عدة أفكار حول أنبوب أخذ عينات الفيروسات

1. حول تصنيع أنابيب أخذ عينات الفيروسات
تُصنّف أنابيب أخذ عينات الفيروسات ضمن منتجات الأجهزة الطبية. معظم الشركات المصنّعة المحلية مسجلة وفقًا لمعايير الفئة الأولى، بينما عدد قليل منها مسجل وفقًا لمعايير الفئة الثانية. ومؤخرًا، ولتلبية الاحتياجات الطارئة في ووهان وغيرها من المناطق، لجأت العديد من الشركات إلى "المسار الطارئ" للحصول على ترخيص تسجيل الفئة الأولى. يتكون أنبوب أخذ عينات الفيروسات من مسحة لأخذ العينة، ومحلول لحفظ الفيروس، وغلاف خارجي. ونظرًا لعدم وجود معيار وطني أو معيار صناعي موحد، تتباين منتجات الشركات المصنّعة بشكل كبير.

1. مسحة أخذ العينات: تلامس مسحة أخذ العينات موقع أخذ العينات مباشرةً، وترتبط مادة رأس المسحة ارتباطًا وثيقًا بالكشف اللاحق. يجب أن يكون رأس مسحة أخذ العينات مصنوعًا من ألياف البوليستر (PE) الاصطناعية أو الرايون (ألياف صناعية). لا يمكن استخدام مسحات إسفنجية من ألجينات الكالسيوم أو مسحات مصنوعة من أعواد خشبية (بما في ذلك أعواد الخيزران)، كما لا يمكن أن تكون مادة رأس المسحة قطنية. نظرًا لأن ألياف القطن تمتص البروتين بقوة، فإنه يصعب إذابتها في محلول التخزين اللاحق؛ وعندما ينكسر عود خشبي أو عود من الخيزران يحتوي على ألجينات الكالسيوم ومكونات خشبية، فإن نقعه في محلول التخزين سيمتص البروتين أيضًا، بل وقد يثبط تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) اللاحق. يُوصى باستخدام ألياف اصطناعية مثل ألياف البوليستر والبولي بروبيلين لصنع رأس المسحة. لا يُوصى باستخدام الألياف الطبيعية مثل القطن. كما لا يُوصى باستخدام ألياف النايلون لأنها (مثل رؤوس فرشاة الأسنان) تمتص الماء. يؤدي ضعف الأداء إلى عدم كفاية حجم العينة، مما يؤثر على معدل الكشف. يُمنع استخدام إسفنجة ألجينات الكالسيوم كمادة لمسحة العينة! يوجد نوعان من مقابض المسحات: المكسورة والمدمجة. توضع المسحة المكسورة في أنبوب التخزين بعد أخذ العينة، ويُكسر غطاء الأنبوب من الموضع القريب من رأس المسحة. أما المسحة المدمجة، فتوضع مباشرةً في أنبوب التخزين بعد أخذ العينة، ويُحاذى غطاء الأنبوب المدمج مع الفتحة الصغيرة في أعلى المقبض، ثم يُحكم إغلاق الغطاء. بالمقارنة بين الطريقتين، تُعد الطريقة الثانية أكثر أمانًا. عند استخدام المسحة المكسورة مع أنبوب تخزين صغير الحجم، قد يتسبب كسرها في تناثر السائل داخل الأنبوب، لذا يجب توخي الحذر الشديد من خطر التلوث الناتج عن سوء استخدام المنتج. يُوصى باستخدام أنبوب مجوف من البوليسترين (PS) المبثوق أو أنبوب من البولي بروبيلين (PP) المُشكّل بالحقن لمقبض المسحة. بغض النظر عن المادة المستخدمة، لا يُسمح بإضافة أي مواد مضافة من ألجينات الكالسيوم؛ سواء كانت أعوادًا خشبية أو أعوادًا من الخيزران. باختصار، يجب أن تضمن مسحة أخذ العينات كمية العينة وكمية المادة المُفرزة، ويجب ألا تحتوي المواد المختارة على أي مواد تؤثر على الاختبارات اللاحقة.

2. محلول حفظ الفيروسات: هناك نوعان من محاليل حفظ الفيروسات المستخدمة على نطاق واسع في السوق، أحدهما محلول حفظ الفيروسات المعدل بناءً على وسط النقل، والآخر محلول معدل لاستخلاص الحمض النووي.
المكون الرئيسي للمحلول الأول هو وسط إيجل الأساسي للزراعة (MEM) أو محلول هانكس الملحي المتوازن، والذي يُضاف إليه الأملاح والأحماض الأمينية والفيتامينات والجلوكوز والبروتين اللازمة لبقاء الفيروس. يستخدم هذا المحلول ملح الصوديوم للفينول الأحمر كمؤشر. عندما تتراوح قيمة الرقم الهيدروجيني بين 6.6 و8.0، يكون لون المحلول ورديًا. يُضاف الجلوكوز والجلوتامين والبروتين اللازمين إلى محلول الحفظ. يُوفر البروتين على شكل مصل جنيني بقري أو ألبومين مصل بقري، مما يُساعد على تثبيت الغلاف البروتيني للفيروس. نظرًا لغنى محلول الحفظ بالعناصر الغذائية، فإنه يُساعد على بقاء الفيروس ولكنه يُفيد أيضًا نمو البكتيريا. إذا تلوث محلول الحفظ بالبكتيريا، فإنها ستتكاثر بكميات كبيرة. سيؤدي ثاني أكسيد الكربون الموجود في نواتج أيضها إلى انخفاض الرقم الهيدروجيني لمحلول الحفظ من اللون الوردي إلى الأصفر. لذلك، أضاف معظم المصنّعين مكونات مضادة للبكتيريا إلى تركيباتهم. المضادات الحيوية الموصى بها هي البنسلين، والستربتومايسين، والجنتاميسين، والبوليميكسين ب. لا يُنصح باستخدام أزيد الصوديوم أو 2-ميثيل. كما لا يُنصح باستخدام مثبطات مثل 4-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون (MCI) و5-كلورو-2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون (CMCI) لأن هذه المكونات تؤثر على تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR). بما أن العينة التي يوفرها هذا المحلول الحافظ هي في الأساس فيروس حي، فإنه يحافظ على أصالة العينة إلى أقصى حد، ويمكن استخدامه ليس فقط لاستخلاص الأحماض النووية الفيروسية والكشف عنها، بل أيضًا لزراعة الفيروسات وعزلها. مع ذلك، تجدر الإشارة إلى أنه عند استخدامه للكشف، يجب إجراء استخلاص الأحماض النووية وتنقيها بعد تعطيل الفيروس.
نوع آخر من محاليل الحفظ يُحضّر بناءً على مستخلص الحمض النووي، وتتكون مكوناته الرئيسية من أملاح متوازنة، وعامل استخلاب EDTA، وملح الغوانيدين (مثل إيزوثيوسيانات الغوانيدين، وهيدروكلوريد الغوانيدين، إلخ)، ومادة خافضة للتوتر السطحي أنيونية (مثل دوديكان كبريتات الصوديوم)، ومواد خافضة للتوتر السطحي كاتيونية (مثل أكسالات رباعي ديسيل تريميثيل الأمونيوم)، وفينول، و8-هيدروكسي كينولين، وديثيوثريتول (DTT)، وبروتياز K، ومكونات أخرى. يعمل هذا المحلول على شطر الفيروس مباشرةً لتحرير الحمض النووي والقضاء على إنزيم RNase. يُعدّ هذا المحلول مناسبًا للاستخدام في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) فقط، ولكن قد يؤدي المستخلص إلى تعطيل الفيروس. لا يُمكن استخدام هذا النوع من العينات لفصل الفيروسات في المزارع الخلوية.

يوصى باستخدام أملاح EDTA (مثل حمض ثنائي بوتاسيوم إيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك، وحمض ثنائي صوديوم إيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك، وما إلى ذلك) كعامل مخلب لأيونات المعادن المستخدم في محلول حفظ الفيروس، ولا يوصى باستخدام الهيبارين (مثل هيبارين الصوديوم، وهيبارين الليثيوم)، وذلك حتى لا يؤثر على كشف PCR.
3. أنبوب الحفظ: يجب اختيار مادة أنبوب الحفظ بعناية. تشير البيانات إلى أن البولي بروبيلين يرتبط بامتصاص الأحماض النووية، خاصةً عند تركيز أيوني عالٍ، لذا يُفضل استخدام البولي إيثيلين لسهولة امتصاص الحمض النووي DNA/RNA. يُعد بلاستيك بوليمر البولي إيثيلين-بروبيلين (بولي ألومر) وبعض عبوات البولي بروبيلين المُعالجة خصيصًا أكثر ملاءمةً لتخزين الحمض النووي DNA/RNA. بالإضافة إلى ذلك، عند استخدام مسحة قابلة للكسر، يُنصح باختيار أنبوب حفظ بارتفاع يزيد عن 8 سم لمنع تناثر المحتويات وتلوثها عند كسر المسحة.

٤. الماء المستخدم في محلول حفظ الإنتاج: يجب ترشيح الماء فائق النقاء المستخدم في محلول حفظ الإنتاج عبر غشاء ترشيح فائق بوزن جزيئي ١٣٠٠٠ لضمان إزالة الشوائب البوليمرية ذات المصادر البيولوجية، مثل RNase وDNase والسموم الداخلية، ولا يُنصح باستخدام الماء العادي أو الماء المقطر.

2. استخدام أنابيب أخذ عينات الفيروسات

ينقسم أخذ العينات باستخدام أنبوب أخذ عينات الفيروس بشكل رئيسي إلى أخذ عينات من البلعوم الفموي وأخذ عينات من البلعوم الأنفي:

1. أخذ عينة من البلعوم الفموي: اضغط أولاً على اللسان باستخدام خافض اللسان، ثم قم بتمديد رأس مسحة أخذ العينات إلى الحلق لمسح اللوزتين البلعوميتين والجدار البلعومي الخلفي، وامسح الجدار البلعومي الخلفي بقوة خفيفة، وتجنب لمس وحدة اللسان.

2. أخذ عينة من البلعوم الأنفي: قم بقياس المسافة من طرف الأنف إلى شحمة الأذن باستخدام مسحة وقم بوضع علامة بإصبعك، أدخل مسحة أخذ العينات في تجويف الأنف في اتجاه الأنف العمودي (الوجه)، يجب أن تمتد المسحة على الأقل نصف طول شحمة الأذن إلى طرف الأنف، اترك المسحة في الأنف لمدة 15-30 ثانية، قم بتدويرها برفق 3-5 مرات، ثم اسحب المسحة.
يتضح من طريقة الاستخدام، سواء كانت مسحة من البلعوم الفموي أو مسحة من البلعوم الأنفي، أن أخذ العينات عملية فنية معقدة وعرضة للتلوث. وترتبط جودة العينة المجمعة ارتباطًا مباشرًا بالكشف اللاحق. فإذا كانت العينة المجمعة ذات حمولة فيروسية منخفضة، فمن السهل الحصول على نتائج سلبية خاطئة، مما يصعب تأكيد التشخيص.