1. Oor die vervaardiging van virusmonsterbuise
Virusmonsterbuise behoort aan mediese toestelprodukte. Die meeste binnelandse vervaardigers is geregistreer volgens die eersteklasprodukte, en min maatskappye is geregistreer volgens die tweedeklasprodukte. Onlangs, om aan die noodbehoeftes van Wuhan en ander plekke te voldoen, het baie maatskappye die "noodkanaal" geneem om aansoek te doen vir die eersteklas-rekordtoestemming. Die virusmonsterbuis bestaan uit 'n monsternemingsdepper, virusbewaringsoplossing en buitenste verpakking. Aangesien daar geen verenigde nasionale standaard of bedryfstandaard is nie, verskil die produkte van verskillende vervaardigers baie.
1. Monsternemingsdepper: Die monsternemingsdepper raak direk aan die monsternemingsplek, en die materiaal van die monsternemingskop hou nou verband met die daaropvolgende opsporing. Die monsternemingsdepperkop moet van poliëster (PE) sintetiese vesel of rayon (mensgemaakte vesel) gemaak wees. Kalsiumalginaatspons- of houtstokkiesdeppers (insluitend bamboesstokkies) kan nie gebruik word nie, en die materiaal van die depperkop kan nie katoenprodukte wees nie. Omdat katoenvesel 'n sterk adsorpsie van proteïene het, is dit nie maklik om in die daaropvolgende bergingsoplossing te elueer nie; en wanneer 'n houtstok of bamboesstok wat kalsiumalginaat en houtkomponente bevat, gebreek word, sal week in die bergingsoplossing ook proteïene adsorbeer, en selfs dit kan die daaropvolgende PCR-reaksie inhibeer. Dit word aanbeveel om sintetiese vesels soos PE-vesel, poliëstervesel en polipropileenvesel vir die materiaal van die depperkop te gebruik. Natuurlike vesels soos katoen word nie aanbeveel nie. Nylonvesels word ook nie aanbeveel nie, want nylonvesels (soortgelyk aan tandeborselkoppe) absorbeer water. Swak, wat lei tot onvoldoende monsternemingsvolume, wat die opsporingstempo beïnvloed. Kalsiumalginaatspons is verbode vir die monsterneming van deppermateriaal! Depperhandvatsels het twee tipes: gebreek en ingebou. Die gebreekte depper word na monsterneming in die opbergbuis geplaas, en die buisdop word gebreek nadat dit van die posisie naby die monsternemingskop gebreek is; die ingeboude depper plaas die monsternemingsdepper direk in die opbergbuis na monsterneming, en die opbergbuis se deksel word ingebou. Rig die klein gaatjie met die bokant van die handvatsel en draai die buisdeksel vas. In vergelyking met die twee metodes is laasgenoemde relatief veilig. Wanneer die gebreekte depper saam met 'n kleiner opbergbuis gebruik word, kan dit veroorsaak dat vloeistof in die buis spat wanneer dit gebreek word, en volle aandag moet gegee word aan die risiko van kontaminasie wat veroorsaak word deur onbehoorlike gebruik van die produk. Dit word aanbeveel om hol polistireen (PS) geëxtrudeerde buis of polipropileen (PP) inspuitingsvoubuis te gebruik vir die materiaal van die depperhandvatsel. Ongeag watter materiaal gebruik word, kan kalsiumalginaatbymiddels nie bygevoeg word nie; houtstokkies of bamboesstokkies. Kortom, die monsternemingsdepper moet die hoeveelheid monsterneming en die hoeveelheid vrystelling verseker, en die gekose materiale moet nie stowwe bevat wat daaropvolgende toetsing beïnvloed nie.
2. Virusbewaringsoplossing: Daar is twee soorte virusbewaringsoplossings wat wyd op die mark gebruik word, een is 'n virusbewaringsoplossing wat gemodifiseer is op grond van die vervoermedium, en die ander is 'n gemodifiseerde oplossing vir nukleïensuur-ekstraksielisaat.
Die hoofkomponent van eersgenoemde is Eagle se basiese kultuurmedium (MEM) of Hank se gebalanseerde sout, waaraan die soute, aminosure, vitamiene, glukose en proteïene wat nodig is vir virusoorlewing bygevoeg word. Hierdie bergingsoplossing gebruik fenolrooi natriumsout as 'n indikator en oplossing. Wanneer die pH-waarde 6.6-8.0 is, is die oplossing pienk. Die nodige glukose, L-glutamien en proteïene word by die preserveeroplossing gevoeg. Die proteïene word voorsien in die vorm van fetale beeserum of beeserumalbumien, wat die proteïendop van die virus kan stabiliseer. Omdat die preserveeroplossing ryk is aan voedingstowwe, is dit bevorderlik vir die oorlewing van die virus, maar ook voordelig vir die groei van bakterieë. As die preserveeroplossing met bakterieë besmet is, sal dit in groot hoeveelhede vermeerder. Die koolstofdioksied in sy metaboliete sal veroorsaak dat die pH van die preserveeroplossing van pienk na geel daal. Daarom het die meeste vervaardigers antibakteriese bestanddele by hul formulerings gevoeg. Die aanbevole antibakteriese middels is penisillien, streptomisien, gentamisien en polimiksien B. Natriumasied en 2-metiel word nie aanbeveel nie. Inhibeerders soos 4-metiel-4-isotiasolien-3-oon (MCI) en 5-chloro-2-metiel-4-isotiasolien-3-oon (CMCI) word nie aanbeveel nie, want hierdie komponente het 'n effek op die PCR-reaksie. Aangesien die monster wat deur hierdie preserveeroplossing verskaf word, basies 'n lewende virus is, kan die oorspronklikheid van die monster tot die grootste mate behoue bly, en dit kan nie net gebruik word vir die ekstraksie en opsporing van virusnukleïensure nie, maar ook vir die kweek en isolasie van virusse. Daar moet egter op gelet word dat wanneer dit vir opsporing gebruik word, nukleïensuurekstraksie en -suiwering na inaktivering uitgevoer moet word.
Nog 'n soort preserveeroplossing wat voorberei word op grond van nukleïensuur-ekstraksie-lisaat, is die hoofkomponente gebalanseerde soute, EDTA-cheleermiddel, guanidien-sout (soos guanidien-isotiosianaat, guanidienhidrochloried, ens.), anioniese oppervlakaktiewe middel (soos dodekaan-natriumsulfaat), kationiese oppervlakaktiewe stowwe (soos tetradesiltrimetilammoniumoksalaat), fenol, 8-hidroksiekinolien, ditiotreitol (DTT), proteinase K en ander komponente. Hierdie bergingsoplossing is om die virus direk te kloof om die nukleïensuur vry te stel en die RNase te elimineer. As dit slegs vir RT-PCR gebruik word, is dit meer geskik, maar die lisaat kan die virus inaktiveer. Hierdie tipe monster kan nie vir viruskultuurskeiding gebruik word nie.
Dit word aanbeveel dat die metaalioon-cheleermiddel wat in die virusbewaringsoplossing gebruik word, EDTA-soute (soos dikaliumetileendiamientetraasynsuur, dinatriumetileendiamientetraasynsuur, ens.) gebruik word, en dit word nie aanbeveel om heparien (soos natriumheparien, litiumheparien) te gebruik nie, om nie PCR-opsporing te beïnvloed nie.
3. Bewaarbuis: Die materiaal van die bewaarbuis moet versigtig gekies word. Daar is data wat daarop dui dat polipropileen (Polipropileen) verband hou met die adsorpsie van nukleïensuur, veral by hoë spanningioonkonsentrasie. Poliëtileen (Poliëtileen) word meer verkies as polipropileen (Polipropileen). Maklik om DNS/RNA te gryp. Poliëtileen-propileenpolimeer (Poliallomeer) plastiek en sommige spesiaal verwerkte polipropileen (Polipropileen) plastiekhouers is meer geskik vir DNS/RNA-berging. Daarbenewens, wanneer 'n breekbare depper gebruik word, moet die bergbuis probeer om 'n houer met 'n hoogte van meer as 8 cm te kies om te verhoed dat die inhoud spat en besoedel word wanneer die depper gebreek word.
4. Water vir produksiebewaringsoplossing: Die ultrasuiwer water wat vir produksiebewaringsoplossing gebruik word, moet deur 'n ultrafiltrasiemembraan met 'n molekulêre gewig van 13 000 gefiltreer word om die verwydering van polimeer-onsuiwerhede uit biologiese bronne, soos RNase, DNase en endotoksien, te verseker, en gewone suiwering word nie aanbeveel nie. Water of gedistilleerde water.
2. Gebruik van virusmonsterbuise
Monsterneming met behulp van die virusmonsternemingsbuis word hoofsaaklik verdeel in orofaringeale monsterneming en nasofaringeale monsterneming:
1. Orofaringeale monsterneming: Druk eers die tong met die tongspatel, steek dan die kop van die monsternemingsdepper in die keel om die bilaterale faringeale mangels en posterior faringeale wand af te vee, en vee die posterior faringeale wand met ligte krag af, vermy om die tongeenheid aan te raak.
2. Nasofaryngeale monsterneming: meet die afstand vanaf die punt van die neus tot die oorlel met 'n depper en merk met 'n vinger, steek die monsternemingsdepper in die neusholte in die rigting van die vertikale neus (gesig), die depper moet ten minste die helfte van die lengte van die oorlel tot by die punt van die neus strek, los die depper vir 15-30 sekondes in die neus, draai versigtig 3-5 keer en trek die depper uit.
Dit is nie moeilik om uit die gebruiksmetode te sien of dit 'n orofaryngeale depper of 'n nasofaringeale depper is nie, monsterneming is 'n tegniese taak wat moeilik en besmet is. Die kwaliteit van die versamelde monster hou direk verband met die daaropvolgende opsporing. As die versamelde monster 'n lae viruslading het, is dit maklik om vals negatiewe te veroorsaak en moeilik om die diagnose te bevestig.
Plasingstyd: 21 Junie 2020
