1. Sobre la fabricación de tubos de muestreo de virus
Los tubos de muestreo de virus pertenecen a productos sanitarios. La mayoría de los fabricantes nacionales están registrados como productos de primera clase, mientras que pocas empresas lo están como productos de segunda clase. Recientemente, para atender las necesidades de emergencia en Wuhan y otros lugares, muchas empresas han optado por la vía de emergencia: solicitar el permiso de registro de primera clase. El tubo de muestreo de virus se compone de un hisopo, una solución de conservación de virus y un embalaje exterior. Dado que no existe una norma nacional unificada ni una norma industrial, los productos de los distintos fabricantes varían considerablemente.
1. Hisopo de muestreo: El hisopo de muestreo entra en contacto directo con el sitio de muestreo, y el material del cabezal de muestreo está estrechamente relacionado con la detección posterior. El cabezal del hisopo de muestreo debe estar hecho de fibra sintética de poliéster (PE) o rayón (fibra sintética). No se pueden utilizar esponjas de alginato de calcio ni hisopos de madera (incluidos los de bambú), y el material del cabezal del hisopo no puede ser algodón. Debido a que la fibra de algodón tiene una fuerte adsorción de proteínas, no es fácil de eluir en la solución de almacenamiento posterior; y cuando se rompe un palo de madera o de bambú que contiene alginato de calcio y componentes de madera, sumergirlo en la solución de almacenamiento también adsorberá proteínas e incluso puede inhibir la reacción de PCR posterior. Se recomienda utilizar fibras sintéticas como fibra de PE, fibra de poliéster y fibra de polipropileno para el material del cabezal del hisopo. No se recomiendan fibras naturales como el algodón. Tampoco se recomiendan las fibras de nailon porque las fibras de nailon (similares a los cabezales de los cepillos de dientes) absorben agua. Mala calidad, lo que resulta en un volumen de muestreo insuficiente, lo que afecta la tasa de detección. ¡La esponja de alginato de calcio está prohibida para el material de muestreo del hisopo! El mango del hisopo tiene dos tipos: roto e incorporado. El hisopo roto se coloca en el tubo de almacenamiento después del muestreo, y la tapa del tubo se rompe después de romperse desde la posición cercana al cabezal de muestreo; el hisopo incorporado coloca directamente el hisopo de muestreo en el tubo de almacenamiento después del muestreo, y la tapa del tubo de almacenamiento está incorporada. Alinee el pequeño orificio con la parte superior del mango y apriete la tapa del tubo. Comparando los dos métodos, el último es relativamente seguro. Cuando el hisopo roto se usa junto con un tubo de almacenamiento de tamaño más pequeño, puede causar salpicaduras de líquido en el tubo al romperse, y se debe prestar mucha atención al riesgo de contaminación causado por el uso inadecuado del producto. Se recomienda utilizar un tubo hueco extruido de poliestireno (PS) o un tubo de polipropileno (PP) de inyección para el material del mango del hisopo. Independientemente del material utilizado, no se pueden agregar aditivos de alginato de calcio; Palitos de madera o de bambú. En resumen, el hisopo de muestreo debe garantizar la cantidad de muestra y la cantidad de liberación, y los materiales seleccionados no deben contener sustancias que afecten las pruebas posteriores.
2. Solución de conservación de virus: Existen dos tipos de soluciones de conservación de virus ampliamente utilizadas en el mercado: una es una solución de mantenimiento de virus modificada según el medio de transporte y la otra es una solución modificada para el lisado de extracción de ácidos nucleicos.
El componente principal del primero es el medio de cultivo básico de Eagle (MEM) o la sal balanceada de Hank, que se agrega con las sales, aminoácidos, vitaminas, glucosa y proteínas necesarias para la supervivencia del virus. Esta solución de almacenamiento utiliza sal sódica de rojo fenol como indicador y solución. Cuando el valor de pH es de 6,6 a 8,0, la solución es rosa. La glucosa, L-glutamina y proteína necesarias se agregan a la solución de conservación. La proteína se proporciona en forma de suero bovino fetal o albúmina de suero bovino, que puede estabilizar la cubierta proteica del virus. Debido a que la solución de conservación es rica en nutrientes, es propicia para la supervivencia del virus pero también beneficiosa para el crecimiento de bacterias. Si la solución de conservación está contaminada con bacterias, se multiplicará en grandes cantidades. El dióxido de carbono en sus metabolitos hará que el pH de la solución de conservación caiga de rosa a amarillo. Por lo tanto, la mayoría de los fabricantes han agregado ingredientes antibacterianos a sus formulaciones. Los agentes antibacterianos recomendados son penicilina, estreptomicina, gentamicina y polimixina B. No se recomiendan la azida sódica ni el 2-metil inhibidores como la 4-metil-4-isotiazolin-3-ona (MCI) ni la 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona (CMCI), ya que estos componentes afectan la reacción de PCR. Dado que la muestra proporcionada por esta solución de conservación es básicamente un virus vivo, se puede conservar al máximo su originalidad, y puede utilizarse no solo para la extracción y detección de ácidos nucleicos virales, sino también para el cultivo y aislamiento de virus. Sin embargo, es importante tener en cuenta que, cuando se utiliza para la detección, la extracción y purificación de ácidos nucleicos debe realizarse después de la inactivación.
Otro tipo de solución de conservación preparada a partir del lisado de extracción de ácidos nucleicos, los componentes principales son sales equilibradas, agente quelante EDTA, sal de guanidina (como isotiocianato de guanidina, clorhidrato de guanidina, etc.), surfactante aniónico (como dodecano sulfato de sodio), surfactantes catiónicos (como oxalato de tetradeciltrimetilamonio), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteinasa K y otros componentes. Esta solución de conservación es para escindir directamente el virus para liberar el ácido nucleico y eliminar la ARNasa. Si solo se utiliza para RT-PCR, es más adecuada, pero el lisado puede inactivar el virus. Este tipo de muestra no se puede utilizar para la separación de cultivos virales.
Se recomienda utilizar sales de EDTA como agente quelante de iones metálicos en la solución de conservación del virus (como ácido etilendiaminotetraacético dipotásico, ácido etilendiaminotetraacético disódico, etc.) y no se recomienda utilizar heparina (como heparina sódica, heparina de litio), para no afectar la detección por PCR.
3. Tubo de conservación: El material del tubo de conservación debe seleccionarse con cuidado. Hay datos que sugieren que el polipropileno (polipropileno) está relacionado con la adsorción de ácidos nucleicos, especialmente a altas concentraciones de iones de tensión. El polietileno (polietileno) es más preferible que el polipropileno (polipropileno). Facilita la manipulación del ADN/ARN. Los recipientes de plástico de polímero de polietileno-propileno (polialómero) y algunos recipientes de plástico de polipropileno (polipropileno) con procesamiento especial son más adecuados para el almacenamiento de ADN/ARN. Además, al utilizar un hisopo frágil, el tubo de conservación debe tener una altura superior a 8 cm para evitar salpicaduras y contaminación del contenido al romperse el hisopo.
4. Agua para la solución de conservación de la producción: El agua ultrapura utilizada para la solución de conservación de la producción debe filtrarse a través de una membrana de ultrafiltración con un peso molecular de 13 000 para garantizar la eliminación de impurezas poliméricas de origen biológico, como ARNasa, ADNasa y endotoxinas. No se recomienda la purificación convencional. Agua o agua destilada.
2. Uso de tubos de muestreo de virus
El muestreo mediante el tubo de muestreo de virus se divide principalmente en muestreo orofaríngeo y muestreo nasofaríngeo:
1. Muestreo orofaríngeo: Primero presione la lengua con el depresor lingual, luego extienda la cabeza del hisopo de muestreo hacia la garganta para limpiar las amígdalas faríngeas bilaterales y la pared faríngea posterior, y limpie la pared faríngea posterior con una fuerza ligera, evitando tocar la unidad de la lengua.
2. Muestreo nasofaríngeo: mida la distancia desde la punta de la nariz hasta el lóbulo de la oreja con un hisopo y marque con un dedo, inserte el hisopo de muestreo en la cavidad nasal en dirección a la nariz vertical (cara), el hisopo debe extenderse al menos la mitad de la longitud del lóbulo de la oreja hasta la punta de la nariz, deje el hisopo en la nariz durante 15 a 30 segundos, gire suavemente de 3 a 5 veces y retire el hisopo.
El método de uso permite observar fácilmente, ya sea un hisopado orofaríngeo o nasofaríngeo, que la toma de muestras es una tarea técnica, compleja y contaminante. La calidad de la muestra recolectada está directamente relacionada con la detección posterior. Si la muestra recolectada presenta una carga viral baja, es fácil generar falsos negativos y dificulta la confirmación del diagnóstico.
Hora de publicación: 21 de junio de 2020
