1. Аб вытворчасці прабірак для адбору вірусаў
Прабіркі для адбору вірусаў адносяцца да медыцынскіх вырабаў. Большасць айчынных вытворцаў зарэгістраваны ў адпаведнасці з прадукцыяй першага класа, і толькі некалькі кампаній зарэгістраваны ў адпаведнасці з прадукцыяй другога класа. Нядаўна, каб задаволіць надзвычайныя патрэбы Уханя і іншых месцаў, многія кампаніі скарысталіся «экстраным каналам» «Падайце заяўку на атрыманне дазволу на запіс першага класа». Прабірка для адбору вірусаў складаецца з тампона для адбору проб, раствора для кансервацыі вірусаў і знешняй упакоўкі. Паколькі няма адзінага нацыянальнага стандарту або галіновага стандарту, прадукцыя розных вытворцаў моцна адрозніваецца.
1. Тампон для адбору проб: Тампон для адбору проб непасрэдна кантактуе з месцам адбору проб, і матэрыял галоўкі для адбору проб цесна звязаны з наступным выяўленнем. Галоўка тампона павінна быць выраблена з поліэфірнага (ПЭ) сінтэтычнага валакна або віскозы (штучнага валакна). Нельга выкарыстоўваць губку з альгінатам кальцыя або драўляныя палачкі (у тым ліку бамбукавыя палачкі), а матэрыял галоўкі тампона не можа быць з бавоўны. Паколькі баваўнянае валакно мае моцную адсарбцыю бялку, яно не лёгка трапляе ў наступны раствор для захоўвання; і калі драўляная або бамбукавая палачка, якая змяшчае альгінат кальцыя і драўляныя кампаненты, зламаная, замочванне ў растворы для захоўвання таксама будзе адсарбаваць бялок і нават можа перашкаджаць наступнай рэакцыі ПЦР. Рэкамендуецца выкарыстоўваць сінтэтычныя валокны, такія як ПЭ валакно, поліэфірнае валакно і поліпрапіленавыя валокны, у якасці матэрыялу для галоўкі тампона. Натуральныя валокны, такія як бавоўна, не рэкамендуюцца. Нейлонавыя валокны таксама не рэкамендуюцца, таму што нейлонавыя валокны (падобныя да галовак зубной шчоткі) дрэнна ўбіраюць ваду, што прыводзіць да недастатковага аб'ёму пробы, што ўплывае на хуткасць выяўлення. Губка з альгінатам кальцыя забароненая для адбору матэрыялу для тампона! Ручка тампона бывае двух тыпаў: зламаная і ўбудаваная. Пасля адбору пробы зламаны тампон змяшчаецца ў прабірку для захоўвання, а вечка прабіркі ламаецца пасля таго, як яна зламаецца каля галоўкі для адбору проб; убудаваны тампон непасрэдна змяшчае тампон для адбору пробы ў прабірку для захоўвання пасля адбору пробы, і ўбудоўваецца вечка прабіркі для захоўвання. Сумясціце невялікую адтуліну з верхняй часткай ручкі і зацягніце вечка прабіркі. Параўноўваючы два метады, апошні з'яўляецца адносна бяспечным. Пры выкарыстанні зламанага тампона разам з прабіркай для захоўвання меншага памеру, гэта можа прывесці да пырскаў вадкасці ў прабірцы пры разбіцці, і неабходна звярнуць пільную ўвагу на рызыку забруджвання, выкліканага няправільным выкарыстаннем прадукту. Рэкамендуецца выкарыстоўваць полыя экструдаваныя трубкі з полістыролу (PS) або поліпрапіленавыя (PP) трубкі для ін'екцыйнага згінання ў якасці матэрыялу ручкі тампона. Незалежна ад таго, які матэрыял выкарыстоўваецца, нельга дадаваць дадаткі альгінату кальцыя; драўляныя або бамбукавыя палачкі. Карацей кажучы, тампон для адбору пробы павінен забяспечваць колькасць адабранай пробы і колькасць вызвалення, а выбраныя матэрыялы не павінны ўтрымліваць рэчываў, якія ўплываюць на наступныя выпрабаванні.
2. Раствор для захавання вірусаў: На рынку шырока выкарыстоўваюцца два віды раствораў для захавання вірусаў: адзін — гэта раствор для захавання вірусаў, мадыфікаваны на аснове транспартнага асяроддзя, а другі — мадыфікаваны раствор для лізату экстракцыі нуклеінавых кіслот.
Асноўным кампанентам першага з'яўляецца асноўнае культуральнае асяроддзе Ігла (MEM) або збалансаваная соль Хэнка, у якую дадаюцца солі, амінакіслоты, вітаміны, глюкоза і бялок, неабходныя для выжывання віруса. У гэтым растворы для захоўвання выкарыстоўваецца фенол-чырвоны натрыевая соль у якасці індыкатара і раствора. Пры значэнні pH 6,6-8,0 раствор мае ружовы колер. У раствор для кансервавання дадаюцца неабходныя глюкоза, L-глутамін і бялок. Бялок пастаўляецца ў выглядзе фетальнай бычынай сыроваткі або бычынага сыроватачнага альбуміна, якія могуць стабілізаваць бялковую абалонку віруса. Паколькі раствор для кансервавання багаты пажыўнымі рэчывамі, ён спрыяе выжыванню віруса, а таксама карысны для росту бактэрый. Калі раствор для кансервавання забруджаны бактэрыямі, яны будуць размнажацца ў вялікіх колькасцях. Вуглякіслы газ у яго метабалітах прывядзе да падзення pH раствора для кансервавання з ружовага на жоўты. Таму большасць вытворцаў дадаюць у свае рэцэптуры антыбактэрыйныя інгрэдыенты. Рэкамендаваныя антыбактэрыйныя прэпараты - пеніцылін, стрэптаміцын, гентаміцын і поліміксін B. Азід натрыю і 2-метыл не рэкамендуюцца. Інгібітары, такія як 4-метыл-4-ізатыязалін-3-он (MCI) і 5-хлор-2-метыл-4-ізатыязалін-3-он (CMCI), не рэкамендуюцца, паколькі гэтыя кампаненты ўплываюць на рэакцыю ПЛР. Паколькі ўзор, атрыманы з дапамогай гэтага кансервацыйнага раствора, у асноўным з'яўляецца жывым вірусам, арыгінальнасць узору можа быць максімальна захавана, і яго можна выкарыстоўваць не толькі для экстракцыі і выяўлення нуклеінавых кіслот віруса, але і для культывавання і вылучэння вірусаў. Аднак варта адзначыць, што пры выкарыстанні для выяўлення экстракцыю і ачыстку нуклеінавых кіслот неабходна праводзіць пасля інактывацыі.
Іншы від кансервуючага раствора, падрыхтаванага на аснове лізату экстракцыі нуклеінавых кіслот, асноўнымі кампанентамі якога з'яўляюцца збалансаваныя солі, хелатуючы агент ЭДТА, соль гуанідыну (напрыклад, ізатыяцыянат гуанідыну, гідрахларыд гуанідыну і г.д.), аніённыя павярхоўна-актыўныя рэчывы (напрыклад, дадэкансульфат натрыю), катыённыя павярхоўна-актыўныя рэчывы (напрыклад, аксалат тэтрадэцылтрыметыламонію), фенол, 8-гідраксіхіналін, дытыятрэйтол (ДТТ), пратэіназа К і іншыя кампаненты. Гэты раствор для захоўвання прызначаны для непасрэднага расшчаплення віруса, вызвалення нуклеінавай кіслаты і выдалення РНКазы. Калі ён выкарыстоўваецца толькі для RT-PCR, ён больш падыходзіць, але лізат можа інактываваць вірус. Гэты тып узору нельга выкарыстоўваць для падзелу вірусных культур.
У якасці хелаціруючага агента для іёнаў металаў, які выкарыстоўваецца ў растворы для кансервацыі вірусаў, рэкамендуецца выкарыстоўваць солі ЭДТА (напрыклад, дыкалій-этылендыамінтэтраацэтатную кіслату, дынатрый-этылендыамінтэтраацэтатную кіслату і г.д.), і не рэкамендуецца выкарыстоўваць гепарын (напрыклад, гепарын натрыю, гепарын літыю), каб не паўплываць на выяўленне ПЦР.
3. Прабірка для захоўвання: Матэрыял прабіркі для захоўвання варта выбіраць старанна. Ёсць дадзеныя, якія сведчаць аб тым, што поліпрапілен (паліпрапілен) звязаны з адсорбцыяй нуклеінавых кіслот, асабліва пры высокай канцэнтрацыі іонаў напружання, таму поліэтылен (паліэтылен) больш пераважны, чым поліпрапілен (паліпрапілен). ДНК/РНК лёгка ўтрымліваць. Для захоўвання ДНК/РНК больш падыходзяць кантэйнеры з поліэтылен-прапілену (поліаламер) і некаторыя спецыяльна апрацаваныя поліпрапіленавыя (паліпрапіленавыя) пластыкавыя кантэйнеры больш падыходзяць для захоўвання ДНК/РНК. Акрамя таго, пры выкарыстанні ламанага тампона варта выбіраць кантэйнер вышынёй больш за 8 см, каб прадухіліць разбрызгванне і забруджванне змесціва пры разбіцці тампона.
4. Вада для вытворчага кансервацыйнага раствора: Ультрачыстую ваду, якая выкарыстоўваецца для вытворчага кансервацыйнага раствора, неабходна фільтраваць праз ультрафільтрацыйную мембрану з малекулярнай масай 13 000, каб забяспечыць выдаленне палімерных прымешак з біялагічных крыніц, такіх як РНКаза, ДНКаза і эндатаксін, і звычайная ачыстка не рэкамендуецца. Вада або дыстыляваная вада.
2. Выкарыстанне прабірак для адбору вірусаў
Адбор проб з выкарыстаннем віруснай трубкі ў асноўным падзяляецца на адбор проб з ротаглоткі і насаглоткі:
1. Узяцце ўзору з ротаглоткі: спачатку націсніце на язык прыціскальнікам для языка, затым увядзіце галоўку тампона ў горла, каб выцерці двухбаковыя глоточныя міндаліны і заднюю сценку глоткі, і злёгку вытрыце заднюю сценку глоткі, не дакранаючыся да язычка.
2. Узяцце пробы з насаглоткі: вымерайце адлегласць ад кончыка носа да мочкі вуха тампонам і адзначце пальцам, увядзіце тампон для ўзяцця пробы ў насавую поласць у напрамку вертыкальнага становішча носа (твару), тампон павінен дасягаць не менш за палову даўжыні мочкі вуха да кончыка носа, пакіньце тампон у носе на 15-30 секунд, акуратна павярніце 3-5 разоў і выміце тампон.
Зыходзячы са спосабу выкарыстання, няцяжка зразумець, ці гэта мазок з ротаглоткі, ці з насаглоткі, бо ўзяцце проб — гэта тэхнічная задача, якая з'яўляецца складанай і забрудняе забруджванне. Якасць сабранага ўзору непасрэдна звязана з наступным выяўленнем. Калі сабраны ўзор мае нізкую вірусную нагрузку, лёгка атрымаць ілжываадмоўныя вынікі, што абцяжарвае пацверджанне дыягназу.
Час публікацыі: 21 чэрвеня 2020 г.
