1. Om fremstilling af virusprøvetagningsrør
Virusprøverør tilhører medicinsk udstyr. De fleste indenlandske producenter er registreret i henhold til førsteklasses produkter, og få virksomheder er registreret i henhold til andenklasses produkter. For nylig har mange virksomheder, for at imødekomme nødsituationerne i Wuhan og andre steder, taget "nødkanalen" og "Ansøg om tilladelse til registrering i første klasse". Virusprøverøret består af en prøveudtagningspodning, viruskonserveringsopløsning og ydre emballage. Da der ikke findes nogen samlet national standard eller industristandard, varierer produkterne fra forskellige producenter meget.
1. Prøvetagningspodning: Prøvetagningspodningen er i direkte kontakt med prøvetagningsstedet, og materialet i prøvetagningshovedet er tæt forbundet med den efterfølgende detektion. Prøvetagningspodningshovedet skal være lavet af polyester (PE) syntetisk fiber eller rayon (kunstfibre). Calciumalginatsvampe eller træpinde (inklusive bambuspinde) kan ikke anvendes, og materialet i podningshovedet må ikke være bomuldsprodukter. Da bomuldsfibre har en stærk adsorption af protein, er det ikke let at eluere i den efterfølgende opbevaringsopløsning; og når en træpind eller bambuspind, der indeholder calciumalginat og trækomponenter, er knækket, vil iblødsætning i opbevaringsopløsningen også absorbere protein og endda hæmme den efterfølgende PCR-reaktion. Det anbefales at bruge syntetiske fibre såsom PE-fibre, polyesterfibre og polypropylenfibre til materialet i podningshovedet. Naturfibre såsom bomuld anbefales ikke. Nylonfibre anbefales heller ikke, fordi nylonfibre (ligner tandbørstehoveder) absorberer vand. Dårlige nylonfibre (ligner tandbørstehoveder) absorberer vand. Dårlige nylonfibre resulterer i utilstrækkelig prøvetagningsvolumen, hvilket påvirker detektionsraten. Calciumalginatsvampe er forbudt til prøvetagning af podningsmateriale! Podningsskaftet har to typer: knækket og indbygget. Den knækkede podning placeres i opbevaringsrøret efter prøveudtagning, og rørets hætte brækkes, når den er brækket af fra positionen nær prøveudtagningshovedet. Den indbyggede podning placerer prøveudtagningspodningen direkte i opbevaringsrøret efter prøveudtagning, og opbevaringsrørets dæksel indbygges. Juster det lille hul med toppen af håndtaget, og stram rørdækslet. Sammenlignet med de to metoder er sidstnævnte relativt sikker. Når den knækkede podning bruges sammen med et mindre opbevaringsrør, kan det forårsage væskesprøjt i røret, når det er brudt, og der skal tages fuld hensyn til risikoen for kontaminering forårsaget af forkert brug af produktet. Det anbefales at bruge et hult polystyren (PS) ekstruderet rør eller et polypropylen (PP) injektionsrør som materiale til podningshåndtaget. Uanset hvilket materiale der anvendes, kan der ikke tilsættes calciumalginattilsætningsstoffer; træpinde eller bambuspinde. Kort sagt skal prøveudtagningspodningen sikre mængden af prøveudtagning og mængden af frigivelse, og de valgte materialer må ikke indeholde stoffer, der påvirker den efterfølgende testning.
2. Viruskonserveringsopløsning: Der findes to slags viruskonserveringsopløsninger, der er meget udbredte på markedet. Den ene er en virusvedligeholdelsesopløsning, der er modificeret baseret på transportmediet, og den anden er en modificeret opløsning til nukleinsyreekstraktionslysat.
Hovedkomponenten i førstnævnte er Eagle's basic culture medium (MEM) eller Hanks balanced salt, som tilsættes de salte, aminosyrer, vitaminer, glukose og protein, der er nødvendige for virusoverlevelse. Denne opbevaringsopløsning bruger phenolrødt natriumsalt som indikator og opløsning. Når pH-værdien er 6,6-8,0, er opløsningen lyserød. Den nødvendige glukose, L-glutamin og protein tilsættes konserveringsopløsningen. Proteinet leveres i form af føtalt bovint serum eller bovint serumalbumin, som kan stabilisere virussens proteinskal. Fordi konserveringsopløsningen er rig på næringsstoffer, er den befordrende for virussens overlevelse, men også gavnlig for bakterievækst. Hvis konserveringsopløsningen er forurenet med bakterier, vil den formere sig i store mængder. Kuldioxid i dens metabolitter vil få konserveringsopløsningens pH-værdi til at falde fra lyserød til gul. Derfor har de fleste producenter tilsat antibakterielle ingredienser til deres formuleringer. De anbefalede antibakterielle midler er penicillin, streptomycin, gentamicin og polymyxin B. Natriumazid og 2-methyl anbefales ikke. Hæmmere såsom 4-methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) og 5-chlor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (CMCI), fordi disse komponenter har en effekt på PCR-reaktionen. Da prøven fra denne konserveringsopløsning grundlæggende er en levende virus, kan prøvens originalitet bevares i videst muligt omfang, og den kan ikke kun bruges til ekstraktion og detektion af virusnukleinsyrer, men også til dyrkning og isolering af vira. Det skal dog bemærkes, at når den bruges til detektion, skal nukleinsyreekstraktion og -oprensning udføres efter inaktivering.
En anden type konserveringsopløsning fremstillet baseret på nukleinsyreekstraktionslysat, er hovedkomponenterne afbalancerede salte, EDTA-chelateringsmiddel, guanidinsalt (såsom guanidinisothiocyanat, guanidinhydrochlorid osv.), anionisk overfladeaktivt stof (såsom dodecannatriumsulfat), kationiske overfladeaktive stoffer (såsom tetradecyltrimethylammoniumoxalat), phenol, 8-hydroxyquinolin, dithiothreitol (DTT), proteinase K og andre komponenter. Denne opbevaringsopløsning har til formål at kløve virussen direkte for at frigive nukleinsyren og eliminere RNase. Hvis den kun bruges til RT-PCR, er den mere egnet, men lysatet kan inaktivere virussen. Denne type prøve kan ikke bruges til separation af viruskulturer.
Det anbefales at bruge EDTA-salte (såsom dikaliumethylendiamintetraeddikesyre, dinatriumethylendiamintetraeddikesyre osv.) til det metalionkelateringsmiddel, der anvendes i viruskonserveringsopløsningen, og det anbefales ikke at bruge heparin (såsom natriumheparin, lithiumheparin) for ikke at påvirke PCR-detektionen.
3. Opbevaringsrør: Materialet til opbevaringsrøret bør vælges omhyggeligt. Der er data, der tyder på, at polypropylen (polypropylen) er relateret til adsorption af nukleinsyre, især ved høj koncentration af ioner. Polyethylen (polyethylen) er mere foretrukket end polypropylen (polypropylen). DNA/RNA er let at gribe fat i. Polyethylen-propylenpolymer (polyallomer)-plast og nogle specielt forarbejdede polypropylen (polypropylen)-plastbeholdere er mere egnede til opbevaring af DNA/RNA. Derudover bør man, når man bruger en skrøbelig podning, forsøge at vælge en beholder med en højde på over 8 cm til opbevaring af DNA/RNA for at forhindre, at indholdet sprøjter og kontamineres, når podningen brækkes.
4. Vand til konserveringsopløsning til produktion: Det ultrarene vand, der anvendes til konserveringsopløsning til produktion, bør filtreres gennem en ultrafiltreringsmembran med en molekylvægt på 13.000 for at sikre fjernelse af polymerurenheder fra biologiske kilder, såsom RNase, DNase og endotoksin, og almindelig rensning anbefales ikke. Vand eller destilleret vand.
2. Brug af virusprøvetagningsrør
Prøveudtagning ved hjælp af virusprøverøret er hovedsageligt opdelt i orofaryngeal prøveudtagning og nasofaryngeal prøveudtagning:
1. Orofaryngeal prøveudtagning: Tryk først på tungen med tungespatelen, før derefter hovedet af prøveudtagningspindlen ind i halsen for at aftørre de bilaterale svælgtonsiller og den bageste svælgvæg, og aftør den bageste svælgvæg med let kraft. Undgå at berøre tungeenheden.
2. Nasofaryngeal prøveudtagning: Mål afstanden fra næsespidsen til øreflippen med en podning og marker med en finger. Indsæt podningen i næsehulen i retning af den lodrette næse (ansigt). Poden skal strække sig mindst halvdelen af øreflippen til næsespidsen. Lad podningen blive i næsen i 15-30 sekunder, drej den forsigtigt 3-5 gange, og træk podningen ud.
Det er ikke svært at se ud fra brugsmetoden, om det er en orofaryngeal podning eller en nasofaryngeal podning. Prøveudtagning er en teknisk opgave, som er vanskelig og kontamineret. Kvaliteten af den indsamlede prøve er direkte relateret til den efterfølgende detektion. Hvis den indsamlede prøve har en lav virusmængde, er det let at forårsage falsk negative resultater, hvilket er vanskeligt at bekræfte diagnosen.
Opslagstidspunkt: 21. juni 2020
