1. Ynglŷn â gweithgynhyrchu tiwbiau samplu firysau
Mae tiwbiau samplu firysau yn perthyn i gynhyrchion dyfeisiau meddygol. Mae'r rhan fwyaf o weithgynhyrchwyr domestig wedi'u cofrestru yn ôl y cynhyrchion dosbarth cyntaf, ac ychydig o gwmnïau sydd wedi'u cofrestru yn ôl y cynhyrchion ail ddosbarth. Yn ddiweddar, er mwyn diwallu anghenion brys Wuhan a lleoedd eraill, mae llawer o gwmnïau wedi cymryd y "sianel frys" "Gwneud cais am ganiatâd cofnodi dosbarth cyntaf". Mae'r tiwb samplu firysau yn cynnwys swab samplu, toddiant cadwraeth firysau a phecynnu allanol. Gan nad oes safon genedlaethol unedig na safon diwydiant, mae cynhyrchion gwahanol weithgynhyrchwyr yn amrywio'n fawr.
1. Swab samplu: Mae'r swab samplu yn dod i gysylltiad uniongyrchol â'r safle samplu, ac mae deunydd y pen samplu yn gysylltiedig yn agos â'r canfod dilynol. Dylai pen y swab samplu fod wedi'i wneud o ffibr synthetig Polyester (PE) neu Rayon (ffibr artiffisial). Ni ellir defnyddio swabiau sbwng alginad calsiwm na ffon bren (gan gynnwys ffyn bambŵ), ac ni all deunydd pen y swab fod yn gynhyrchion cotwm. Gan fod gan ffibr cotwm amsugno protein yn gryf, nid yw'n hawdd ei elwtio i'r toddiant storio dilynol; a phan fydd ffon bren neu ffon bambŵ sy'n cynnwys alginad calsiwm a chydrannau pren wedi torri, bydd socian yn yr toddiant storio hefyd yn amsugno protein, a hyd yn oed yn gallu atal yr adwaith PCR dilynol. Argymhellir defnyddio ffibrau synthetig fel ffibr PE, ffibr polyester a ffibr polypropylen ar gyfer deunydd pen y swab. Ni argymhellir ffibrau naturiol fel cotwm. Ni argymhellir ffibrau neilon chwaith oherwydd bod ffibrau neilon (tebyg i bennau brws dannedd) yn amsugno dŵr. Gwael, gan arwain at gyfaint samplu annigonol, gan effeithio ar y gyfradd ganfod. Gwaherddir sbwng alginad calsiwm ar gyfer samplu deunydd swab! Mae gan ddolen swab ddau fath: wedi torri ac wedi'i hadeiladu i mewn. Rhoddir y swab wedi torri yn y tiwb storio ar ôl samplu, a thorrir cap y tiwb ar ôl ei dorri o'r safle ger pen y samplu; mae'r swab adeiledig yn rhoi'r swab samplu yn uniongyrchol yn y tiwb storio ar ôl samplu, ac mae gorchudd y tiwb storio wedi'i adeiladu i mewn. Aliniwch y twll bach â phen y ddolen a thynhau gorchudd y tiwb. O gymharu'r ddau ddull, mae'r olaf yn gymharol ddiogel. Pan ddefnyddir y swab wedi torri ar y cyd â thiwb storio maint llai, gall achosi i hylif tasgu yn y tiwb pan gaiff ei dorri, a dylid rhoi sylw llawn i'r risg o halogiad a achosir gan ddefnydd amhriodol o'r cynnyrch. Argymhellir defnyddio tiwb allwthiol polystyren gwag (PS) neu diwb crychu chwistrellu polypropylen (PP) ar gyfer deunydd handlen y swab. Ni waeth pa ddeunydd a ddefnyddir, ni ellir ychwanegu ychwanegion alginad calsiwm; ffyn pren na ffyn bambŵ. Yn fyr, dylai'r swab samplu sicrhau faint o samplu a faint o ryddhau, a rhaid i'r deunyddiau a ddewisir beidio â chynnwys sylweddau a allai effeithio ar brofion dilynol.
2. Toddiant cadwraeth firysau: Mae dau fath o doddiannau cadwraeth firysau a ddefnyddir yn helaeth yn y farchnad, un yw toddiant cynnal a chadw firysau wedi'i addasu yn seiliedig ar y cyfrwng cludo, a'r llall yw toddiant wedi'i addasu ar gyfer lysate echdynnu asid niwclëig.
Prif gydran y cyntaf yw cyfrwng diwylliant sylfaenol Eagle (MEM) neu halen gytbwys Hank, sy'n cael ei ychwanegu gyda'r halwynau, asidau amino, fitaminau, glwcos a phrotein sy'n angenrheidiol ar gyfer goroesiad firws. Mae'r toddiant storio hwn yn defnyddio halen sodiwm ffenol coch fel dangosydd a thoddiant. Pan fydd y gwerth pH yn 6.6-8.0, mae'r toddiant yn binc. Ychwanegir y glwcos, L-glwtamin a phrotein angenrheidiol at y toddiant cadwraeth. Darperir y protein ar ffurf serwm ffetws buchol neu albwmin serwm buchol, a all sefydlogi plisgyn protein y firws. Gan fod y toddiant cadwraeth yn gyfoethog mewn maetholion, mae'n ffafriol i oroesiad y firws ond hefyd yn fuddiol i dwf bacteria. Os yw'r toddiant cadwraeth wedi'i halogi â bacteria, bydd yn lluosi mewn symiau mawr. Bydd y carbon deuocsid yn ei fetabolion yn achosi i pH y toddiant cadwraeth ostwng o binc i felyn. Felly, mae'r rhan fwyaf o weithgynhyrchwyr wedi ychwanegu cynhwysion gwrthfacteria at eu fformwleiddiadau. Yr asiantau gwrthfacteria a argymhellir yw penisilin, streptomycin, gentamicin a polymyxin B. Ni argymhellir sodiwm asid a 2-methyl. Atalyddion fel 4-methyl-4-isothiazolin-3-one (MCI) a 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one (CMCI) oherwydd bod y cydrannau hyn yn cael effaith ar yr adwaith PCR. Gan mai firws byw yw'r sampl a ddarperir gan y toddiant cadwraeth hwn yn y bôn, gellir cadw gwreiddioldeb y sampl i'r graddau mwyaf, a gellir ei ddefnyddio nid yn unig ar gyfer echdynnu a chanfod asidau niwclëig firysau, ond hefyd ar gyfer tyfu ac ynysu firysau. Fodd bynnag, dylid nodi, pan gaiff ei ddefnyddio ar gyfer canfod, bod yn rhaid echdynnu a phuro asid niwclëig ar ôl ei ddadactifadu.
Math arall o doddiant cadwraeth a baratoir yn seiliedig ar lysad echdynnu asid niwclëig, y prif gydrannau yw halwynau cytbwys, asiant cheleiddio EDTA, halen guanidin (megis isothiocyanate guanidin, hydroclorid guanidin, ac ati), syrffactydd anionig (megis dodecane Sodiwm sylffad), syrffactyddion cationig (megis tetradecyltrimethylammonium oxalate), ffenol, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K a chydrannau eraill. Mae'r toddiant storio hwn yn hollti'r firws yn uniongyrchol i ryddhau'r asid niwclëig a dileu'r RNase. Os caiff ei ddefnyddio ar gyfer RT-PCR yn unig, mae'n fwy addas, ond gall y lysad ddadactifadu'r firws. Ni ellir defnyddio'r math hwn o sampl ar gyfer gwahanu diwylliant firws.
Argymhellir defnyddio halwynau EDTA (megis asid ethylenediaminetetraacetig dipotasiwm, asid ethylenediaminetetraacetig disodiwm, ac ati) ar gyfer yr asiant cheleiddio ïonau metel a ddefnyddir yn y toddiant cadwraeth firysau, ac ni argymhellir defnyddio heparin (megis heparin sodiwm, heparin lithiwm), er mwyn peidio ag effeithio ar ganfod PCR.
3. Tiwb cadwraeth: Dylid dewis deunydd y tiwb cadwraeth yn ofalus. Mae data sy'n awgrymu bod polypropylen (Polypropylen) yn gysylltiedig ag amsugno asid niwclëig, yn enwedig ar grynodiad ïon tensiwn uchel, mae polyethylen (Polyethylen) yn fwy poblogaidd na polypropylen (Polypropylen). Mae DNA/RNA yn hawdd ei afael. Mae plastig polymer polyethylen-propylen (Polyallomer) a rhai cynwysyddion plastig polypropylen (Polypropylen) sydd wedi'u prosesu'n arbennig yn fwy addas ar gyfer storio DNA/RNA. Yn ogystal, wrth ddefnyddio swab torri, dylai'r tiwb storio geisio dewis cynhwysydd sydd ag uchder sy'n fwy nag 8 cm i atal y cynnwys rhag cael ei daflu a'i halogi pan fydd y swab wedi'i dorri.
4. Dŵr ar gyfer toddiant cadwraeth cynhyrchu: Dylid hidlo'r dŵr pur iawn a ddefnyddir ar gyfer toddiant cadwraeth cynhyrchu trwy bilen hidlo uwch gyda phwysau moleciwlaidd o 13,000 i sicrhau bod amhureddau polymer yn cael eu tynnu o ffynonellau biolegol, fel RNase, DNase, ac endotocsin, ac ni argymhellir puro cyffredin. Dŵr na dŵr distyll.
2. Defnyddio tiwbiau samplu firysau
Mae samplu gan ddefnyddio'r tiwb samplu firysau wedi'i rannu'n samplu oroffaryngeal a samplu nasopharyngeal yn bennaf:
1. Samplu oroffaryngol: Yn gyntaf, pwyswch y tafod gyda'r gowasgydd tafod, yna estynnwch ben y swab samplu i'r gwddf i sychu'r tonsiliau ffaryngol dwyochrog a wal gefn y ffaryngol, a sychwch wal gefn y ffaryngol â grym ysgafn, gan osgoi cyffwrdd ag uned y tafod.
2. Samplu nasopharyngeal: mesurwch y pellter o flaen y trwyn i labed y glust gyda swab a marciwch â bys, mewnosodwch y swab samplu i mewn i geudod y trwyn i gyfeiriad y trwyn fertigol (wyneb), dylai'r swab ymestyn o leiaf hanner hyd labed y glust i flaen y trwyn, Gadewch y swab yn y trwyn am 15-30 eiliad, cylchdrowch yn ysgafn 3-5 gwaith, a thynnwch y swab allan.
Nid yw'n anodd gweld o'r dull defnyddio, boed yn swab oroffaryngol neu'n swab nasopharyngol, mae samplu yn dasg dechnegol, sy'n anodd ac yn halogedig. Mae ansawdd y sampl a gesglir yn uniongyrchol gysylltiedig â'r canfod dilynol. Os oes gan y sampl a gesglir lwyth firaol Isel, mae'n hawdd achosi negatifau ffug, yn anodd cadarnhau'r diagnosis.
Amser postio: 21 Mehefin 2020
