عدة أفكار حول أنبوب أخذ العينات الفيروسية

1. حول تصنيع أنابيب أخذ العينات الفيروسية
تُصنّف أنابيب أخذ عينات الفيروسات ضمن منتجات الأجهزة الطبية. معظم المصنّعين المحليين مُسجّلون ضمن فئة المنتجات من الدرجة الأولى، وقليل منهم مُسجّل ضمن فئة المنتجات من الدرجة الثانية. في الآونة الأخيرة، ولتلبية احتياجات الطوارئ في ووهان وغيرها، لجأت العديد من الشركات إلى "قناة الطوارئ" للحصول على تصريح تسجيل من الدرجة الأولى. يتكون أنبوب أخذ عينات الفيروسات من مسحة أخذ عينات، ومحلول حفظ الفيروس، وعبوة خارجية. ونظرًا لعدم وجود معيار وطني أو معيار صناعي موحّد، تتفاوت منتجات مختلف المصنّعين بشكل كبير.

١. مسحة أخذ العينات: تتصل مسحة أخذ العينات مباشرةً بموقع أخذ العينات، وترتبط مادة رأس المسحة ارتباطًا وثيقًا بالكشف اللاحق. يجب أن يكون رأس المسحة مصنوعًا من ألياف البوليستر (PE) الاصطناعية أو الرايون (ألياف صناعية). لا يمكن استخدام إسفنج ألجينات الكالسيوم أو أعواد الخشب (بما في ذلك أعواد الخيزران)، ولا يمكن أن تكون مادة رأس المسحة من المنتجات القطنية. نظرًا لأن ألياف القطن تتميز بامتصاص قوي للبروتين، يصعب شطفها في محلول التخزين اللاحق؛ وعند كسر عصا خشبية أو عصا خيزران تحتوي على ألجينات الكالسيوم ومكونات خشبية، فإن نقعها في محلول التخزين سيمتص البروتين أيضًا، وقد يمنع تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل اللاحق. يُنصح باستخدام ألياف صناعية مثل ألياف البولي إيثيلين وألياف البوليستر وألياف البولي بروبيلين لمادة رأس المسحة. لا يُنصح باستخدام الألياف الطبيعية مثل القطن. لا يُنصح أيضًا باستخدام ألياف النايلون لأن ألياف النايلون (على غرار رؤوس فرشاة الأسنان) تمتص الماء. رديئة، مما يؤدي إلى عدم كفاية حجم أخذ العينات، مما يؤثر على معدل الكشف. يُحظر استخدام إسفنجة ألجينات الكالسيوم لمادة مسحة أخذ العينات! مقبض المسحة له نوعان: مكسور ومدمج. توضع المسحة المكسورة في أنبوب التخزين بعد أخذ العينات، وينكسر غطاء الأنبوب بعد كسره من الموضع بالقرب من رأس أخذ العينات؛ تضع المسحة المدمجة مسحة أخذ العينات مباشرة في أنبوب التخزين بعد أخذ العينات، ويكون غطاء أنبوب التخزين مدمجًا قم بمحاذاة الفتحة الصغيرة مع الجزء العلوي من المقبض وشد غطاء الأنبوب. بمقارنة الطريقتين، فإن الأخيرة آمنة نسبيًا. عند استخدام المسحة المكسورة مع أنبوب تخزين أصغر حجمًا، فقد يتسبب ذلك في تناثر السائل في الأنبوب عند كسره، ويجب الانتباه الكامل إلى خطر التلوث الناتج عن الاستخدام غير السليم للمنتج. يُنصح باستخدام أنبوب مجوف من البوليسترين (PS) أو أنبوب حقن من البولي بروبيلين (PP) لمقبض المسحة. بغض النظر عن المادة المستخدمة، لا يُسمح بإضافة إضافات ألجينات الكالسيوم، سواءً كانت أعوادًا خشبية أو أعواد خيزران. باختصار، يجب أن تضمن مسحة أخذ العينات كمية العينة وكمية التسرب، ويجب ألا تحتوي المواد المختارة على مواد تؤثر على نتائج الاختبار اللاحقة.

2. محلول الحفاظ على الفيروسات: هناك نوعان من محاليل الحفاظ على الفيروسات المستخدمة على نطاق واسع في السوق، الأول هو محلول صيانة الفيروس المعدل على أساس وسيط النقل، والآخر هو محلول معدل لمحلل استخراج الأحماض النووية.
المكون الرئيسي للأول هو وسط زراعة إيجل الأساسي (MEM) أو ملح هانك المتوازن، والذي يُضاف إليه الأملاح والأحماض الأمينية والفيتامينات والجلوكوز والبروتين اللازم لبقاء الفيروس. يستخدم محلول التخزين هذا ملح الفينول الأحمر الصوديوم كمؤشر ومحلول. عندما تكون قيمة الرقم الهيدروجيني 6.6-8.0، يكون المحلول وردي اللون. تُضاف الجلوكوز وL-جلوتامين والبروتين اللازمين إلى محلول الحفظ. يُوفر البروتين على شكل مصل جنين بقري أو ألبومين مصل بقري، والذي يمكن أن يُثبت الغلاف البروتيني للفيروس. نظرًا لأن محلول الحفظ غني بالعناصر الغذائية، فإنه يُساعد على بقاء الفيروس ولكنه مفيد أيضًا لنمو البكتيريا. إذا كان محلول الحفظ ملوثًا بالبكتيريا، فسوف تتكاثر بكميات كبيرة. سيتسبب ثاني أكسيد الكربون الموجود في مستقلباته في انخفاض درجة حموضة محلول الحفظ من اللون الوردي إلى الأصفر. لذلك، أضافت معظم الشركات المصنعة مكونات مضادة للبكتيريا إلى تركيباتها. العوامل المضادة للبكتيريا الموصى بها هي البنسلين، والستربتومايسين، والجنتاميسين، والبوليميكسين ب. لا يُنصح باستخدام أزيد الصوديوم و2-ميثيل. مثبطات مثل 4-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون (MCI) و5-كلورو-2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون (CMCI) نظرًا لتأثيرها على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). بما أن العينة المُقدمة من محلول الحفظ هذا هي في الأساس فيروس حي، يُمكن الحفاظ على أصالة العينة إلى أقصى حد، ويمكن استخدامها ليس فقط لاستخراج الأحماض النووية للفيروس والكشف عنها، ولكن أيضًا لزراعة الفيروسات وعزلها. مع ذلك، تجدر الإشارة إلى أنه عند استخدامها للكشف، يجب إجراء استخراج الأحماض النووية وتنقيتها بعد إبطال مفعولها.
نوع آخر من محاليل الحفظ المُحضرة بناءً على مُحلل استخلاص الأحماض النووية، يتكون من أملاح متوازنة، عامل استخلاب EDTA، ملح غوانيدين (مثل إيزوثيوسيانات غوانيدين، وهيدروكلوريد غوانيدين، إلخ)، مواد فعالة سطحية أنيونية (مثل كبريتات الصوديوم دوديكان)، مواد فعالة سطحية كاتيونية (مثل أكسالات رباعي ديسيل ثلاثي ميثيل أمونيوم)، فينول، 8-هيدروكسي كينولين، ثنائي ثيوثريتول (DTT)، بروتيناز K، ومكونات أخرى. يُستخدم هذا المحلول التخزيني لفصل الفيروس مباشرةً لإطلاق الحمض النووي والقضاء على إنزيم الريبونوكلياز. يُعدّ هذا المحلول أكثر ملاءمةً لتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) فقط، ولكن يُمكن للمُحلل أن يُعطّل الفيروس. لا يُستخدم هذا النوع من العينات لفصل مزارع الفيروسات.

يوصى باستخدام عامل التخلب الأيوني المعدني المستخدم في محلول الحفاظ على الفيروس باستخدام أملاح EDTA (مثل حمض ثنائي بوتاسيوم إيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك، وحمض ثنائي صوديوم إيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك، وما إلى ذلك)، ولا يوصى باستخدام الهيبارين (مثل هيبارين الصوديوم، هيبارين الليثيوم)، حتى لا يؤثر على كشف تفاعل البوليميراز المتسلسل.
٣. أنبوب الحفظ: يجب اختيار مادة أنبوب الحفظ بعناية. تشير البيانات إلى أن البولي بروبيلين (البولي بروبيلين) مرتبط بامتصاص الأحماض النووية، خاصةً عند تركيز أيونات التوتر العالي. يُفضل استخدام البولي إيثيلين (البولي إيثيلين) على البولي بروبيلين. يتميز بسهولة امتصاص الحمض النووي (DNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA). يُعدّ البلاستيك المصنوع من بولي إيثيلين-بروبيلين (بولي ألومير) وبعض الحاويات البلاستيكية المصنوعة من البولي بروبيلين المُعالجة خصيصًا أكثر ملاءمة لتخزين الحمض النووي (DNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA). بالإضافة إلى ذلك، عند استخدام مسحة قابلة للكسر، يُنصح باختيار حاوية يزيد ارتفاعها عن ٨ سم لمنع تناثر المحتويات وتلوثها عند كسر المسحة.

٤. ماء محلول حفظ الإنتاج: يجب ترشيح الماء فائق النقاء المستخدم في محلول حفظ الإنتاج عبر غشاء ترشيح فائق بوزن جزيئي ١٣٠٠٠ لضمان إزالة شوائب البوليمر من المصادر البيولوجية، مثل RNase وDNase وendotoxin، ولا يُنصح بالتنقية العادية. يُفضل استخدام الماء أو الماء المقطر.

2. استخدام أنابيب أخذ العينات الفيروسية

تنقسم عملية أخذ العينات باستخدام أنبوب أخذ العينات الفيروسية بشكل أساسي إلى أخذ عينات من البلعوم الفموي وأخذ عينات من البلعوم الأنفي:

1. أخذ العينات من البلعوم الفموي: اضغط أولاً على اللسان باستخدام خافض اللسان، ثم قم بتمديد رأس مسحة العينة إلى الحلق لمسح اللوزتين البلعوميتين الثنائيتين والجدار البلعومي الخلفي، وامسح الجدار البلعومي الخلفي بقوة خفيفة، وتجنب لمس وحدة اللسان.

2. أخذ العينات من البلعوم الأنفي: قم بقياس المسافة من طرف الأنف إلى شحمة الأذن باستخدام مسحة وقم بوضع علامة عليها بإصبعك، ثم أدخل مسحة العينة في تجويف الأنف في اتجاه الأنف العمودي (الوجه)، ويجب أن تمتد المسحة على الأقل نصف طول شحمة الأذن إلى طرف الأنف، اترك المسحة في الأنف لمدة 15-30 ثانية، وقم بتدويرها بلطف 3-5 مرات، ثم اسحب المسحة.
من السهل معرفة ذلك من طريقة الاستخدام، سواءً كانت مسحة من البلعوم الفموي أو البلعوم الأنفي، إذ يُعدّ أخذ العينات مهمةً فنيةً شاقةً وملوثةً. وترتبط جودة العينة المأخوذة ارتباطًا مباشرًا بالكشف اللاحق. فإذا كانت العينة المأخوذة تحتوي على حمولة فيروسية منخفضة، فمن السهل أن تُسبب نتائج سلبية خاطئة، مما يُصعّب تأكيد التشخيص.