1. O výrobě zkumavek pro odběr vzorků virů
Zkumavky pro odběr vzorků virů patří mezi zdravotnické prostředky. Většina domácích výrobců je registrována jako prvotřídní produkty a jen málo společností je registrováno jako druhotřídní produkty. V poslední době mnoho společností, aby uspokojily nouzové potřeby Wu-chanu a dalších míst, zvolilo „nouzový kanál“ „Požádejte o povolení k odběru vzorků první třídy“. Zkumavka pro odběr vzorků virů se skládá z odběrového tamponu, roztoku pro konzervaci virů a vnějšího obalu. Vzhledem k tomu, že neexistuje jednotná národní norma ani průmyslová norma, produkty různých výrobců se velmi liší.
1. Tampon: Tampon se přímo dotýká místa odběru a materiál hlavice odběru úzce souvisí s následnou detekcí. Hlavice tamponu by měla být vyrobena z polyesterového (PE) syntetického vlákna nebo umělého hedvábí (rayon). Nelze použít houbičku z alginátu vápenatého ani dřevěné tyčinky (včetně bambusových tyčinek) a materiál hlavice tamponu nesmí být z bavlny. Protože bavlněné vlákno silně adsorbuje proteiny, není snadné ho eluovat do následného skladovacího roztoku; a pokud je dřevěná nebo bambusová tyčinka obsahující alginát vápenatý a dřevěné komponenty rozbitá, namočená v skladovacím roztoku také adsorbuje proteiny a může dokonce inhibovat následnou PCR reakci. Pro materiál hlavice tamponu se doporučuje používat syntetická vlákna, jako jsou PE vlákna, polyesterová vlákna a polypropylenová vlákna. Přírodní vlákna, jako je bavlna, se nedoporučují. Nylonová vlákna se také nedoporučují, protože nylonová vlákna (podobně jako hlavice zubních kartáčků) špatně absorbují vodu, což má za následek nedostatečný objem vzorku, což ovlivňuje míru detekce. Houbička z alginátu vápenatého je pro odběr materiálu tamponu zakázána! Rukojeť tamponu má dva typy: zlomenou a vestavěnou. Zlomený tampon se po odběru vzorku vloží do úložné zkumavky a víčko zkumavky se po zlomení v blízkosti vzorkovací hlavice zlomí; vestavěný tampon po odběru vzorku přímo vloží tampon do úložné zkumavky a zabuduje se kryt zkumavky. Zarovnejte malý otvor s horní částí rukojeti a utáhněte kryt zkumavky. Při porovnání těchto dvou metod je druhá relativně bezpečná. Pokud se zlomený tampon používá ve spojení s menší úložnou zkumavkou, může při zlomení do zkumavky vniknout tekutina a je třeba věnovat plnou pozornost riziku kontaminace způsobené nesprávným použitím produktu. Pro materiál rukojeti tamponu se doporučuje použít dutou extrudovanou polystyrenovou (PS) trubici nebo polypropylenovou (PP) vstřikovanou rýhovanou trubici. Bez ohledu na použitý materiál nelze přidávat přísady alginátu vápenatého, dřevěné ani bambusové tyčinky. Stručně řečeno, tampon by měl zajistit množství odebraného vzorku a množství uvolněného vzorku a vybrané materiály nesmí obsahovat látky, které by ovlivňovaly následné testování.
2. Roztok pro konzervaci virů: Na trhu se široce používají dva druhy roztoků pro konzervaci virů. Jeden je roztok pro udržování virů modifikovaný na základě transportního média a druhý je modifikovaný roztok pro extrakci nukleových kyselin z lyzátu.
Hlavní složkou prvního z nich je Eagleovo základní kultivační médium (MEM) nebo Hankova vyvážená sůl, do které se přidávají soli, aminokyseliny, vitamíny, glukóza a bílkoviny nezbytné pro přežití viru. Tento skladovací roztok používá jako indikátor a roztok sodnou sůl fenolové červeně. Při hodnotě pH 6,6–8,0 je roztok růžový. Do konzervačního roztoku se přidává potřebná glukóza, L-glutamin a bílkoviny. Bílkoviny jsou dodávány ve formě fetálního bovinního séra nebo bovinního sérového albuminu, které mohou stabilizovat proteinový obal viru. Protože je konzervační roztok bohatý na živiny, přispívá k přežití viru, ale také prospívá růstu bakterií. Pokud je konzervační roztok kontaminován bakteriemi, budou se ve velkém množství množit. Oxid uhličitý v jeho metabolitech způsobí, že pH konzervačního roztoku klesne z růžové na žlutou. Proto většina výrobců přidává do svých receptur antibakteriální složky. Doporučenými antibakteriálními látkami jsou penicilin, streptomycin, gentamicin a polymyxin B. Azid sodný a 2-methylisothiazolin-3-on se nedoporučují. Inhibitory, jako je 4-methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) a 5-chlor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (CMCI), se nedoporučují, protože tyto složky ovlivňují PCR reakci. Vzhledem k tomu, že vzorek získaný tímto konzervačním roztokem je v podstatě živý virus, lze v maximální míře zachovat originalitu vzorku a lze jej použít nejen k extrakci a detekci nukleových kyselin viru, ale také ke kultivaci a izolaci virů. Je však třeba poznamenat, že při použití k detekci je nutné po inaktivaci provést extrakci a purifikaci nukleových kyselin.
Dalším druhem konzervačního roztoku připraveného na bázi lyzátu extrakce nukleových kyselin je vyvážená sole, chelatační činidlo EDTA, guanidinová sůl (jako je guanidinisothiokyanát, guanidin hydrochlorid atd.), aniontová povrchově aktivní látka (jako je dodekansulfát sodný), kationtové povrchově aktivní látky (jako je tetradecyltrimethylamonium oxalát), fenol, 8-hydroxychinolin, dithiothreitol (DTT), proteináza K a další složky. Tento skladovací roztok slouží k přímému štěpení viru, čímž se uvolní nukleová kyselina a eliminuje RNáza. Pokud se používá pouze pro RT-PCR, je vhodnější, ale lyzát může virus inaktivovat. Tento typ vzorku nelze použít pro separaci virových kultur.
Jako chelatační činidlo s kovovými ionty používané v roztoku pro konzervaci virů se doporučuje použití solí EDTA (jako je kyselina ethylendiamintetraoctová didraselná, kyselina ethylendiamintetraoctová disodná atd.) a nedoporučuje se použití heparinu (jako je heparin sodný, heparin lithný), aby se neovlivnila detekce PCR.
3. Konzervační zkumavka: Materiál konzervační zkumavky by měl být pečlivě vybrán. Existují údaje naznačující, že polypropylen (polypropylen) souvisí s adsorpcí nukleových kyselin, zejména při vysoké koncentraci iontů. Polyethylen (polyethylen) je výhodnější než polypropylen (polypropylen). Snadno uchopitelná DNA/RNA. Pro skladování DNA/RNA jsou vhodnější nádoby z polyethylen-propylenového polymeru (polyallomer) a některé speciálně zpracované polypropylenové (polypropylenové) plasty. Kromě toho by se při použití křehkého tamponu měla zvolit nádoba s výškou větší než 8 cm, aby se zabránilo postříkání a kontaminaci obsahu při rozbití tamponu.
4. Voda pro konzervační roztok pro výrobu: Ultračistá voda použitá pro konzervační roztok pro výrobu by měla být filtrována přes ultrafiltrační membránu s molekulovou hmotností 13 000, aby se zajistilo odstranění polymerních nečistot z biologických zdrojů, jako je RNáza, DNáza a endotoxin, a běžné čištění se nedoporučuje. Voda nebo destilovaná voda.
2. Použití zkumavek pro odběr vzorků virů
Odběr vzorků pomocí virové odběrové zkumavky se dělí hlavně na orofaryngeální a nazofaryngeální odběry:
1. Odběr vzorku z orofaryngu: Nejprve stiskněte jazyk tlačítkem na jazyk, poté zasuňte hlavici odběrového tamponu do krku, abyste otřeli oboustranné faryngeální mandle a zadní stěnu hltanu, a zadní stěnu hltanu otřete lehkým tlakem, aniž byste se dotýkali jazyka.
2. Odběr vzorku z nosohltanu: změřte tamponem vzdálenost od špičky nosu k ušnímu lalůčku a označte prstem, vložte tampon do nosní dutiny ve směru svislého nosu (obličeje), tampon by měl sahat alespoň do poloviny délky ušního lalůčku ke špičce nosu. Nechte tampon v nose 15–30 sekund, jemně s ním 3–5krát otočte a tampon vyjměte.
Způsob použití snadno pochopí, zda se jedná o orofaryngeální nebo nosohltanový výtěr. Odběr vzorku je technický, obtížný a kontaminovaný úkol. Kvalita odebraného vzorku přímo souvisí s následnou detekcí. Pokud má odebraný vzorek nízkou virovou nálož, snadno se objeví falešně negativní výsledky a diagnóza se obtížně potvrdí.
Čas zveřejnění: 21. června 2020
