia: toinen on kuljetusväliaineen perusteella modifioitu viruksen ylläpitoliuos ja toinen on modifioitu liuos nukleiinihappojen uuttolysaatille.
Ensin mainitun pääkomponentti on Eaglen perusviljelyalusta (MEM) tai Hankin tasapainotettu suola, johon lisätään viruksen selviytymiseen tarvittavat suolat, aminohapot, vitamiinit, glukoosi ja proteiini. Tässä säilytysliuoksessa käytetään fenolipunaista natriumsuolaa indikaattorina ja liuoksena. Kun pH-arvo on 6,6–8,0, liuos on vaaleanpunainen. Tarvittava glukoosi, L-glutamiini ja proteiini lisätään säilöntäliuokseen. Proteiini on naudan sikiön seerumin tai naudan seerumialbumiinin muodossa, joka voi stabiloida viruksen proteiinikuoren. Koska säilöntäliuos on ravinteikas, se edistää viruksen selviytymistä, mutta myös bakteerien kasvua. Jos säilöntäliuos on bakteereilla saastunut, se lisääntyy suurin määrin. Sen metaboliiteissa oleva hiilidioksidi aiheuttaa säilöntäliuoksen pH:n laskun vaaleanpunaisesta keltaiseksi. Siksi useimmat valmistajat ovat lisänneet antibakteerisia ainesosia valmisteisiinsa. Suositeltavia antibakteerisia aineita ovat penisilliini, streptomysiini, gentamisiini ja polymyksiini B. Natriumatsidia ja 2-metyyliä ei suositella. Inhibiittorien, kuten 4-metyyli-4-isotiatsolin-3-onin (MCI) ja 5-kloori-2-metyyli-4-isotiatsolin-3-onin (CMCI), käyttöä ei suositella, koska näillä komponenteilla on vaikutusta PCR-reaktioon. Koska tämän säilöntäliuoksen tarjoama näyte on pohjimmiltaan elävä virus, näytteen alkuperäisyys säilyy mahdollisimman hyvin, ja sitä voidaan käyttää paitsi virusten nukleiinihappojen uuttamiseen ja havaitsemiseen myös virusten viljelyyn ja eristämiseen. On kuitenkin huomattava, että havaitsemiseen käytettäessä nukleiinihappojen uuttaminen ja puhdistaminen on suoritettava inaktivoinnin jälkeen.
Toinen säilöntäliuostyyppi, joka valmistetaan nukleiinihappojen uuttolysaatin perusteella, sisältää tasapainotettuja suoloja, EDTA-kelaatioainetta, guanidiinisuolaa (kuten guanidiini-isotiosyanaattia, guanidiinihydrokloridia jne.), anionisia pinta-aktiivisia aineita (kuten dodekaania, natriumsulfaattia), kationisia pinta-aktiivisia aineita (kuten tetradekyylitrimetyyliammoniumoksalaattia), fenolia, 8-hydroksikinoliinia, ditiotreitolia (DTT), proteinaasi K:ta ja muita komponentteja. Tämän säilytysliuoksen tarkoituksena on pilkkoa virus suoraan nukleiinihapon vapauttamiseksi ja RNaasin eliminoimiseksi. Se on sopivampi vain RT-PCR:ään, mutta lysaatti voi inaktivoida viruksen. Tällaista näytettä ei voida käyttää virusviljelmien erotteluun.
Viruksen säilytysliuoksessa käytettävän metalli-ionikelaattorin on suositeltavaa käyttää EDTA-suoloja (kuten dikaliumetyleenidiamiinitetraetikkahappoa, dinatriumetyleenidiamiinitetraetikkahappoa jne.), eikä hepariinin (kuten natriumhepariinin, litiumhepariinin) käyttöä suositella, jotta se ei vaikuttaisi PCR-detektioon.
3. Säilytysputki: Säilytysputken materiaali tulee valita huolellisesti. On olemassa tietoja, jotka viittaavat siihen, että polypropeeni (polypropeeni) liittyy nukleiinihappojen adsorptioon, erityisesti suurilla jännitysionipitoisuuksilla. Polyeteeni (polyeteeni) on edullisempi kuin polypropeeni (polypropeeni). DNA/RNA on helppo ottaa siitä kiinni. Polyeteeni-propeenipolymeeri (polyallomeeri) ja jotkut erityisesti käsitellyt polypropeeni (polypropeeni) -muovisäiliöt sopivat paremmin DNA:n/RNA:n säilytykseen. Lisäksi käytettäessä särkyvää tikkua, säilytysputken tulisi pyrkiä valitsemaan yli 8 cm korkea astia, jotta sisältö ei roisku ja kontaminoidu tikun rikkoutuessa.
4. Tuotannon säilöntäliuoksen vesi: Tuotannon säilöntäliuokseen käytetty ultrapuhdas vesi tulee suodattaa molekyylipainoltaan 13 000 olevan ultrasuodatuskalvon läpi biologisista lähteistä peräisin olevien polymeeriepäpuhtauksien, kuten RNaasin, DNaasin ja endotoksiinin, poistamiseksi. Tavanomaista puhdistusta ei suositella. Vesi tai tislattu vesi.
2. Virusnäytteenottoputkien käyttö
Näytteenotto virusnäytteenottoputkea käyttäen jaetaan pääasiassa suunielun kautta tapahtuvaan näytteenottoon ja nenänielun kautta tapahtuvaan näytteenottoon:
1. Nielun kautta tapahtuva näytteenotto: Paina ensin kieltä kielipainimella, työnnä sitten näytteenottikupin pää kurkkuun pyyhkiäksesi molemminpuoliset nielurisat ja nielun takaseinämän. Pyyhi nielun takaseinä kevyesti, välttäen kielen koskettamista.
2. Nenänielun näytteenotto: mittaa etäisyys nenän kärjestä korvalehteen tikulla ja merkitse se sormella. Työnnä näytetikku nenäonteloon pystysuoran nenän (kasvojen) suuntaan. Tikun tulee ulottua vähintään puoleenväliin korvalehden pituudesta nenän kärkeen. Anna tikun olla nenässä 15–30 sekuntia, pyöritä sitä varovasti 3–5 kertaa ja vedä tikku pois.
Käyttötavasta ei ole vaikea nähdä, olipa kyseessä sitten suunielun tai nenänielun näytteenotto, että näytteenotto on tekninen tehtävä, joka on vaikea ja saastunut. Kerätyn näytteen laatu liittyy suoraan myöhempään havaitsemiseen. Jos kerätyn näytteen viruskuorma on alhainen, se voi helposti aiheuttaa vääriä negatiivisia tuloksia ja vaikeuttaa diagnoosin vahvistamista.
Julkaisun aika: 21. kesäkuuta 2020
