1. Относно производството на епруветки за вземане на проби от вируси
Епруветките за вземане на проби от вируси принадлежат към медицинските изделия. Повечето местни производители са регистрирани като продукти от първи клас, а малко компании са регистрирани като продукти от втори клас. Напоследък, за да отговорят на спешните нужди на Ухан и други места, много компании са предприели „авариен канал“ „Кандидатствайте за разрешение за запис от първи клас“. Епруветката за вземане на проби от вируси се състои от тампон за вземане на проби, разтвор за съхранение на вируси и външна опаковка. Тъй като няма единен национален или индустриален стандарт, продуктите на различните производители се различават значително.
1. Тампон за вземане на проби: Тампонът за вземане на проби е в директен контакт с мястото на вземане на проби, а материалът на главата за вземане на проби е тясно свързан с последващото откриване. Главата на тампона за вземане на проби трябва да е изработена от полиестерни (PE) синтетични влакна или вискоза (изкуствени влакна). Не могат да се използват гъба от калциев алгинат или дървени пръчици (включително бамбукови пръчици), а материалът на главата на тампона не може да бъде памучен. Тъй като памучните влакна имат силна адсорбция на протеини, не е лесно да се елуират в следващия разтвор за съхранение; и когато дървена или бамбукова пръчица, съдържаща калциев алгинат и дървени компоненти, е счупена, накисването в разтвора за съхранение също ще адсорбира протеини и дори може да инхибира последващата PCR реакция. Препоръчително е използването на синтетични влакна като PE влакна, полиестерни влакна и полипропиленови влакна за материала на главата на тампона. Естествените влакна като памук не се препоръчват. Найлоновите влакна също не се препоръчват, тъй като найлоновите влакна (подобно на главите на четките за зъби) абсорбират вода. Това води до недостатъчен обем на пробата, което влияе върху степента на откриване. Гъбата от калциев алгинат не е подходяща за използване при вземане на проби от материал за тампони! Дръжките на тампона са два вида: счупени и вградени. Счупеният тампон се поставя в епруветката за съхранение след вземане на проба и капачката на епруветката се чупи, след като се счупи от позицията близо до главата за вземане на проби; вграденият тампон поставя тампона за вземане на проби директно в епруветката за съхранение след вземане на проба и вграденият капак на епруветката за съхранение. Подравнете малкия отвор с горната част на дръжката и затегнете капака на епруветката. Сравнявайки двата метода, вторият е относително безопасен. Когато счупеният тампон се използва заедно с епруветка за съхранение с по-малък размер, това може да доведе до пръскане на течност в епруветката при счупване и трябва да се обърне пълно внимание на риска от замърсяване, причинено от неправилна употреба на продукта. Препоръчително е да се използва куха екструдирана епруветка от полистирол (PS) или инжекционна епруветка от полипропилен (PP) за материала на дръжката на тампона. Независимо от използвания материал, не могат да се добавят добавки от калциев алгинат; дървени пръчици или бамбукови пръчици. Накратко, тампонът за вземане на проби трябва да гарантира количеството на вземане на проба и количеството на отделяне, а избраните материали не трябва да съдържат вещества, които влияят на последващото тестване.
2. Разтвор за съхранение на вируси: На пазара се използват два вида разтвори за съхранение на вируси, единият е разтвор за поддържане на вируси, модифициран въз основа на транспортната среда, а другият е модифициран разтвор за лизат за екстракция на нуклеинови киселини.
Основният компонент на първата е основната хранителна среда на Игъл (MEM) или балансираната сол на Ханк, към която се добавят соли, аминокиселини, витамини, глюкоза и протеини, необходими за оцеляването на вируса. Този разтвор за съхранение използва фенолно червено натриева сол като индикатор и разтвор. Когато pH стойността е 6,6-8,0, разтворът е розов. Необходимите глюкоза, L-глутамин и протеин се добавят към разтвора за съхранение. Протеинът се предоставя под формата на фетален говежди серум или говежди серумен албумин, което може да стабилизира протеиновата обвивка на вируса. Тъй като разтворът за съхранение е богат на хранителни вещества, той е благоприятен за оцеляването на вируса, но също така е полезен за растежа на бактериите. Ако разтворът за съхранение е замърсен с бактерии, те ще се размножат в големи количества. Въглеродният диоксид в метаболитите му ще доведе до спадане на pH на разтвора за съхранение от розово в жълто. Поради това повечето производители са добавили антибактериални съставки към своите формулировки. Препоръчителните антибактериални средства са пеницилин, стрептомицин, гентамицин и полимиксин B. Натриевият азид и 2-метил не се препоръчват. Инхибитори като 4-метил-4-изотиазолин-3-он (MCI) и 5-хлоро-2-метил-4-изотиазолин-3-он (CMCI), тъй като тези компоненти влияят на PCR реакцията. Тъй като пробата, осигурена от този консервиращ разтвор, е основно жив вирус, оригиналността на пробата може да бъде запазена в максимална степен и тя може да се използва не само за екстракция и откриване на вирусни нуклеинови киселини, но и за култивиране и изолиране на вируси. Трябва да се отбележи обаче, че когато се използва за откриване, екстракцията и пречистването на нуклеинови киселини трябва да се извършат след инактивиране.
Друг вид разтвор за съхранение, приготвен на базата на лизат от екстракция на нуклеинови киселини, е балансирани соли, като основните компоненти са балансирани соли, хелатиращ агент EDTA, гуанидинова сол (като гуанидин изотиоцианат, гуанидин хидрохлорид и др.), анионно повърхностноактивно вещество (като додекан натриев сулфат), катионни повърхностноактивни вещества (като тетрадецилтриметиламониев оксалат), фенол, 8-хидроксихинолин, дитиотреитол (DTT), протеиназа К и други компоненти. Този разтвор за съхранение служи за директно разцепване на вируса, за да освободи нуклеиновата киселина и да елиминира RNase. Ако се използва само за RT-PCR, е по-подходящ, но лизатът може да инактивира вируса. Този вид проба не може да се използва за разделяне на вирусна култура.
Препоръчва се използването на хелатиращ агент с метални йони, използван в разтвора за съхранение на вируси, да съдържа EDTA соли (като дикалиева етилендиаминтетраоцетна киселина, динатриева етилендиаминтетраоцетна киселина и др.) и не се препоръчва използването на хепарин (като натриев хепарин, литиев хепарин), за да не се повлияе на PCR откриването.
3. Епруветка за съхранение: Материалът на епруветката за съхранение трябва да се избира внимателно. Има данни, които сочат, че полипропиленът (полипропилен) е свързан с адсорбцията на нуклеинова киселина, особено при висока концентрация на йони под напрежение. Полиетиленът (полиетилен) е по-предпочитан от полипропилен. Лесна за хващане ДНК/РНК. Полиетилен-пропиленовата полимерна (полиаломерна) пластмаса и някои специално обработени полипропиленови (полипропиленови) пластмасови контейнери са по-подходящи за съхранение на ДНК/РНК. Освен това, когато се използва чуплив тампон, епруветката за съхранение трябва да се стреми да избере контейнер с височина над 8 см, за да се предотврати разпръскване и замърсяване на съдържанието при счупване на тампона.
4. Вода за разтвор за консервиране при производството: Ултрачистата вода, използвана за разтвор за консервиране при производството, трябва да се филтрира през ултрафилтрационна мембрана с молекулно тегло 13 000, за да се осигури отстраняването на полимерни примеси от биологични източници, като RNase, DNNase и ендотоксин, и не се препоръчва обикновено пречистване. Вода или дестилирана вода.
2. Използване на епруветки за вземане на проби от вируси
Вземането на проби с помощта на епруветка за вирусни проби се разделя основно на орофарингеално вземане на проби и назофарингеално вземане на проби:
1. Вземане на проба от орофаринкса: Първо натиснете езика с депресора за език, след това изпънете главата на тампона за вземане на проба в гърлото, за да избършете двустранните фарингеални сливици и задната фарингеална стена, и избършете задната фарингеална стена с лек натиск, като избягвате докосване на езика.
2. Вземане на проба от назофаринкса: измерете разстоянието от върха на носа до ушната мида с тампон и маркирайте с пръст, поставете тампона за вземане на проба в носната кухина по посока на вертикалния нос (лицето), като тампонът трябва да се простира поне на половината от дължината на ушната мида до върха на носа. Оставете тампона в носа за 15-30 секунди, завъртете внимателно 3-5 пъти и извадете тампона.
Не е трудно да се види от начина на използване, независимо дали става въпрос за орофарингеален или назофарингеален тампон, вземането на проба е техническа задача, която е трудна и замърсена. Качеството на събраната проба е пряко свързано с последващото откриване. Ако събраната проба има нисък вирусен товар, лесно е да се получат фалшиво отрицателни резултати и е трудно да се потвърди диагнозата.
Време на публикуване: 21 юни 2020 г.
