1. Über die Herstellung von Virusprobenröhrchen
Virusprobenröhrchen gehören zu den Medizinprodukten. Die meisten inländischen Hersteller sind als Produkte erster Klasse registriert, einige wenige als Produkte zweiter Klasse. Um den Notfallbedarf in Wuhan und anderen Regionen zu decken, haben viele Unternehmen in letzter Zeit den „Notfallweg“ genutzt und eine Zulassung zur Registrierung erster Klasse beantragt. Das Virusprobenröhrchen besteht aus einem Probentupfer, einer Virenkonservierungslösung und einer Umverpackung. Da es keinen einheitlichen nationalen Standard oder Industriestandard gibt, unterscheiden sich die Produkte der verschiedenen Hersteller stark.
1. Probenentnahmetupfer: Der Probenentnahmetupfer kommt direkt mit der Probenentnahmestelle in Kontakt. Das Material des Probenentnahmekopfes ist für die anschließende Detektion entscheidend. Der Probenentnahmetupferkopf sollte aus Polyester (PE)-Kunstfaser oder Viskose (Kunstfaser) bestehen. Calciumalginatschwämme oder Holzstäbchen (einschließlich Bambusstäbchen) sind nicht geeignet. Der Tupferkopf darf nicht aus Baumwolle bestehen. Da Baumwollfasern Proteine stark adsorbieren, eluieren sie nur schwer in die anschließende Aufbewahrungslösung. Zerbrochene Holzstäbchen oder Bambusstäbchen mit Calciumalginat und Holzbestandteilen absorbieren beim Einweichen in der Aufbewahrungslösung ebenfalls Proteine und können die anschließende PCR-Reaktion hemmen. Für den Tupferkopf werden Kunstfasern wie PE-Fasern, Polyesterfasern und Polypropylenfasern empfohlen. Naturfasern wie Baumwolle sind nicht zu empfehlen. Auch Nylonfasern sind nicht zu empfehlen, da Nylonfasern (ähnlich wie Zahnbürstenköpfe) Wasser schlecht absorbieren, was zu einem unzureichenden Probenvolumen und damit zu einer Beeinträchtigung der Detektionsrate führt. Calciumalginatschwämme sind als Probenentnahmetupfermaterial nicht geeignet! Es gibt zwei Arten von Tupfergriffen: abgebrochene und integrierte. Der abgebrochene Tupfer wird nach der Probenahme in das Aufbewahrungsröhrchen gelegt, und die Röhrchenkappe wird nach dem Abbrechen in der Nähe des Probenahmekopfes abgebrochen. Beim integrierten Tupfer wird der Probenahmetupfer nach der Probenahme direkt in das Aufbewahrungsröhrchen eingeführt, und der Aufbewahrungsröhrchendeckel wird festgezogen. Richten Sie das kleine Loch mit der Oberseite des Griffs aus und ziehen Sie den Röhrchendeckel fest. Im Vergleich der beiden Methoden ist die zweite Methode relativ sicher. Wird der abgebrochene Tupfer in Verbindung mit einem kleineren Aufbewahrungsröhrchen verwendet, kann es beim Brechen zu Flüssigkeitsspritzern im Röhrchen kommen. Das Kontaminationsrisiko durch unsachgemäße Verwendung des Produkts ist besonders zu beachten. Als Material für den Tupfergriff wird ein hohles extrudiertes Polystyrol (PS)-Röhrchen oder ein Spritzfalzröhrchen aus Polypropylen (PP) empfohlen. Unabhängig vom verwendeten Material dürfen keine Calciumalginat-Additive hinzugefügt werden; Holz- oder Bambusstäbe sind zu verwenden. Kurz gesagt: Der Probenahmetupfer muss die Probenmenge und die Freisetzungsmenge gewährleisten, und die ausgewählten Materialien dürfen keine Substanzen enthalten, die nachfolgende Tests beeinträchtigen.
2. Virenkonservierungslösung: Auf dem Markt sind zwei Arten von Virenkonservierungslösungen weit verbreitet: eine ist eine auf der Grundlage des Transportmediums modifizierte Virenerhaltungslösung und die andere ist eine modifizierte Lösung für Nukleinsäure-Extraktionslysat.
Der Hauptbestandteil des ersteren ist Eagles Basiskulturmedium (MEM) oder Hanks ausgewogenes Salz, dem die für das Überleben des Virus notwendigen Salze, Aminosäuren, Vitamine, Glukose und Proteine zugesetzt sind. Diese Aufbewahrungslösung verwendet Phenolrot-Natriumsalz als Indikator und Lösung. Bei einem pH-Wert von 6,6–8,0 ist die Lösung rosa. Der Konservierungslösung werden die notwendigen Glukose, L-Glutamin und Proteine zugesetzt. Das Protein liegt in Form von fötalem Rinderserum oder Rinderserumalbumin vor, das die Proteinhülle des Virus stabilisieren kann. Da die Konservierungslösung reich an Nährstoffen ist, fördert sie das Überleben des Virus und ist auch förderlich für das Bakterienwachstum. Ist die Konservierungslösung mit Bakterien verunreinigt, vermehren sich diese stark. Das Kohlendioxid in ihren Metaboliten führt dazu, dass der pH-Wert der Konservierungslösung von rosa nach gelb sinkt. Aus diesem Grund haben die meisten Hersteller ihren Rezepturen antibakterielle Inhaltsstoffe hinzugefügt. Als antibakterielle Wirkstoffe werden Penicillin, Streptomycin, Gentamicin und Polymyxin B empfohlen. Natriumazid und 2-Methyl-Inhibitoren wie 4-Methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) und 5-Chlor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (CMCI) werden nicht empfohlen, da diese Komponenten die PCR-Reaktion beeinflussen. Da es sich bei der Probe, die mit dieser Konservierungslösung gewonnen wird, grundsätzlich um ein lebendes Virus handelt, bleibt die Originalität der Probe weitestgehend erhalten. Die Probe kann nicht nur zur Extraktion und zum Nachweis viraler Nukleinsäuren, sondern auch zur Kultivierung und Isolierung von Viren verwendet werden. Allerdings ist zu beachten, dass bei Verwendung zum Nachweis die Extraktion und Reinigung der Nukleinsäuren nach der Inaktivierung erfolgen muss.
Eine weitere Konservierungslösung wird auf Basis von Nukleinsäure-Extraktionslysat hergestellt. Die Hauptbestandteile sind Salze, EDTA-Chelatbildner, Guanidinsalze (z. B. Guanidinisothiocyanat, Guanidinhydrochlorid usw.), anionische Tenside (z. B. Dodecannatriumsulfat), kationische Tenside (z. B. Tetradecyltrimethylammoniumoxalat), Phenol, 8-Hydroxychinolin, Dithiothreitol (DTT), Proteinase K und andere. Diese Aufbewahrungslösung spaltet das Virus direkt, um die Nukleinsäure freizusetzen und die RNase zu eliminieren. Sie ist besser geeignet, wenn sie nur für RT-PCR verwendet wird, aber das Lysat kann das Virus inaktivieren. Diese Art von Probe kann nicht zur Viruskulturtrennung verwendet werden.
Als Metallionen-Chelatbildner in der Viruskonservierungslösung wird die Verwendung von EDTA-Salzen (wie Dikaliumethylendiamintetraessigsäure, Dinatriumethylendiamintetraessigsäure usw.) empfohlen. Von der Verwendung von Heparin (wie Natriumheparin, Lithiumheparin) wird abgeraten, um die PCR-Erkennung nicht zu beeinträchtigen.
3. Aufbewahrungsröhrchen: Das Material des Aufbewahrungsröhrchens sollte sorgfältig ausgewählt werden. Es gibt Daten, die darauf hindeuten, dass Polypropylen (Polypropylen) mit der Adsorption von Nukleinsäuren zusammenhängt, insbesondere bei hoher Ionenkonzentration. Polyethylen (Polyethylen) ist Polypropylen (Polypropylen) vorzuziehen, da es DNA/RNA leichter greifen kann. Polyethylen-Propylen-Polymer (Polyallomer)-Kunststoff und einige speziell verarbeitete Polypropylen (Polypropylen)-Kunststoffbehälter eignen sich besser für die DNA/RNA-Aufbewahrung. Darüber hinaus sollte bei Verwendung eines zerbrechlichen Tupfers ein Behälter mit einer Höhe von mehr als 8 cm für das Aufbewahrungsröhrchen ausgewählt werden, um zu verhindern, dass der Inhalt beim Zerbrechen des Tupfers verspritzt und verunreinigt wird.
4. Wasser für die Produktionskonservierungslösung: Das für die Produktionskonservierungslösung verwendete ultrareine Wasser sollte durch eine Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekulargewicht von 13.000 gefiltert werden, um die Entfernung von Polymerverunreinigungen aus biologischen Quellen wie RNase, DNase und Endotoxin sicherzustellen. Eine gewöhnliche Reinigung wird nicht empfohlen. Wasser oder destilliertes Wasser.
2. Verwendung von Virusprobenröhrchen
Die Probenentnahme mit dem Virusprobenröhrchen wird hauptsächlich in die oropharyngeale Probenentnahme und die nasopharyngeale Probenentnahme unterteilt:
1. Oropharyngeale Probenentnahme: Drücken Sie zuerst mit dem Zungenspatel auf die Zunge, führen Sie dann den Kopf des Probentupfers in den Rachen ein, um die beidseitigen Rachenmandeln und die hintere Rachenwand abzuwischen, und wischen Sie die hintere Rachenwand mit leichtem Druck ab. Vermeiden Sie dabei, die Zungeneinheit zu berühren.
2. Probenentnahme im Nasen-Rachen-Raum: Messen Sie mit einem Tupfer den Abstand von der Nasenspitze bis zum Ohrläppchen und markieren Sie ihn mit dem Finger. Führen Sie den Probenentnahmetupfer in Richtung der vertikalen Nase (Gesicht) in die Nasenhöhle ein. Der Tupfer sollte mindestens die halbe Länge vom Ohrläppchen bis zur Nasenspitze haben. Lassen Sie den Tupfer 15–30 Sekunden in der Nase, drehen Sie ihn 3–5 Mal vorsichtig und ziehen Sie den Tupfer heraus.
Anhand der Verwendungsmethode lässt sich leicht erkennen, ob es sich um einen Oropharynx- oder einen Nasopharynx-Abstrich handelt. Die Probenahme ist eine technische Aufgabe, die schwierig und kontaminierend ist. Die Qualität der entnommenen Probe steht in direktem Zusammenhang mit der anschließenden Erkennung. Wenn die entnommene Probe eine niedrige Viruslast aufweist, kann es leicht zu falsch-negativen Ergebnissen kommen, was die Bestätigung der Diagnose erschwert.
Veröffentlichungszeit: 21. Juni 2020
