1. Pri la fabrikado de virusaj specimenaj tuboj
Tuboj por virusa specimenigo apartenas al la produktoj de medicinaj aparatoj. Plej multaj hejmaj fabrikantoj estas registritaj laŭ la unuaklasaj produktoj, kaj malmultaj kompanioj estas registritaj laŭ la duaklasaj produktoj. Lastatempe, por plenumi la krizajn bezonojn de Vuhano kaj aliaj lokoj, multaj kompanioj elektis la "krizkanalon" "Petu la unuaklasan registran permeson". La tubo por virusa specimenigo konsistas el specimenvasto, viruskonserva solvaĵo kaj ekstera pakaĵo. Ĉar ne ekzistas unuigita nacia normo aŭ industria normo, la produktoj de diversaj fabrikantoj multe varias.
1. Specimenŝvabo: La specimenŝvabo rekte kontaktas la specimenlokon, kaj la materialo de la specimenkapo estas proksime rilata al la posta detekto. La specimenŝvaba kapo estu farita el sinteza fibro de poliestero (PE) aŭ rajono (artefarita fibro). Kalcia alginata spongo aŭ lignaj ŝvaboj (inkluzive de bambuaj bastonoj) ne povas esti uzataj, kaj la materialo de la ŝvaba kapo ne povas esti kotona. Ĉar kotona fibro havas fortan adsorbadon de proteino, ne facile eluiĝas en la postan stokan solvaĵon; kaj kiam ligna bastono aŭ bambua bastono enhavanta kalcian alginaton kaj lignajn komponantojn estas rompita, trempado en la stokan solvaĵon ankaŭ adsorbos proteinon, kaj eĉ povas inhibicii la postan PCR-reagon. Estas rekomendinde uzi sintezajn fibrojn kiel PE-fibro, poliestera fibro kaj polipropilena fibro por la materialo de la ŝvaba kapo. Naturaj fibroj kiel kotono ne estas rekomendindaj. Nilonaj fibroj ankaŭ ne estas rekomendindaj, ĉar nilonaj fibroj (similaj al dentobrosaj kapoj) absorbas akvon. Malbona, rezultanta en nesufiĉa specimenvolumeno, influante la detektoftecon. Kalcia alginata spongo estas malpermesita por specimenaj ŝvabaj materialoj! Ŝvaba tenilo havas du tipojn: rompita kaj enkonstruita. La rompita vatbulo estas metata en la stokan tubon post la specimenigo, kaj la tubĉapo estas rompita post rompiĝo de la pozicio proksime al la specimeniga kapo; la enkonstruita vatbulo metas la specimenigan vatbulon rekte en la stokan tubon post la specimenigo, kaj la stokan tubon kovrilo estas enkonstruita. Vicigu la malgrandan truon kun la supro de la tenilo kaj streĉu la tubkovrilon. Komparante la du metodojn, ĉi-lasta estas relative sekura. Kiam la rompita vatbulo estas uzata kune kun pli malgranda stoka tubo, ĝi povas kaŭzi likvan ŝprucadon en la tubon kiam rompita, kaj oni devas plene atenti la riskon de poluado kaŭzita de neĝusta uzo de la produkto. Estas rekomendinde uzi kavan polistirenan (PS) eltruditan tubon aŭ polipropilenan (PP) injektan sulkiĝantan tubon por la materialo de la vatbulo-tenilo. Sendepende de la uzata materialo, kalciaj alginataj aldonaĵoj ne povas esti aldonitaj; lignaj bastonetoj aŭ bambuaj bastonetoj. Mallonge, la specimeniga vatbulo devas certigi la kvanton da specimenigo kaj la kvanton da liberigo, kaj la elektitaj materialoj ne devas enhavi substancojn, kiuj influas postan testadon.
2. Solvaĵo por viruskonservado: Ekzistas du specoj de solvoj por viruskonservado vaste uzataj sur la merkato, unu estas solvaĵo por viruskonservado modifita laŭ la transportmedio, kaj la alia estas modifita solvaĵo por lizato por ekstrakto de nukleaacidoj.
La ĉefa komponanto de la unua estas la baza kulturmedio de Eagle (MEM) aŭ la ekvilibra salo de Hank, al kiu oni aldonas la salojn, aminoacidojn, vitaminojn, glukozon kaj proteinon necesajn por la supervivo de la viruso. Ĉi tiu stoka solvaĵo uzas fenolan ruĝan natrian salon kiel indikilon kaj solvaĵon. Kiam la pH-valoro estas 6,6-8,0, la solvaĵo estas rozkolora. La necesa glukozo, L-glutamino kaj proteino estas aldonitaj al la konserva solvaĵo. La proteino estas provizita en la formo de feta bova serumo aŭ bova seruma albumino, kiu povas stabiligi la proteinan ŝelon de la viruso. Ĉar la konserva solvaĵo estas riĉa je nutraĵoj, ĝi favoras la supervivon de la viruso sed ankaŭ utilas al la kresko de bakterioj. Se la konserva solvaĵo estas poluita per bakterioj, ĝi multiĝos en grandaj kvantoj. La karbondioksido en ĝiaj metabolitoj kaŭzos, ke la pH de la konserva solvaĵo falos de rozkolora al flava. Tial, plej multaj fabrikantoj aldonis antibakteriajn ingrediencojn al siaj formuloj. La rekomenditaj kontraŭbakteriaj agentoj estas penicilino, streptomicino, gentamicino kaj polimiksino B. Natria azido kaj 2-metilo ne estas rekomenditaj. Inhibiciiloj kiel 4-metil-4-izotiazolin-3-ono (MCI) kaj 5-kloro-2-metil-4-izotiazolin-3-ono (CMCI) ne estas rekomenditaj, ĉar ĉi tiuj komponantoj efikas sur la PCR-reakcion. Ĉar la specimeno provizita per ĉi tiu konserva solvaĵo estas esence viva viruso, la originaleco de la specimeno povas esti plej bone konservita, kaj ĝi povas esti uzata ne nur por la ekstraktado kaj detekto de virusaj nukleaj acidoj, sed ankaŭ por la kultivado kaj izolado de virusoj. Tamen, oni notu, ke kiam uzata por detekto, nukleaacida ekstraktado kaj purigo devas esti faritaj post inaktivigo.
Alia speco de konserva solvaĵo preparita surbaze de nukleaacida ekstrakta lizato, la ĉefaj komponantoj estas ekvilibraj saloj, EDTA-kelatiga agento, guanidina salo (kiel guanidina izotiocianato, guanidina hidroklorido, ktp.), anjona surfaktanto (kiel dodekana natria sulfato), katjonaj surfaktantaĵoj (kiel tetradeciltrimetilamonia oksalato), fenolo, 8-hidroksikinolino, ditiotreitolo (DTT), proteinazo K kaj aliaj komponantoj. Ĉi tiu konserva solvaĵo celas rekte fendi la viruson por liberigi la nuklean acidon kaj elimini la RNazon. Se uzata nur por RT-PCR, ĝi estas pli taŭga, sed la lizato povas inaktivigi la viruson. Ĉi tiu speco de specimeno ne povas esti uzata por viruskultura apartigo.
La metaljona kelatiga agento uzata en la viruskonserva solvaĵo estas rekomendinda por uzi EDTA-salojn (kiel ekzemple dikalia etilendiaminotetraacetata acido, dinatria etilendiaminotetraacetata acido, ktp.), kaj ne estas rekomendinde uzi heparinon (kiel ekzemple natria heparino, litia heparino), por ne influi PCR-detekton.
3. Konserva tubo: La materialo de la konserva tubo estu elektita zorge. Ekzistas datumoj, kiuj sugestas, ke polipropileno (Polipropileno) rilatas al la adsorbado de nukleaj acidoj, precipe ĉe altaj streĉaj jonaj koncentriĝoj. Polietileno (Polietileno) estas pli preferata ol polipropileno (Polipropileno). Facile prenebla DNA/RNA. Polietilen-propilena polimera (Polialomera) plasto kaj iuj speciale prilaboritaj polipropilenaj (Polipropilenaj) plastaj ujoj estas pli taŭgaj por DNA/RNA-konservado. Krome, kiam oni uzas rompeblan vatbulon, oni provu elekti ujon kun alteco pli granda ol 8 cm por malhelpi, ke la enhavo estu ŝprucita kaj poluita kiam la vatbulo rompiĝas.
4. Akvo por produktada konserva solvaĵo: La ultrapura akvo uzata por produktada konserva solvaĵo estu filtrita tra ultrafiltra membrano kun molekula pezo de 13 000 por certigi la forigon de polimeraj malpuraĵoj el biologiaj fontoj, kiel ekzemple RNase, DNase kaj endotoksino, kaj ordinara purigado ne estas rekomendinda. Akvo aŭ distilita akvo.
2. Uzo de virusaj specimenaj tuboj
Specimenigo uzante la virusan specimenan tubon estas ĉefe dividita en orofaringan specimenigon kaj nazofaringan specimenigon:
1. Orofaringa specimenigo: Unue premu la langon per la langosubpremilo, poste etendu la kapon de la specimeniga vatbulo en la gorĝon por viŝi la duflankajn faringajn tonsilojn kaj malantaŭan faringan muron, kaj viŝu la malantaŭan faringan muron per malpeza forto, evitante tuŝi la langon.
2. Nazofaringa specimenigo: mezuru la distancon de la nazpinto ĝis la orellobo per vatbulo kaj marku per fingro, enigu la specimenan vatbulon en la nazkavernon en la direkto de la vertikala nazo (vizaĝo), la vatbulo devas etendiĝi almenaŭ duonon de la longo de la orellobo ĝis la nazpinto. Lasu la vatbulon en la nazo dum 15-30 sekundoj, milde turnu 3-5 fojojn, kaj retiru la vatbulon.
Ne estas malfacile vidi el la uzmetodo, ĉu temas pri orofaringa aŭ nazofaringa vatbulo, specimenigo estas teknika tasko, kiu estas malfacila kaj poluita. La kvalito de la kolektita specimeno estas rekte rilata al la posta detekto. Se la kolektita specimeno havas malaltan virusŝarĝon, facile povas kaŭzi falsajn negativojn, malfacile estas konfirmi la diagnozon.
Afiŝtempo: 21-a de junio 2020
