1. Sobre la fabricació de tubs de mostreig de virus
Els tubs de mostreig de virus pertanyen a productes de dispositius mèdics. La majoria dels fabricants nacionals estan registrats segons els productes de primera classe, i poques empreses estan registrades segons els productes de segona classe. Recentment, per tal de satisfer les necessitats d'emergència de Wuhan i altres llocs, moltes empreses han adoptat el "canal d'emergència" "Sol·liciteu el permís de registre de primera classe". El tub de mostreig de virus està compost per un hisop de mostreig, una solució de preservació de virus i un embalatge exterior. Com que no hi ha cap estàndard nacional o estàndard industrial unificat, els productes dels diversos fabricants varien molt.
1. Hisop de mostreig: L'hisop de mostreig entra en contacte directe amb el lloc de mostreig i el material del capçal de mostreig està estretament relacionat amb la detecció posterior. El capçal de l'hisop de mostreig ha de ser de fibra sintètica de polièster (PE) o raió (fibra sintètica). No es poden utilitzar esponges d'alginat de calci ni hisops de pal de fusta (inclosos els pals de bambú), i el material del capçal de l'hisop no pot ser de cotó. Com que la fibra de cotó té una forta adsorció de proteïnes, no és fàcil eluir-la a la solució d'emmagatzematge posterior; i quan un pal de fusta o un pal de bambú que contingui alginat de calci i components de fusta es trenca, submergir-se en la solució d'emmagatzematge també adsorbirà proteïnes i fins i tot pot inhibir la reacció PCR posterior. Es recomana utilitzar fibres sintètiques com ara fibra de PE, fibra de polièster i fibra de polipropilè per al material del capçal de l'hisop. No es recomanen fibres naturals com el cotó. Tampoc es recomanen fibres de niló perquè les fibres de niló (similars als capçals de raspall de dents) absorbeixen aigua. Deficient, resulta en un volum de mostreig insuficient, cosa que afecta la taxa de detecció. L'esponja d'alginat de calci està prohibida per al material de l'hisop de mostreig! El mànec de l'hisop té dos tipus: trencat i integrat. Després del mostreig, es col·loca l'esponjó trencat al tub d'emmagatzematge i es trenca la tapa del tub des de la posició propera al capçal de mostreig; l'esponjó incorporat col·loca directament l'esponjó de mostreig al tub d'emmagatzematge després del mostreig i s'incorpora la tapa del tub d'emmagatzematge. Alineeu el forat petit amb la part superior del mànec i estrenyeu la tapa del tub. Comparant els dos mètodes, aquest últim és relativament segur. Quan l'esponjó trencat s'utilitza juntament amb un tub d'emmagatzematge de mida més petita, pot provocar esquitxades de líquid al tub quan es trenca, i s'ha de prestar molta atenció al risc de contaminació causat per un ús inadequat del producte. Es recomana utilitzar tub extrudit de poliestirè buit (PS) o tub de doblec per injecció de polipropilè (PP) per al material del mànec de l'esponjó. Independentment del material que s'utilitzi, no es poden afegir additius d'alginat de calci; pals de fusta o pals de bambú. En resum, l'esponjó de mostreig ha de garantir la quantitat de mostreig i la quantitat d'alliberament, i els materials seleccionats no han de contenir substàncies que afectin les proves posteriors.
2. Solució de preservació de virus: Hi ha dos tipus de solucions de preservació de virus àmpliament utilitzades al mercat, una és una solució de manteniment de virus modificada en funció del medi de transport i l'altra és una solució modificada per al lisat d'extracció d'àcids nucleics.
El component principal del primer és el medi de cultiu bàsic d'Eagle (MEM) o la sal equilibrada de Hank, a la qual s'afegeixen les sals, aminoàcids, vitamines, glucosa i proteïnes necessàries per a la supervivència del virus. Aquesta solució d'emmagatzematge utilitza la sal de sodi vermell de fenol com a indicador i solució. Quan el valor de pH és de 6,6-8,0, la solució és rosa. La glucosa, la L-glutamina i la proteïna necessàries s'afegeixen a la solució de conservació. La proteïna es proporciona en forma de sèrum fetal boví o albúmina sèrica bovina, que pot estabilitzar la capa proteica del virus. Com que la solució de conservació és rica en nutrients, és propicia per a la supervivència del virus però també beneficiosa per al creixement de bacteris. Si la solució de conservació està contaminada amb bacteris, es multiplicarà en grans quantitats. El diòxid de carboni dels seus metabòlits farà que el pH de la solució de conservació baixi de rosa a groc. Per tant, la majoria dels fabricants han afegit ingredients antibacterians a les seves formulacions. Els agents antibacterians recomanats són la penicil·lina, l'estreptomicina, la gentamicina i la polimixina B. No es recomanen l'azida sòdica ni el 2-metil. Inhibidors com la 4-metil-4-isotiazolin-3-ona (MCI) i la 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona (CMCI) perquè aquests components tenen un efecte sobre la reacció de PCR. Com que la mostra proporcionada per aquesta solució de preservació és bàsicament un virus viu, l'originalitat de la mostra es pot mantenir al màxim, i es pot utilitzar no només per a l'extracció i detecció d'àcids nucleics de virus, sinó també per al cultiu i aïllament de virus. Tanmateix, cal tenir en compte que quan s'utilitza per a la detecció, l'extracció i la purificació d'àcids nucleics s'han de realitzar després de la inactivació.
Un altre tipus de solució de conservació preparada a partir del lisat d'extracció d'àcids nucleics, els components principals són sals equilibrades, agent quelant EDTA, sal de guanidina (com ara isotiocianat de guanidina, clorhidrat de guanidina, etc.), tensioactiu aniònic (com ara dodecà sulfat de sodi), tensioactius catiònics (com ara oxalat de tetradeciltrimetilamoni), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteinasa K i altres components. Aquesta solució d'emmagatzematge serveix per escindir directament el virus per alliberar l'àcid nucleic i eliminar la RNasa. Si només s'utilitza per a RT-PCR, és més adequada, però el lisat pot inactivar el virus. Aquest tipus de mostra no es pot utilitzar per a la separació de cultius de virus.
Es recomana utilitzar sals d'EDTA com a agent quelant d'ions metàl·lics utilitzat en la solució de preservació de virus (com ara àcid etilendiaminotetraacètic dipotàssic, àcid etilendiaminotetraacètic disòdic, etc.), i no es recomana utilitzar heparina (com ara heparina sòdica, heparina de liti) per no afectar la detecció de la PCR.
3. Tub de conservació: El material del tub de conservació s'ha de seleccionar amb cura. Hi ha dades que suggereixen que el polipropilè (polipropilè) està relacionat amb l'adsorció d'àcids nucleics, especialment a alta concentració d'ions de tensió, el polietilè (polietilè) és més preferible que el polipropilè (polipropilè). ADN/ARN fàcil d'agafar. El plàstic de polímer de polietilè-propilè (polial·lòmer) i alguns recipients de plàstic de polipropilè (polipropilè) especialment processats són més adequats per a l'emmagatzematge d'ADN/ARN. A més, quan s'utilitza un hisop trencable, s'ha de triar un recipient amb una alçada superior a 8 cm per evitar que el contingut s'esquitxi i es contamini quan l'hisop es trenca.
4. Aigua per a la solució de conservació de la producció: l'aigua ultrapura utilitzada per a la solució de conservació de la producció s'ha de filtrar a través d'una membrana d'ultrafiltració amb un pes molecular de 13.000 per garantir l'eliminació d'impureses de polímers de fonts biològiques, com ara RNasa, DNasa i endotoxines, i no es recomana la purificació ordinària. Aigua o aigua destil·lada.
2. Ús de tubs de mostreig de virus
El mostreig mitjançant el tub de mostreig de virus es divideix principalment en mostreig orofaríngi i mostreig nasofaríngi:
1. Mostreig orofaríngi: primer premeu la llengua amb el depressor lingual, després esteneu el cap de l'esponja de mostreig a la gola per netejar les amigdales faríngies bilaterals i la paret faríngia posterior, i netegeu la paret faríngia posterior amb una força lleugera, evitant tocar la unitat lingual.
2. Mostreig nasofaringi: mesurar la distància des de la punta del nas fins al lòbul de l'orella amb un hisop i marcar amb un dit, inserir l'hisop de mostreig a la cavitat nasal en direcció al nas vertical (cara), l'hisop ha d'estendre almenys la meitat de la longitud del lòbul de l'orella fins a la punta del nas. Deixar l'hisop al nas durant 15-30 segons, girar suaument 3-5 vegades i retirar l'hisop.
No és difícil veure pel mètode d'ús, tant si es tracta d'un hisop orofaringi com d'un hisop nasofaringi, el mostreig és una tasca tècnica, difícil i contaminada. La qualitat de la mostra recollida està directament relacionada amb la detecció posterior. Si la mostra recollida té una càrrega viral baixa, és fàcil causar falsos negatius, és difícil confirmar el diagnòstic.
Data de publicació: 21 de juny de 2020
