1. O proizvodnji epruveta za uzorkovanje virusa
Epruvete za uzorkovanje virusa spadaju u proizvode medicinske opreme. Većina domaćih proizvođača je registrovana prema proizvodima prve klase, a malo kompanija je registrovano prema proizvodima druge klase. Nedavno su, kako bi zadovoljile hitne potrebe Wuhana i drugih mjesta, mnoge kompanije poduzele "hitni kanal" "Podnesite zahtjev za dozvolu za evidenciju prve klase". Epruveta za uzorkovanje virusa sastoji se od štapića za uzorkovanje, rastvora za konzervaciju virusa i vanjskog pakovanja. Budući da ne postoji jedinstveni nacionalni standard ili industrijski standard, proizvodi različitih proizvođača se uveliko razlikuju.
1. Štapić za uzorkovanje: Štapić za uzorkovanje direktno dodiruje mjesto uzorkovanja, a materijal glave za uzorkovanje usko je povezan s naknadnom detekcijom. Glava štapića za uzorkovanje treba biti izrađena od sintetičkih vlakana od poliestera (PE) ili rajona (umjetnih vlakana). Ne mogu se koristiti spužva od kalcijum alginata ili drveni štapići za uzorkovanje (uključujući bambusove štapiće), a materijal glave štapića ne smije biti pamučni proizvodi. Budući da pamučna vlakna imaju snažnu adsorpciju proteina, nije ih lako eluirati u naredni rastvor za skladištenje; a kada se drveni štapić ili bambusov štapić koji sadrži kalcijum alginat i drvene komponente slomi, namakanje u rastvoru za skladištenje također će adsorbirati proteine, pa čak i može inhibirati naknadnu PCR reakciju. Preporučuje se korištenje sintetičkih vlakana kao što su PE vlakna, poliesterska vlakna i polipropilenska vlakna za materijal glave štapića. Prirodna vlakna poput pamuka se ne preporučuju. Najlonska vlakna se također ne preporučuju jer najlonska vlakna (slično glavama četkica za zube) loše upijaju vodu, što rezultira nedovoljnom količinom uzorkovanja, što utječe na stopu detekcije. Spužva od kalcijum alginata je zabranjena za uzorkovanje materijala za štapić! Drške štapića imaju dvije vrste: slomljene i ugrađene. Slomljeni štapić se stavlja u epruvetu za pohranu nakon uzorkovanja, a poklopac epruvete se lomi nakon što se slomi s položaja blizu glave za uzorkovanje; ugrađeni štapić direktno stavlja štapić za uzorkovanje u epruvetu za pohranu nakon uzorkovanja, a poklopac epruvete za pohranu se ugrađuje. Poravnajte malu rupu s vrhom drške i zategnite poklopac epruvete. Upoređujući dvije metode, potonja je relativno sigurna. Kada se slomljeni štapić koristi u kombinaciji s manjom epruvetom za pohranu, može doći do prskanja tekućine u epruveti kada se slomi, te treba obratiti punu pažnju na rizik od kontaminacije uzrokovane nepravilnom upotrebom proizvoda. Preporučuje se korištenje šuplje ekstrudirane polistirenske (PS) cijevi ili cijevi za brizganje od polipropilena (PP) za nabiranje kao materijal drške štapića. Bez obzira na materijal koji se koristi, ne smiju se dodavati aditivi kalcijum alginata; drveni štapići ili bambusovi štapići. Ukratko, štapić za uzorkovanje treba osigurati količinu uzorkovanja i količinu oslobađanja, a odabrani materijali ne smiju sadržavati tvari koje utječu na naknadno testiranje.
2. Otopina za očuvanje virusa: Na tržištu se široko koriste dvije vrste otopina za očuvanje virusa, jedna je otopina za održavanje virusa modificirana na osnovu transportnog medija, a druga je modificirana otopina za ekstrakciju lizata nukleinskih kiselina.
Glavna komponenta prvog je Eagleov osnovni medij za kulturu (MEM) ili Hankova uravnotežena sol, kojoj se dodaju soli, aminokiseline, vitamini, glukoza i proteini potrebni za preživljavanje virusa. Ovaj rastvor za skladištenje koristi natrijumsku sol fenol crvene boje kao indikator i rastvor. Kada je pH vrijednost 6,6-8,0, rastvor je ružičaste boje. Potrebna glukoza, L-glutamin i proteini dodaju se u rastvor za konzerviranje. Protein se obezbjeđuje u obliku fetalnog goveđeg seruma ili goveđeg serumskog albumina, koji može stabilizovati proteinsku ljusku virusa. Budući da je rastvor za konzerviranje bogat hranjivim tvarima, pogodan je za preživljavanje virusa, ali je također koristan za rast bakterija. Ako je rastvor za konzerviranje kontaminiran bakterijama, one će se razmnožavati u velikim količinama. Ugljen-dioksid u njegovim metabolitima uzrokovat će pad pH vrijednosti rastvora za konzerviranje iz ružičaste u žutu. Stoga je većina proizvođača dodala antibakterijske sastojke u svoje formulacije. Preporučeni antibakterijski agensi su penicilin, streptomicin, gentamicin i polimiksin B. Natrijum azid i 2-metil se ne preporučuju. Inhibitori poput 4-metil-4-izotiazolin-3-ona (MCI) i 5-hloro-2-metil-4-izotiazolin-3-ona (CMCI) jer ove komponente utiču na PCR reakciju. Budući da je uzorak koji se dobija ovim rastvorom za konzervaciju u osnovi živi virus, originalnost uzorka se može sačuvati u najvećoj mogućoj mjeri i može se koristiti ne samo za ekstrakciju i detekciju nukleinskih kiselina virusa, već i za kultivaciju i izolaciju virusa. Međutim, treba napomenuti da kada se koristi za detekciju, ekstrakcija i pročišćavanje nukleinskih kiselina moraju se izvršiti nakon inaktivacije.
Druga vrsta rastvora za konzerviranje pripremljena na bazi lizata ekstrakcije nukleinskih kiselina, glavne komponente su uravnotežene soli, EDTA helat, gvanidin sol (kao što je gvanidin izotiocijanat, gvanidin hidrohlorid, itd.), anionski surfaktant (kao što je dodekan natrijum sulfat), katjonski surfaktanti (kao što je tetradeciltrimetilamonij oksalat), fenol, 8-hidroksikinolin, ditiotreitol (DTT), proteinaza K i druge komponente. Ovaj rastvor za skladištenje služi za direktno cijepanje virusa kako bi se oslobodila nukleinska kiselina i eliminisala RNaza. Ako se koristi samo za RT-PCR, pogodniji je, ali lizat može inaktivirati virus. Ova vrsta uzorka se ne može koristiti za odvajanje virusne kulture.
Preporučuje se korištenje helirajućeg sredstva metalnih iona koje se koristi u otopini za očuvanje virusa u obliku EDTA soli (kao što su dikalijum etilendiamintetrasirćetna kiselina, dinatrijum etilendiamintetrasirćetna kiselina itd.), a ne preporučuje se upotreba heparina (kao što je natrijum heparin, litijum heparin), kako ne bi utjecalo na detekciju PCR-a.
3. Epruveta za čuvanje: Materijal epruvete za čuvanje treba pažljivo odabrati. Postoje podaci koji ukazuju na to da je polipropilen (polipropilen) povezan s adsorpcijom nukleinskih kiselina, posebno pri visokoj koncentraciji iona, polietilen (polietilen) je poželjniji od polipropilena (polipropilena). DNK/RNK se lako drži. Za čuvanje DNK/RNK pogodnije su posude od polietilen-propilenskog polimera (polialomera) i neke posebno obrađene plastične posude od polipropilena (polipropilena). Osim toga, prilikom korištenja lomljivog štapića za štapić, treba pokušati odabrati posudu visine veće od 8 cm kako bi se spriječilo prskanje i kontaminacija sadržaja kada se štapić slomi.
4. Voda za rastvor za konzerviranje u proizvodnji: Ultračista voda koja se koristi za rastvor za konzerviranje u proizvodnji treba se filtrirati kroz ultrafiltracijsku membranu molekularne težine 13.000 kako bi se osiguralo uklanjanje polimernih nečistoća iz bioloških izvora, kao što su RNaza, DNaza i endotoksin, a obično prečišćavanje se ne preporučuje. Koristi se voda ili destilovana voda.
2. Upotreba epruveta za uzorkovanje virusa
Uzorkovanje pomoću epruvete za uzorkovanje virusa uglavnom se dijeli na orofaringealno i nazofaringealno uzorkovanje:
1. Uzimanje uzorka iz orofarinksa: Prvo pritisnite jezik depresorom za jezik, zatim produžite vrh štapića za uzorkovanje u grlo kako biste obrisali bilateralne faringealne krajnike i stražnji zid ždrijela, te lagano obrišite stražnji zid ždrijela, izbjegavajući dodirivanje jezika.
2. Uzimanje uzorka iz nazofarinksa: štapićem izmjerite udaljenost od vrha nosa do ušne resice i označite prstom, umetnite štapić za uzimanje uzorka u nosnu šupljinu u smjeru vertikalnog nosa (lica), štapić treba da se proteže najmanje do polovine dužine ušne resice do vrha nosa, ostavite štapić u nosu 15-30 sekundi, lagano rotirajte 3-5 puta i izvucite štapić.
Nije teško vidjeti iz načina upotrebe, bilo da se radi o orofaringealnom ili nazofaringealnom brisu, uzorkovanje je tehnički zadatak, koji je težak i kontaminiran. Kvalitet prikupljenog uzorka direktno je povezan s naknadnom detekcijom. Ako prikupljeni uzorak ima nisko virusno opterećenje, lako je izazvati lažno negativne rezultate, što otežava potvrdu dijagnoze.
Vrijeme objave: 21. juni 2020.
