1. Viiruse proovivõtutorude tootmise kohta
Viiruseproovivõtukatsutid kuuluvad meditsiiniseadmete hulka. Enamik kodumaiseid tootjaid on registreeritud esimese klassi toodetena ja vähesed ettevõtted on registreeritud teise klassi toodetena. Hiljuti on paljud ettevõtted Wuhani ja teiste kohtade hädaolukordade rahuldamiseks valinud „hädaolukorra kanali“ ja taotlenud esimese klassi registreerimisluba. Viiruseproovivõtukatsuti koosneb proovivõtutist, viiruse säilituslahusest ja välispakendist. Kuna puudub ühtne riiklik standard või tööstusstandard, on eri tootjate tooted väga erinevad.
1. Proovivõtutampoon: Proovivõtutampoon puutub otse kokku proovivõtukohaga ja proovivõtupea materjal on tihedalt seotud järgneva tuvastamisega. Proovivõtutampooni pea peaks olema valmistatud polüesterist (PE) sünteetilisest kiust või tehiskiust. Kasutada ei tohi kaltsiumalginaatkäsna ega puidust pulka (sh bambuskeppe) ning tampoonipea materjal ei tohi olla puuvillast. Kuna puuvillakiud imab valku tugevalt, ei ole seda kerge järgnevasse säilituslahusesse elueerida; ja kui kaltsiumalginaati ja puidust komponente sisaldav puidust pulk või bambuskepp puruneb, adsorbeerib säilituslahuses leotamine samuti valku ja võib isegi pärssida järgnevat PCR-reaktsiooni. Tampoonipea materjalina on soovitatav kasutada sünteetilisi kiude, näiteks PE-kiudu, polüesterkiudu ja polüpropüleenkiudu. Looduslikke kiude, näiteks puuvilla, ei ole soovitatav kasutada. Samuti ei ole soovitatav kasutada nailonkiude, kuna need (sarnased hambaharjapeadega) imavad vett. See on halb materjal, mille tulemuseks on ebapiisav proovimaht, mis mõjutab tuvastamise määra. Kaltsiumalginaatkäsna kasutamine proovivõtutampoonimaterjalina on keelatud! Tampooni käepidemeid on kahte tüüpi: katkised ja sisseehitatud käepidemed. Pärast proovivõttu asetatakse katkine tampoon hoiutorusse ja pärast proovivõtupea lähedalt katki minekut murtakse toru kork; sisseehitatud tampoon asetab proovivõttuti otse hoiutorusse pärast proovivõttu ja hoiutoru kate on sisse ehitatud. Joondage väike auk käepideme ülaosaga ja pingutage toru kaas. Võrreldes kahte meetodit on viimane suhteliselt ohutu. Kui katkine tampoon kasutatakse koos väiksema suurusega hoiutoruga, võib see purunemisel põhjustada vedeliku pritsimist torusse ning tuleb pöörata täielikku tähelepanu toote ebaõige kasutamise põhjustatud saastumisohtule. Tampooni käepideme materjalina on soovitatav kasutada õõnsat polüstüreenist (PS) ekstrudeeritud toru või polüpropüleenist (PP) sissepritsega volditud toru. Olenemata kasutatavast materjalist ei tohi lisada kaltsiumalginaadi lisandeid; puupulki ega bambuspulki. Lühidalt öeldes peaks proovivõttuti tagama proovivõtu ja vabaneva koguse ning valitud materjalid ei tohi sisaldada aineid, mis mõjutavad järgnevat testimist.
2. Viiruse säilitamise lahus: Turul on laialdaselt kasutusel kahte tüüpi viiruse säilitamise lahuseid: üks on transpordikeskkonna põhjal modifitseeritud viiruse säilitamise lahus ja teine on modifitseeritud lahus nukleiinhappe ekstraheerimiseks lüsaadiks.
Esimese peamine komponent on Eagle'i aluseline sööde (MEM) või Hanki tasakaalustatud sool, millele lisatakse viiruse ellujäämiseks vajalikud soolad, aminohapped, vitamiinid, glükoos ja valk. See säilituslahus kasutab indikaatorina ja lahusena fenoolpunast naatriumsoola. Kui pH väärtus on 6,6–8,0, on lahus roosa. Vajalik glükoos, L-glutamiin ja valk lisatakse säilituslahusele. Valk on veise loote seerumi või veise seerumi albumiini kujul, mis stabiliseerib viiruse valgukesta. Kuna säilituslahus on toitaineterikas, soodustab see viiruse ellujäämist, aga ka bakterite kasvu. Kui säilituslahus on bakteritega saastunud, paljuneb see suures koguses. Selle metaboliitides sisalduv süsinikdioksiid põhjustab säilituslahuse pH languse roosast kollaseks. Seetõttu on enamik tootjaid oma preparaatidele lisanud antibakteriaalseid koostisosi. Soovitatavad antibakteriaalsed ained on penitsilliin, streptomütsiin, gentamütsiin ja polümüksiin B. Naatriumasiidi ja 2-metüüli ei soovitata. Inhibiitorid, näiteks 4-metüül-4-isotiasoliin-3-oon (MCI) ja 5-kloro-2-metüül-4-isotiasoliin-3-oon (CMCI), ei ole soovitatavad, kuna need komponendid mõjutavad PCR-reaktsiooni. Kuna selle säilituslahusega pakutav proov on põhimõtteliselt elusviirus, saab proovi originaalsust maksimaalselt säilitada ning seda saab kasutada mitte ainult viirusnukleiinhapete ekstraheerimiseks ja tuvastamiseks, vaid ka viiruste kultiveerimiseks ja isoleerimiseks. Siiski tuleb märkida, et tuvastamiseks kasutamisel tuleb nukleiinhappe ekstraheerimine ja puhastamine läbi viia pärast inaktiveerimist.
Teist tüüpi säilituslahus, mis valmistatakse nukleiinhappe ekstraheerimise lüsaadi põhjal, sisaldab tasakaalustatud soole, EDTA kelaativat ainet, guanidiinisoola (näiteks guanidiini isotiotsüanaat, guanidiinvesinikkloriid jne), anioonseid pindaktiivseid aineid (näiteks dodekaannaatriumsulfaat), katioonseid pindaktiivseid aineid (näiteks tetradetsüültrimetüülammooniumoksalaat), fenooli, 8-hüdroksükinoliin, ditiotreitool (DTT), proteinaas K ja teisi komponente. See säilituslahus on mõeldud viiruse otseseks lõhustamiseks, et vabastada nukleiinhape ja elimineerida RNaasi. Ainult RT-PCR-i jaoks on see sobivam, kuid lüsaat võib viiruse inaktiveerida. Sellist proovi ei saa kasutada viiruskultuuride eraldamiseks.
Viiruse säilituslahuses kasutatava metalliioonide kelaativa agensina on soovitatav kasutada EDTA sooli (näiteks dikaaliumetüleendiamiintetraäädikhape, dinaatriumetüleendiamiintetraäädikhape jne) ja hepariini (näiteks naatriumhepariin, liitiumhepariin) kasutamine ei ole soovitatav, et mitte mõjutada PCR-detektsiooni.
3. Säilitustuub: Säilitustuubi materjal tuleks hoolikalt valida. On andmeid, mis viitavad sellele, et polüpropüleen (polüpropüleen) on seotud nukleiinhapete adsorptsiooniga, eriti kõrge pingega ioonide kontsentratsiooni korral. Polüetüleen (polüetüleen) on eelistatum kui polüpropüleen (polüpropüleen). DNA-d/RNA-d on kerge haarata. Polüetüleen-propüleenpolümeer (polüallomeer) plastik ja mõned spetsiaalselt töödeldud polüpropüleenist (polüpropüleenist) plastmahutid sobivad DNA/RNA säilitamiseks paremini. Lisaks tuleks puruneva tampooni kasutamisel valida säilitustuubiks anum, mille kõrgus on üle 8 cm, et vältida sisu pritsimist ja saastumist tampooni purunemisel.
4. Vesi tootmise säilitamise lahusele: Tootmise säilitamise lahusele kasutatav ülipuhas vesi tuleks filtreerida läbi ultrafiltreerimismembraani molekulmassiga 13 000, et tagada bioloogilistest allikatest pärinevate polümeersete lisandite, näiteks RNaasi, DNaasi ja endotoksiini eemaldamine, ning tavapärast puhastamist ei soovitata. Vesi või destilleeritud vesi.
2. Viiruse proovivõtukatsutite kasutamine
Viiruse proovivõtutoru abil proovide võtmine jaguneb peamiselt orofarüngeaalseks proovide võtmiseks ja nasofarüngeaalseks proovide võtmiseks:
1. Neeluproovi võtmine: esmalt vajutage keelele keelevajutajaga, seejärel sirutage proovivõtutiku pea kurku, et pühkida mõlemapoolseid neelumandleid ja neelu tagumist seina ning pühkige neelu tagumist seina kerge jõuga, vältides keele puudutamist.
2. Ninaneelu proovide võtmine: mõõtke tampooniga kaugus ninaotsast kõrvalestani ja märkige see sõrmega, sisestage proovivõtutikku ninaõõnde vertikaalse nina (näo) suunas, tampoon peaks ulatuma vähemalt poole kõrvalesta pikkusest ninaotsani. Jätke tampoon ninna 15–30 sekundiks, pöörake seda õrnalt 3–5 korda ja tõmmake tampoon välja.
Kasutusmeetodist pole raske aru saada, kas tegemist on orofarüngeaalse või nasofarüngeaalse tampooniga, proovi võtmine on tehniline ülesanne, mis on keeruline ja saastunud. Kogutud proovi kvaliteet on otseselt seotud järgneva avastamisega. Kui kogutud proovi viiruskoormus on madal, on vale-negatiivsete tulemuste teke lihtne ja diagnoosi on raske kinnitada.
Postituse aeg: 21. juuni 2020
