1. Σχετικά με την κατασκευή σωλήνων δειγματοληψίας ιών
Οι σωλήνες δειγματοληψίας ιών ανήκουν σε προϊόντα ιατροτεχνολογικών προϊόντων. Οι περισσότεροι εγχώριοι κατασκευαστές είναι εγγεγραμμένοι ως προϊόντα πρώτης κατηγορίας και λίγες εταιρείες είναι εγγεγραμμένες ως προϊόντα δεύτερης κατηγορίας. Πρόσφατα, προκειμένου να καλύψουν τις ανάγκες έκτακτης ανάγκης της Γουχάν και άλλων περιοχών, πολλές εταιρείες έχουν επιλέξει το "κανάλι έκτακτης ανάγκης" "Υποβάλετε αίτηση για άδεια καταγραφής πρώτης κατηγορίας". Ο σωλήνας δειγματοληψίας ιών αποτελείται από ένα στυλεό δειγματοληψίας, διάλυμα συντήρησης ιών και εξωτερική συσκευασία. Δεδομένου ότι δεν υπάρχει ενιαίο εθνικό πρότυπο ή βιομηχανικό πρότυπο, τα προϊόντα διαφόρων κατασκευαστών ποικίλλουν σημαντικά.
1. Στυλεός δειγματοληψίας: Ο στυλεός δειγματοληψίας έρχεται σε άμεση επαφή με το σημείο δειγματοληψίας και το υλικό της κεφαλής δειγματοληψίας σχετίζεται στενά με την επακόλουθη ανίχνευση. Η κεφαλή του στυλεού δειγματοληψίας πρέπει να είναι κατασκευασμένη από συνθετικές ίνες πολυεστέρα (PE) ή από ρεγιόν (τεχνητές ίνες). Δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν σφουγγάρια αλγινικού ασβεστίου ή ξύλινες μπατονέτες (συμπεριλαμβανομένων των μπαμπού) και το υλικό της κεφαλής του στυλεού δεν μπορεί να είναι προϊόντα βαμβακιού. Επειδή οι ίνες βαμβακιού έχουν ισχυρή προσρόφηση πρωτεΐνης, δεν είναι εύκολο να εκλουστούν στο επόμενο διάλυμα αποθήκευσης. Και όταν μια ξύλινη μπατονέτα ή μπαμπού που περιέχει αλγινικό ασβέστιο και ξύλινα εξαρτήματα σπάσει, η εμβάπτιση στο διάλυμα αποθήκευσης θα προσροφήσει επίσης πρωτεΐνη, ακόμη και μπορεί να αναστείλει την επακόλουθη αντίδραση PCR. Συνιστάται η χρήση συνθετικών ινών όπως ίνες PE, ίνες πολυεστέρα και ίνες πολυπροπυλενίου για το υλικό της κεφαλής του στυλεού. Δεν συνιστώνται φυσικές ίνες όπως το βαμβάκι. Επίσης, δεν συνιστώνται ίνες νάιλον επειδή οι ίνες νάιλον (παρόμοιες με τις κεφαλές οδοντόβουρτσας) απορροφούν νερό. Κακή ποιότητα, με αποτέλεσμα ανεπαρκή όγκο δειγματοληψίας, επηρεάζοντας το ποσοστό ανίχνευσης. Το σφουγγάρι αλγινικού ασβεστίου απαγορεύεται για τη δειγματοληψία υλικού στυλεού! Η λαβή του στυλεού έχει δύο τύπους: σπασμένη και ενσωματωμένη. Το σπασμένο στυλεό τοποθετείται στον σωλήνα αποθήκευσης μετά τη δειγματοληψία και το καπάκι του σωλήνα σπάει αφού σπάσει από τη θέση κοντά στην κεφαλή δειγματοληψίας. Το ενσωματωμένο στυλεό τοποθετεί απευθείας το στυλεό δειγματοληψίας στον σωλήνα αποθήκευσης μετά τη δειγματοληψία και το κάλυμμα του σωλήνα αποθήκευσης είναι ενσωματωμένο. Ευθυγραμμίστε τη μικρή τρύπα με το πάνω μέρος της λαβής και σφίξτε το κάλυμμα του σωλήνα. Συγκρίνοντας τις δύο μεθόδους, η τελευταία είναι σχετικά ασφαλής. Όταν το σπασμένο στυλεό χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με έναν μικρότερο σωλήνα αποθήκευσης, μπορεί να προκαλέσει πιτσίλισμα υγρού στον σωλήνα όταν σπάσει και πρέπει να δοθεί ιδιαίτερη προσοχή στον κίνδυνο μόλυνσης που προκαλείται από ακατάλληλη χρήση του προϊόντος. Συνιστάται η χρήση κοίλου σωλήνα εξωθημένης πολυστυρενίου (PS) ή σωλήνα τσαλακώματος έγχυσης πολυπροπυλενίου (PP) για το υλικό της λαβής του στυλεού. Ανεξάρτητα από το υλικό που χρησιμοποιείται, δεν μπορούν να προστεθούν πρόσθετα αλγινικού ασβεστίου. Ξύλινα ραβδιά ή ραβδιά μπαμπού. Εν ολίγοις, το στυλεό δειγματοληψίας θα πρέπει να διασφαλίζει την ποσότητα δειγματοληψίας και την ποσότητα απελευθέρωσης και τα επιλεγμένα υλικά δεν πρέπει να έχουν ουσίες που επηρεάζουν τις επόμενες δοκιμές.
2. Διάλυμα συντήρησης ιών: Υπάρχουν δύο είδη διαλυμάτων συντήρησης ιών που χρησιμοποιούνται ευρέως στην αγορά, το ένα είναι ένα διάλυμα συντήρησης ιών τροποποιημένο με βάση το μέσο μεταφοράς και το άλλο είναι ένα τροποποιημένο διάλυμα για εκχύλιση λύματος νουκλεϊκού οξέος.
Το κύριο συστατικό του πρώτου είναι το βασικό μέσο καλλιέργειας Eagle (MEM) ή το ισορροπημένο άλας του Hank, στο οποίο προστίθενται τα άλατα, τα αμινοξέα, οι βιταμίνες, η γλυκόζη και η πρωτεΐνη που είναι απαραίτητα για την επιβίωση του ιού. Αυτό το διάλυμα αποθήκευσης χρησιμοποιεί άλας νατρίου κόκκινου φαινόλης ως δείκτη και διάλυμα. Όταν η τιμή pH είναι 6,6-8,0, το διάλυμα είναι ροζ. Η απαραίτητη γλυκόζη, η L-γλουταμίνη και η πρωτεΐνη προστίθενται στο διάλυμα συντήρησης. Η πρωτεΐνη παρέχεται με τη μορφή εμβρυϊκού ορού βοοειδών ή αλβουμίνης ορού βοοειδών, η οποία μπορεί να σταθεροποιήσει το πρωτεϊνικό κέλυφος του ιού. Επειδή το διάλυμα συντήρησης είναι πλούσιο σε θρεπτικά συστατικά, ευνοεί την επιβίωση του ιού αλλά και ευεργετικό για την ανάπτυξη βακτηρίων. Εάν το διάλυμα συντήρησης είναι μολυσμένο με βακτήρια, θα πολλαπλασιαστεί σε μεγάλες ποσότητες. Το διοξείδιο του άνθρακα στους μεταβολίτες του θα προκαλέσει πτώση του pH του διαλύματος συντήρησης από ροζ σε κίτρινο. Επομένως, οι περισσότεροι κατασκευαστές έχουν προσθέσει αντιβακτηριακά συστατικά στις συνθέσεις τους. Οι συνιστώμενοι αντιβακτηριακοί παράγοντες είναι η πενικιλίνη, η στρεπτομυκίνη, η γενταμικίνη και η πολυμυξίνη Β. Δεν συνιστώνται αναστολείς όπως η αζίδη του νατρίου και η 2-μεθυλική ένωση. Αναστολείς όπως η 4-μεθυλ-4-ισοθειαζολιν-3-όνη (MCI) και η 5-χλωρο-2-μεθυλ-4-ισοθειαζολιν-3-όνη (CMCI), επειδή αυτά τα συστατικά έχουν επίδραση στην αντίδραση PCR. Δεδομένου ότι το δείγμα που παρέχεται από αυτό το διάλυμα συντήρησης είναι βασικά ένας ζωντανός ιός, η πρωτοτυπία του δείγματος μπορεί να διατηρηθεί στο μέγιστο βαθμό και μπορεί να χρησιμοποιηθεί όχι μόνο για την εξαγωγή και ανίχνευση νουκλεϊκών οξέων του ιού, αλλά και για την καλλιέργεια και απομόνωση ιών. Ωστόσο, πρέπει να σημειωθεί ότι όταν χρησιμοποιείται για ανίχνευση, η εξαγωγή και ο καθαρισμός νουκλεϊκών οξέων πρέπει να πραγματοποιούνται μετά την απενεργοποίηση.
Ένα άλλο είδος διαλύματος συντήρησης που παρασκευάζεται με βάση το προϊόν λύσης εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, τα κύρια συστατικά του είναι ισορροπημένα άλατα, χηλικός παράγοντας EDTA, άλας γουανιδίνης (όπως ισοθειοκυανική γουανιδίνη, υδροχλωρική γουανιδίνη, κ.λπ.), ανιονικό επιφανειοδραστικό (όπως δωδεκάνιο θειικό νάτριο), κατιονικά επιφανειοδραστικά (όπως οξαλικό τετραδεκυλοτριμεθυλαμμώνιο), φαινόλη, 8-υδροξυκινολίνη, διθειοθρεϊτόλη (DTT), πρωτεϊνάση Κ και άλλα συστατικά. Αυτό το διάλυμα αποθήκευσης προορίζεται για την άμεση διάσπαση του ιού για την απελευθέρωση του νουκλεϊκού οξέος και την εξάλειψη της RNάσης. Εάν χρησιμοποιείται μόνο για RT-PCR, είναι πιο κατάλληλο, αλλά το προϊόν λύσης μπορεί να απενεργοποιήσει τον ιό. Αυτό το είδος δείγματος δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για διαχωρισμό καλλιέργειας ιού.
Ο χηλικός παράγοντας μεταλλικών ιόντων που χρησιμοποιείται στο διάλυμα συντήρησης του ιού συνιστάται να χρησιμοποιεί άλατα EDTA (όπως δικαλιούχο αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ, δινάτριο αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ κ.λπ.) και δεν συνιστάται η χρήση ηπαρίνης (όπως ηπαρίνη νατρίου, ηπαρίνη λιθίου), ώστε να μην επηρεάζεται η ανίχνευση PCR.
3. Σωλήνας συντήρησης: Το υλικό του σωλήνα συντήρησης πρέπει να επιλέγεται προσεκτικά. Υπάρχουν δεδομένα που υποδηλώνουν ότι το πολυπροπυλένιο (πολυπροπυλένιο) σχετίζεται με την προσρόφηση νουκλεϊκού οξέος, ειδικά σε υψηλή συγκέντρωση ιόντων τάσης. Το πολυαιθυλένιο (πολυαιθυλένιο) προτιμάται περισσότερο από το πολυπροπυλένιο (πολυπροπυλένιο). Εύκολο στην αποτύπωση DNA/RNA. Το πλαστικό από πολυμερές πολυαιθυλενίου-προπυλενίου (πολυαλλομερές) και ορισμένα ειδικά επεξεργασμένα πλαστικά δοχεία πολυπροπυλενίου (πολυπροπυλένιο) είναι πιο κατάλληλα για την αποθήκευση DNA/RNA. Επιπλέον, όταν χρησιμοποιείται εύθραυστο στυλεό, ο σωλήνας αποθήκευσης θα πρέπει να προσπαθεί να επιλέξει ένα δοχείο με ύψος μεγαλύτερο από 8 cm για να αποτρέψει το πιτσίλισμα και τη μόλυνση του περιεχομένου όταν το στυλεό σπάσει.
4. Νερό για διάλυμα συντήρησης παραγωγής: Το υπερκαθαρό νερό που χρησιμοποιείται για το διάλυμα συντήρησης παραγωγής θα πρέπει να διηθείται μέσω μεμβράνης υπερδιήθησης με μοριακό βάρος 13.000 για να διασφαλιστεί η απομάκρυνση των πολυμερικών ακαθαρσιών από βιολογικές πηγές, όπως η RNάση, η DNάση και η ενδοτοξίνη, και δεν συνιστάται ο συνηθισμένος καθαρισμός. Νερό ή απεσταγμένο νερό.
2. Χρήση σωλήνων δειγματοληψίας ιού
Η δειγματοληψία χρησιμοποιώντας τον σωλήνα δειγματοληψίας ιού χωρίζεται κυρίως σε στοματοφαρυγγική δειγματοληψία και ρινοφαρυγγική δειγματοληψία:
1. Στοματοφαρυγγική δειγματοληψία: Πιέστε πρώτα τη γλώσσα με το γλωσσοπίεστρο, στη συνέχεια επεκτείνετε την κεφαλή του στυλεού δειγματοληψίας μέσα στο λαιμό για να σκουπίσετε τις αμφοτερόπλευρες φαρυγγικές αμυγδαλές και το οπίσθιο φαρυγγικό τοίχωμα και σκουπίστε το οπίσθιο φαρυγγικό τοίχωμα με ελαφριά δύναμη, αποφεύγοντας να αγγίξετε τη μονάδα της γλώσσας.
2. Ρινοφαρυγγική δειγματοληψία: μετρήστε την απόσταση από την άκρη της μύτης μέχρι τον λοβό του αυτιού με ένα στυλεό και σημειώστε το με το δάχτυλο, εισάγετε το στυλεό δειγματοληψίας στη ρινική κοιλότητα προς την κατεύθυνση της κάθετης μύτης (πρόσωπο). Το στυλεό πρέπει να εκτείνεται τουλάχιστον στο μισό μήκος του λοβού του αυτιού μέχρι την άκρη της μύτης. Αφήστε το στυλεό στη μύτη για 15-30 δευτερόλεπτα, περιστρέψτε το απαλά 3-5 φορές και τραβήξτε το στυλεό.
Δεν είναι δύσκολο να διαπιστωθεί από τη μέθοδο χρήσης, είτε πρόκειται για στοματοφαρυγγικό είτε για ρινοφαρυγγικό στυλεό, ότι η δειγματοληψία είναι μια τεχνική εργασία, η οποία είναι δύσκολη και μολυσμένη. Η ποιότητα του συλλεγόμενου δείγματος σχετίζεται άμεσα με την επακόλουθη ανίχνευση. Εάν το συλλεγόμενο δείγμα έχει χαμηλό ιικό φορτίο, είναι εύκολο να προκύψουν ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα, γεγονός που καθιστά δύσκολη την επιβεβαίωση της διάγνωσης.
Ώρα δημοσίευσης: 21 Ιουνίου 2020
